Область наук:

  • фундаментальна медицина

  • Рік видавництва: 2003


    Журнал: медична імунологія


    Наукова стаття на тему 'Зміст i російсько-німецького симпозіуму «іммунобіологіі туберкульозу»'

    Текст наукової роботи на тему «Матеріали i російсько-німецького симпозіуму« іммунобіологіі туберкульозу »»

    ?Медична Імунологія 2003 Т.5, №3-4 © 2003 СПб РВ РААКІ

    ГЕНЕТИЧНИЙ КОНТРОЛЬ СПРИЙНЯТЛИВОСТІ До ТУБЕРКУЛЬОЗУ ТА ЙОГО ІМУНОЛОГІЧНІ АСПЕКТИ

    АптА.С .. РадаеваТ.В .. Никоненко Б.В., Лядова І.В., Ерусланов Є.Б., Орлова М.О., Майоров К.Б., Кондратьєва Т.к.

    Лабораторія імуногенетики ЦНДІ Туберкульозу РАМН, Москва

    Сприйнятливість до М. tuberculosis і тяжкість перебігу туберкульозного процесу знаходяться під контролем локу-сов з кількісної фенотипической експресією (quantitative trait loci - QTL). У інбредних мишей ліній I / St і A / Sn зараження мікобактеріями рріводіт, відповідно, до важкого й помірного перебігу захворювання. Ми провели в мишах ВС1 (I / St х A / Sn) х I / St і F2 (I / St х A / Sn) геномної скринінг на зчеплення двох ознак, термінів виживання (СВ) і темпу втрати ваги після зараження (ТПВ) , з маркерамі- мікросателіти. Один з QTL був картирован в дистальному ділянці довжиною 12 сМ хромосоми 3 і позначений tbsl (tuberculosis severity 1), інший QTL, tbs2, розташований в інтервалі 9 сМ в проксимальної частини хромосоми 9, третій QTL розташований в межах комплексу Н-2 в хромосомі 17 . Відмінності між аллельними варіантами tbsl і tbs2 проявляються тільки у самок, причому перший впливає тільки на ТПВ, а другий - як на ТПВ, так і на СВ. При цьому в Х-хромосомі вдається картировать ген-модифікатор, але пряме зчеплення з підлогою не підтверджується. QTL в комплексі Н-2 бере участь в контролі туберкульозного процесу у тварин обох статей. У самок гетерозиготних по tbsl і tbs2 нижче ТПВ і довше СВ, ніж у будь-який з двох гомозигот, тобто чітко проявляється перевага гетерозигот. Всі три локусу виявляють виражене епі-статичну взаємодію.

    На фенотипическом рівні міжлінійні відмінності між мишами I / St і A / Sn проявляються в характері імунної відповіді і запалення в легеневої тканини. У легких резистентних мишей A / Sn і F1 відбувається стабілізація росту мікобактерій, що збігається за часом з розвитком специфічного Т-клітинної відповіді. У легких мишей чутливої ​​лінії I / St, незважаючи на успішну активацію Т-клітин, розмноження мікобактерій наростає аж до моменту загибелі тварин. Прогресування інфекції в легенях мишей I / St, але не A / Sn і F1, супроводжується інтенсивної інфільтрацією Нейт-рофіламі і лімфоцитами CD4 + і CD8 +. Легеневі макрофаги мишей I / St набагато більш чутливі до цито-патической дії мікобактерій in vitro в порівнянні з макрофагами мишей A / Sn і F1, тоді як макрофаги мишей A / Sn продукують більше азотних радикалів і сильніше пригнічують ріст мікобактерій. Макрофаги легень здорових мишей не здатні посилювати мікобак-теріцідную активність у відповідь на стимуляцію IFN-y. Навпаки, через 3 тижні після зараження макрофаги всіх мишей набувають здатність відповідати на підвищення продуктивності лікарських IFN-y, але на цій стадії його продукція клітинами легенів у мишей I / St в 10 разів нижче, ніж у мишей A / Sn.

    ІМУНОЛОГІЧНІ КРИТЕРІЇ В ДІАГНОСТИЦІ сілікотуберкулез

    Бородулін Б.Є.

    Самарський державний медичний університет, м Самара, Росія

    Пневмоконіози є медико-біологічними факторами підвищеного ризику захворювання на туберкульоз легень, що призводить до формування коніотуберку-леза. Метою даної роботи є визначення критеріїв прогнозування розвитку туберкульозу при сілікозе.Проведени комплексні клінічно-іммунологічес-кі дослідження у 40 хворих на силікоз, 40 пацієнтів з встановленим діагнозом сілікотуберкулез. (Осередкової формі туберкульозних змін), 44 людини з вперше встановленим діагнозом вогнищевий туберкульоз легенів, 64 здорові людини без ознак ураження імунної системи - контрольна. Обстеження включало в себе стандартне клініко-рентгенологічне. Оцінка функції зовнішнього дихання проводилася шляхом аналізу кривої потік-об'єм. Імунологічні методи дослідження включали визначення субпопуляцій лімфоцитів за допомогою моноклональних антитіл, вміст імуноглобулінів А, М, G, рівні циркулюючих імунних комплексів, рівні лізоциму, 3EG5, концентрацію загального IgE в сироватці. В обробці отриманих результатів використані новітні методи статистичної обробки: дискриптивні статистика, дискримінантний та факторний аналіз.Іспользованіе традиційних методів клінічного дослідження не дозволили своєчасно діагностувати приєднання туберкульозу до силікоз і виділити значущі критерії в розвитку сілікотуберкулез.

    У пацієнтів з силікоз відмічено підвищення рівнів загального IgE, муцинового антигену 3EG5, фібронекті-на і натуральних кілерів; зниження вмісту лімфоцитів і їх основних субпопуляцій - клітин, що експресують CD3, CD4, CD20 маркери, активованих HLA-DR лімфоцитів, співвідношення CD4 / CD8 клітин, а також фагоцитарної активності лейкоцитів і активності комплементу в порівнянні з контрольною групою.

    У хворих сілікотуберкулезом аналіз показників дескриптивної статистики виявив зниження наступних параметрів імунного гомеостазу: IgM, IgA, лімфоцитів, клітин, що експресують CD16 маркер, HLA-DR лімфоцитів, активності комплементу, лізоциму, фагоцитарної активності лейкоцитів. У порівнянні з контрольною групою були підвищені рівні загального IgE, муцинового антигену 3EG5, фібронектину, лейкоцитів, Т- і В-лімфоцитів (клітин, що експресують відповідно CD3 і CD20 маркери).

    При обстеженні хворих з осередковою формою туберкульозного процесу нами були виявлені наступні особливості. Були підвищені рівні лейкоцитів, загального IgE, муцинового антигену 3EG5, фібронектину (максимальне значення з усіх груп обстежених), відзначалася активація гуморального імунітету - підвищені

    концетрации IgA і IgG в сироватці і зміст клітин, що експресують на своїй поверхні CD20 маркер. При цьому рівні лізоциму, комплементу, фагоцитарної активності лейкоцитів, а також HLA-DR лімфоцитів, клітин, що експресують CD4, CD16 маркери, були зниженими у порівнянні з контрольною групою.

    Керуючись результатами проведеного факторного і дискримінантного аналізів нами виділені найбільш значущі фактори імунного гомеостазу при сі-лікотуберкулезе. Основними ознаками можливого розвитку специфічної інфекції при силікоз є підвищення рівнів загального IgE і IgG, фібронектину, а також клітин, що експресують CD4 і CD20 маркери; зниження концентрації муцинового антигену 3EG5.

    За отриманими даними була розроблена дискримінантний модель описаних вище типів імунного статусу і створена формула для прогнозування ускладнень.

    МОДИФІКАЦІЯ мікробного та алергічного ЗАПАЛЕННЯ ДИХАЛЬНИХ ШЛЯХІВ У ХВОРИХ НА ТУБЕРКУЛЬОЗ ЖИТЕЛІВ ЧОРНОБИЛЬСЬКОГО РЕГІОНУ БІЛОРУСІ

    Борткевич Л.Г., Лавор З.В., Позднякова А.С., Кривошеєва Ж.І., Сапунова Т.А., Пашкова О.Л., Сагальчік Є.Р, Бадигіна Н.А.

    00 Білоруський зелений хрест,

    НДІ пульмонології і фтизіатрії М3,

    Мінськ, Білорусь

    Понад 2 млн. Жителів Білорусі піддаються впливу радіоізотопів, викинутих в навколишнє середовище в результаті Чорнобильської аварії. При цьому 15-25% від загальної кількості інкорпорованих радіонуклідів надходить в організм інгаляційним шляхом. Ця обставина є провідною причиною підвищення захворюваності на туберкульоз легень (ТЛ): 61.5 / 100т. в Гомельській області при 45 / 100т. по країні) серед жителів Чорнобильського регіону. Виявлено ознаки па-томорфоза захворювання, основні прояви якого характеризуються зміною клінічних симптомів. Такі ускладнення, як казеозна пневмонія, туберкульоз бронхів, неспецифічні бронхіти виявлені в групі опромінених осіб значно частіше, а саме в 18%, 42,1,42,1% в порівнянні з 9,8,33,3,31,5% відповідно ). У дітей з Чорнобильської зони для легеневого туберкульозу характерно більш частим загостренням хвороби (35,8% в порівнянні з 16,7% в контрольній групі) і ознаки інтоксикації (підвищення температури, астенія, анорексія). У переважної більшості хворих цієї групи виявлені достовірні відмінності рівнів змін гемограми; нейтрофіли, еозинофілії, лейкоцитозу, еритему-ро- і Моноцитопенія. Клітинний склад лаважу пацієнтів характеризувався вираженим дисбалансом моно- і полінуклеарів: нейтрофільно-макрофагальний індекс в 1,9 разів перевищував такий у неопромінених хворих ТЛ. Найважливішою причиною формування атипового запального процесу в патогенезі ТЛ у опроміненого контингенту є підвищення локальної активації альвеолярнихмакрофагів і епітеліальних клітин і, як наслідок, зростання продукції і концентрації у вогнищі і в бронхіальному секреті прозапальних цітокі-нів, а саме: TNF-ot, IL- 1, IL-6, IL-8. концентрації

    TNF-a в плазмі крові і лаважной рідини опромінених хворих ТЛ склали 420 і 320 пг / мл в порівнянні з 30 і 145 пг / мл в групі порівняння. Крім того, відзначено формування механізмів комплементзавісімого запалення: зростання концентрації IgM, IgGl, IgG3, СЗ. Третій механізм, що модифікує запальний процес в легеневій тканині в присутності інкорпорованих радіонуклідів, це порушення иммунорегуляции в напрямку синтезу елементів атопічного запалення. Концентрація IL-4 в лаважной рідини перевищувала таку у хворих групи порівняння в 3,4 рази, IgE в 2,2 рази. В експерименті in vitro показана здатність мінімальних концентрацій Csl37 стимулювати в культурі клітин цільної крові здорових неопромінених донорів синтез прозапальних цитокінів моноцитами, IgG4, IgE плазматичними клітинами і IL-4 Тх2 - лімфоцитами, попередньо стимульований специфічними мікобактеріальній антигенами. Т.ч., інкорпоровані в легеневої тканини радіонукліди здатні модифікувати процес запалення, викликаний мікобактеріями туберкульозу, у вигляді активації синтезу прозапальних цитокінів, залучення комплементза-вісім запальної реакції і формування атопічний алергії in loco.

    Лікарсько-СТІЙКИЙ ТУБЕРКУЛЬОЗ ЛЕГЕНІВ: ПРОБЛЕМИ ХІМІОТЕРАПІЇ

    Васильєва І. А.

    ГУ Центральний науково-дослідний інститут туберкульозу РАМН, Москва, Росія

    Мета дослідження: вивчення залежності ефективної хіміотерапії туберкульозу легенів від спектра лікарської резистентності мікобактерій туберкульозу (МБТ) у хворих .Під нашим спостереженням перебувало 164 раніше лікувалися хворих на туберкульоз легень. З них 158 (94,9%) хворих виділяли МБТ, резистентні до трьох і більше протитуберкульозних препаратів, при цьому множинна лікарська стійкість (МДР) склала 84,8%

    Дослідження показало, що діапазон лікарської чутливості МБТ визначав частоту і динаміку зникнення збудників з мокротиння. Так, при лікарської стійкості до одного і більше протитуберкульозних препаратів, крім поєднання ізоніазиду і ри-фампіціна, абаціллірованія мокротиння настало у 68,5% хворих після 3 місяців хіміотерапії та у 94,4% - після 6 місяців лікування. При лікарської стійкості до обох цих препаратів частота і швидкість зникнення МБТ з мокротиння знижувалися відповідно до 11,7% і 50,7% хворих.

    Ефективність хіміотерапії хворих на туберкульоз, що виділяли різні за спектром лікарської чутливості МБТ, не залежала від генотипического варіанту збудника: при стійкості до одного і більше хіміопрепаратів, крім поєднання ізоніазиду і рифів-піціна, припинення виділення штамів сімейства W зазначалося в 94,3%, сімейства AI - в 100,0% через 6 місяців лікування; при множинної лікарської стійкості - в 72,9 і 73,7% відповідно через 12 місяців .

    Спектр множинної лікарської стійкості в значній мірі визначає ефективність протитуберкульозної хіміотерапії. при лікарської

    стійкості до трьох препаратів (ізоніазиду, ріфампі-цину і стрептоміцину) бактеріовиділення припинилося у 90,5% хворих після 6 місяців і у всіх 100% - після 12 місяців лікування. При множинної лікарської стійкості до 5 протитуберкульозних препаратів аба-ціллірованіе у відповідний термін досягнуто у 51,3 і у 78,7% хворих, а при стійкості до 6 препаратів -не спостерігалося в жодному разі.

    Частота і терміни припинення бактеріовиділення у хворих МЛУ туберкульозом залежали також від режиму хіміотерапії. Використання комбінації 5-ти препаратів другого (резервного) ряду з самого початку інтенсивної фази хіміотерапії підвищує її ефективність у хворих на мультирезистентний туберкульоз, забезпечуючи зникнення МБТ з мокротиння у 55,3% хворих після 3 місяців і у 83,0% - після 6 місяців лікування , розсмоктування инфильтративного запалення - у 61,7 і 87,2% в ці ж терміни, в той час як при стандартному режимі хіміотерапії абаціллірованія мокротиння відзначено у 9,1 і 34,1%, інволюція специфічних змін - у 11,4 і 38 , 6% у відповідний термін.

    ПРОБЛЕМИ ЛЕКАРСТВЕННОЙ СТІЙКОСТІ мікобактерій туберкульозу

    Вишневський Б.І..

    ГУ НДІ фтизиопульмонологии МОЗ РФ, Санкт-Петербург, Росія

    Триваючий повсюдне зростання лікарської стійкості (ЛУ) мікобактерій туберкульозу (МБТ) є основною проблемою сучасної фтизіатрії. В цьому відношенні представляє безперечний інтерес досвід моніторингу ЛУ МБТ при різних локалізаціях туберкульозу, що ведеться в СПбНІІФ з 1984 р, а також дані про тенденції розвитку ЛУ МБТ в регіонах Північно-Заходу Росії.

    На територіях Північно-Заходу насамперед звертає на себе увагу стрімке зростання первинної ЛУ МБТ. За останні 10 років в більшості регіонів первинна ЛУ збільшилася в 2-3 рази, досягаючи 45,5% (Архангельська обл.), 47% (Карелія), 35% (Мурманська обл.), 39,9% (Санкт-Петербург) . Це надзвичайно тривожні тенденції, тим більше, що ще в середині 80-х років первинна Л У МБТ не перевищувала 8-12-15%. Вторинна ЛУ МБТ, що характеризує бацилярних ядро ​​в регіонах, багато років залишалася на рівні 50%, але за останні 10 років також значно зросла, перевищуючи в більшості регіонів 70-80%.

    Такі ж несприятливі тенденції спостерігаються і за даними СПбНІІФ як при туберкульозі органів дихання (ТОД), так і при позалегеневий туберкульоз (ВЛТ).

    ЛУ МБТ при ТОД в середині 80-х років становила 69% і за останні 2 роки збільшилася до 94%. При цьому відбулося різке ускладнення структури ЛУ МБТ: монорезістентность за цей період знизилася з 26 до 4,8%, а множинна ЛУ (МЛУ), тобто резистентність принаймні до ізоніазиду і рифампіцину, зросла з 42 до 59,9%.

    Аналогічні тенденції розвитку ЛУ МБТ за цей період, і навіть більш швидкими темпами, спостерігаються і при ВЛТ. Частота ЛУ МБТ зросла з 39,4 до 90%, монорезістентность в структурі ЛУ знизилася з 48,5 до 2,5%, а МЛУ збільшилася з 25 до 45,5%. Навіть беручи до

    увагу, що в СПбНІІФ знаходиться на лікуванні найбільш важкий контингент хворих, наведені дані чітко ілюструють надзвичайно небезпечні тенденції розвитку ЛУ МБТ в даний час.

    Сучасна ситуація з ЛУ МБТ загострюється ще й тією обставиною, що, за даними наших спільних досліджень з СПбНІІЕМ ім.Пастера, більше половини штамів МБТ, що циркулюють в Санкт-Петербурзі і на Північно-Заході Росії, відносяться до клональний сімейства Beijing. За нашими даними, штами МБТ сімейства Beijing в 75% є мультирезистентними, високо контагіозними, більш вірулентними і викликають більш важкий перебіг туберкульозного процесу, ніж штами індивідуальних генотипів.

    Все вищевикладене свідчить, що для стабілізації ситуації необхідне прийняття заходів епідеміологічного характеру для розділення потоків хворих, щоб уникнути нозокомиальной суперинфекции, а також розробка методів ефективного лікування полірезістен-тного туберкульозу.

    ПРОДУКЦІЯ IFNy та експресії IFNy R У ХВОРИХ НА первинних імунодефіцитів І мікобактеріальних інфекцій

    Галкіна Е.В .. ПічугінаЛ.В .. Кондратенко І.В., ПінегінБ.В.

    Російська дитяча клінічна лікарня;

    НДІ Дитячої гематології М3 РФ,

    Інститут імунології М3 РФ, Москва, Росія

    Введення: Порушення елімінації внутрішньоклітинних збудників інфекцій, в тому числі мікобактерій, виникають при багатьох формах первинних імунодефіцитів (ПІД). Найбільш яскравим прикладом вродженої недостатності протитуберкульозного імунітету є генетичні дефекти рецепторів інтерферону гамма IFNy і інтерлейкіну-12 (IL-12). Однак підвищена схильність до туберкульозу і микобактериозом зустрічається і при інших імунодефіцитах, наприклад Х-зчеплений-ном гіпер IgM-синдромі (HIGM1) і хронічної гранулематозной хвороби (CGD).

    Мета роботи: Дослідження продукції IFNy і експресії IFNyR у хворих з HIGM1 і CGD, що мали в анамнезі мікобактеріальну інфекцію, або на тлі її перебігу.

    Матеріали і методи: Діагноз ПІД поставлений на основі характерних лабораторних показників. Мікобактеріальних інфекцій підтверджена клінічно у всіх хворих, з них 3 мали морфологічне підтвердження і 1 - цитологічне. Експресію внутрішньоклітинного IFNy і його рецепторів на активованих мононуклеарами оцінювали за допомогою моноклональних антитіл на проточної цитофлюориметрії. Обстежено 5 хворих: 2 з HIGM1 і 3 з ХГБ.

    Основні результати: Серед хворих з CGD у одного діагностовано генералізований мікобактеріальних інфекцій з ураженням легень і м'яких тканин, у другого - генералізована БЦЖ інфекція, у третього

    - БЦЖ-ит з казеозной формою пахвовій лімфаденіту. Один з хворих з HIGM1 мав 3 рецидиву мико-бактеріальної інфекції з ураженням периферичних лімфовузлів і легенів, другий - міліарний туберкульоз легень. У всіх хворих відзначено стійкий клінічний ефект від специфічної терапії. У двох хворих, мавши-

    ших в момент дослідження гострий перебіг мікобактерій-альної інфекції відзначено зниження кількості CD3 клітин, що продукують внутрішньоклітинний IFNy, у трьох хворих, які перебували в ремісії мікобактеріальній-го процесу кількість СD3 IFNy клітин було нормальним. Кількість виділяється інтерферону, оцінене за інтенсивністю світіння, було однаковим в першій і другій групах. Експресія IFNyR у всіх вищеописаних хворих була в межах норми.

    Висновок. Отримані дані дозволяють припускати, що причиною розвитку МАК інфекцій у хворих з HIGM1 і CGD з'явився первинний імунологічний дефект. Транзиторне зниження кількості CD3 IFNy лімфоцитів в периферичної крові в момент гострого перебігу МАК інфекцій є, найімовірніше, результатом перерозподілу пулу IFNy-продукують CD3 клітин з переважним їх накопиченням у вогнищі запалення.

    HUMAN NKT CELLS EXPRESS GRANULYSIN AND EXHIBIT ANTIMYCOBACTERIAL ACTIVITY

    JenniferL.Gansert, Viviane KieHler, MatthiasEngele, Frederick Wittke, Martin Ru, llinghoff, Alan M. Krensky, Steven A. Porcelli, Robert L. Modlin and Steffen Stenger

    Human NKT cells are a unique subset of T cells that express an invariant Va24 T cell receptor that recognizes the non-classical antigen-presenting molecule, CDld. Activation of NKT cells is greatly augmented by the marine sponge-derived glycolipid, a-galactosyl ceramide (aGalCer). Since human monocyte-derived cells express CDld and can harbor the intracellular pathogen Mycobacterium tuberculosis, we asked whether the addition of ocGalCer could be used to induce effector functions of NKT cells against infected monocytes, macrophages, and monocyte-derived dendritic cells (Mo-DC ). NKT cells secreted IFN-y, proliferated, and exerted lytic activity in response to aGalCer-pulsed monocyte-derived cells. Importantly, aGalCer-activated NKT cells restricted the growth of intracellular M. tuberculosis in a CD ld-dependent manner. NKT cells that exhibited antimycobacterial activity also expressed granulysin, an antimicrobial peptide shown to mediate an antimycobacterial activity through perturbation of the mycobacterial surface. Degranulation of NKT cells resulted in depletion of granulysin and abrogation of antimycobacterial activity. The detection of CDld in granulomas of tuberculosis patients supports the potential interaction of NKT cells with CDld expressing cells at the site of disease activity. These studies provide evidence that aGalCer-activated CD ld-restricted T cells can participate in human host defense against M. tuberculosis infection.

    NEWVACCINATION STRATEGIES

    Leander Grode and Stefan H. E. Kaufmann *

    Vakzine Projekt Management GmbH, Schanzenkamp 7,

    D -38124 Braunschweig, Germany;

    * Max-Planck Institute for Infection Biology, Schumannstr.21 / 22, D-10117 Berlin, Germany

    Tuberculosis (ТБ) is a major threat to humans, responsible for more deaths than any other single infectious disease. The only vaccine currently available against ТВ was discovered in the early 20th century. In 1908 the most

    promising steps towards an ТВ vaccine were made by Albert Calmette and Camille Guerin. They developed the most wildly used live vaccine ever, Mycobacterium bovis "Bacille Calmette-Guerin (BCG). Over two billion people have been vaccinated since. It is safe to use and cheap to produce, but there have been increasing doubts about its effectiveness.

    M. tuberculosis belongs to the group of intracellular bacteria that replicate within the phagosome of resting macrophages, thus protection against ТВ depends on T cell-mediated immunity. Several studies in mice and humans, have shown that mycobacteria stimulate antigen-specific, major histocompatibility complex (MHC) class Il-or Class I-restricted CD4 and CD8 T cells, respectively. M. tuberculosis antigen gain better access to the cytoplasm than antigens from BCG leading to more pronounced MHC class I presentation. Therefore, a more effective CD8 T cell response is required for an improved ТВ vaccine.

    Secreted proteins of M. tuberculosis represents a good source of antigens for MHC class I presentation. Recombinant (r) BCG strains secreting hemolytically active listeriolysin (Hly) were constructed to promote delivery of mycobacterial antigens to the MHC class I presentation pathway, with the ultimate aim to enhance the antituberculosis vaccine efficacy of BCG by improved stimulation of CD8 T cells.

    ВИВЧЕННЯ ФУНКЦІОНАЛЬНОГО СТАНУ ЛІМФОЦИТІВ ПРІТУБЕРКУЛЕЗЕУВІЧ-ІНФІКОВАНИХ

    Дьогтєв О.Ю.

    Державна медична академія, науково-дослідний центр, Караганда, Казахстан

    В даний час ВІЛ інфекція стала глобальною проблемою всього світу. З кожним роком стає все більше ВІЛ-інфікованих людей, у яких ослаблена імунна система не може витримувати натиски різних інфекційних агентів через функціональної неспроможності CD4 лімфоцитів.

    Метою роботи було вивчення особливостей функціонального стану лімфоцитів при туберкульозі у ВІЛ-інфікованих.

    Для цього використовували тест визначення антігенс-вязивающіх лімфоцитів. Цей тест застосовується при діагностиці різних інфекційних захворювань, в тому числі і туберкульозу. Даний метод заснований на тому, що при проникненні інфекційного агента в організм людини утворюються специфічні Т-ефекторні лімфоцити, які пов'язують цей антиген при безпосередньому контакті. Виділивши лімфоцити з периферичної крові і в якості антигену використовуючи спеціальний еритроцитарний діагностикум, можна провести дану реакцію in vitro.

    Були обстежені 84 ВІЛ-інфікованих, з яких у 14 був інфільтративний туберкульоз легенів, підтверджений класичним клініко-лабораторним комплексом дослідження. До контрольної групи увійшли 18 осіб з активним туберкульозом легень без ВІЛ-інфекції.

    У хворих з ВІЛ інфекцією в поєднанні з туберкульозом легень при використанні методу антігенсвя-викликають лімфоцитів діагноз туберкульозу підтвердився в 50% випадків. У контрольній групі при

    використанні цього методу захворювання підтвердилося в 95% випадків.

    Слід зазначити, що з усієї групи обстежуваних осіб помилково-позитивних реакцій при використанні даного методу не спостерігалося, що говорить про його високу специфічність.

    Таким чином, виходячи з отриманих результатів, можна зробити висновок про те, що при ВІЛ інфекції спостерігається порушення функціонального стану лімфоцитів, а саме порушення на початковому етапі імунної відповіді - зв'язування антигену лімфоцитами.

    PHAGOCYTE RESPONSES ТО MYCOBACTERIA IN GENETICALLY SUSCEPTIBLE AND RESISTANT MICE

    EruslanovE.B .. Majorov K.B., Mischenko V.V., Kondratieva Т.К., Lyadova I. V., Apt A.S.

    Laboratory for Immunogenetics,

    Central Institute for Tuberculosis, Moscow, Russia

    Previously, mice of the I / St and A / Sn inbred strains and their (A / Sn x I / St) Fl hybrids were characterized in our lab as, respectively, susceptible, intermediate and resistant regarding severity of the disease triggered by intravenous ( iv) M. tuberculosis H37Rv challenge. Naturally, mycobacteria are spreading by aerosole route and predominantly affect the respiratory tract. To mimic these conditions, we have infected I / St, A / Sn and FI mice with 103 CFUs of M. tuberculosis H37Rv via intratracheal (i. T.) Route. Mortality data obtained in i. t. challenge model confirmed a very high level of ТВ susceptibility in I / St mice. To characterize inflammatory reactions in the lungs of infected mice, suspensions of lung cells were obtained and the content of neutrophils (Ly-6G +), macrophages (F4 / 80 '), dendritic cells (CDllc +) and T cells (CD4 + and CD8 +) was assessed along the course of infection. Starting week 3 following challenge, the total number of cells, as well as the amounts of dendritic cells and T cells, in the lungs of I / St mice significantly exceeded those in the lungs of A / Sn and FI mice. Accumulation of neutrophils was registered exclusively in the lungs of former mice. Ziell-Nielsen staining of glass prints of sliced ​​lungs from infected I / St and A / Sn mice demonstrated that I / St neutrophils were associated with numerous mycobacteria, whereas no bacilli could be revealed in scarce A / Sn neutrophils.

    In the model experiments on mycobacterial phagocytosis by neutrophils in peritoneal cavity it was shown that in I / St mice neutrophil infiltration was massive, and about half of peritoneal neutrophils contained intracellular mycobacteria. By contrast, neutrophil inflammatory reaction in A / Sn mice was mild, and neutrophils phagocyted only few mycobacteria. All three basic parameters of neutrophil response to mycobacteria in this model system, i. e. neutrophil yield, percentage phagocytosis and phagocytic number, were significantly higher in I / St than in A / Sn mice.

    Earlier we reported that lung macrophages from naive I / St mice are significantly more sensitive to cytopatic effect of mycobacteria than their A / Sn counterparts. In the present study it was shown that this difference retained throughout the infection course. Remarkably, although at week 5 of infection I / St lung macrophages were readily activated for mycobacterial growth inhibition by exogenuos IFN-y, by this time point its synthesis dropped in the lungs of I / St but not A / Sn mice, and 10 fold less IFN-y were produced by the former animals. I / St lung cells produced also significantly

    less TNF-a and IL-12. Progressive suppression of type 1 cytokine production along infection course might account for a severe course of ТВ in I / St mice. In addition, a prolonged neutrophil lung inflammation, accompanied by rapid phagocytosis and temporary survival of mycobacteria in newly arriving neutrophils - the phenotype expressed exclusively in susceptible I / St mice - may form an additional niche for mycobacterial infection, thus escaping the effector macrophage activity.

    ВЗАЄМОДІЯ МАКРОФАГІВ І НЕЙТРОФІЛІВ З МІКОБАКТЕРІЯМИ У МИШЕЙ З 0ПП03ІТН0Й ЧУТЛИВІСТЮ До ТУБЕРКУЛЬОЗУ

    Ерусланова. Б .. Майоров К.Б., Міщенко В.В., Кондратьєва Т.К., Лядова І.В., АПТ А.С.

    ЦНДІ туберкульозу РАМН, лабораторія експериментальної імуногенетики,

    Москва, Росія

    У нашій роботі була досліджена чутливість до туберкульозу мишей 20-і різних інбредних ліній. Серед них найбільш чутливими до туберкульозної інфекції, викликаної внутрішньовенним введенням летальної дози мікобактерій штаму H37Rv, виявилися миші лінії I / St, а серед найбільш резистентних-миші лінії A / Sn при внутрішньовенному зараженні. Уявлялося важливим оцінити імунну відповідь в легенях чутливих і резистентних тварин при зараженні їх через респіраторний тракт.

    Дослідження течії туберкульозної інфекції після внутрішньотрахеальне введення мікобактерій показало, що, по-перше, незалежно від способу зараження миші лінії I / St зберігають високу чутливість до інфекції. Для запального процесу в легенях мишей I / St було характерно наявність вираженої запальної реакції з боку клітин запалення. Особливо слід відзначити ранню і інтенсивну інфільтрацію легеневої тканини нейтрофілами. Цитологічне дослідження відбитків легких показало, що процентний вміст поліморфноядерних лейкоцитів в легких заражених мишей I / St було достовірно вище, ніж в легенях мишей A / Sn. При цьому в легких мишей I / St в більшості нейтрофілів були виявлені мікобактерії. У нейтрофілах, в легких мишей A / Sn, мікобактерії були відсутні. При оцінці фагоцитозу мікобактерій нейтрофилами in vivo, було встановлено, що нейтрофіли I / St мають більш високий відсоток фагоцитозу і фагоцитарний індекс, в порівнянні з нейтрофілами A / Sn.

    Раніше в нашій лабораторії було показано, що макрофаги, виділені з легких незаражених мишей лінії I / St, мали набагато більш високу чутливість до цитопатичної дії мікобактерії і слабку здатність контролювати зростання мікобактерій in vitro, в порівнянні з макрофагами мишей лінії A / Sn. Дані, отримані нами, показують, що в ході туберкульозної інфекції макрофаги I / St і A / Sn зберігають первинний спектр чутливості / резистентності до зараження М. tuberculosis in vitro. У той же час в ході розвитку інфекції in vivo макрофаги легкого пробретают здатність активуватися під дією IFN-y. У присутності екзогенно доданого IFN-y макрофаги I / St не відрізняються за своїми характеристиками від макрофагів A / Sn в тестах in vitro. Отримані нами дані про вкрай низьку продукції IFN-y клітинами легкого мишей I / St свідок-

    обхідних, що дефект в продукції IFN-y на пізній стадії інфекції може лежати в основі низької антімі-кобактеріальной активності макрофагів легкого I / St і, як наслідок - високої чутливості мишей I / St до туберкульозної інфекції.

    DORMANT FORMS OF MYCOBACTERIA AND LATENT TUBERCULOSIS

    Kaprelyants A.S.

    Bach Institute of Biochemistry, Russian Academy of Sciences, Moscow

    Pathogenic Mycobacterium spp. have evolved mechanisms to ensure their survival inside the eukaryotic host. This results in a chronic form of the disease, in which bacteria may persist in vivo for protracted periods (up to decades) without causing apparent disease. It is estimated that one-third of the entire human population is latently infected with the tubercle bacillus and therefore faces a constant risk for reactivation of active disease. These bacilli presumably pass into a latent (dormant) state during which growth is either very slow or non-existent. However the existence of a dormant state for mycobacteria either in vitro or in mvo has not yet been convincingly established. The aim of the present study was to find conditions for the in vitro transition of two organisms belonging to mycobacteria (fast growing Mysmegmatis. And slow growing My. Tuberculosis) to a "non-culturable '(possibly dormant) state.

    After growth of My.smegmatis in modified Hartman's medium under specially selected conditions, and further incubation in stationary phase, there was fast decrease of the CFU count up to zero, while the total count remained similar to the initial value.

    These "non-culturable" cells could be considered as dormant as their metabolic activity (respiration and membrane energization) was very low. The viability of dormant cells could be restored (resuscitated) by incubation of cells in liquid medium supplemented by supernatant taken from growing cultures. A small protein similar to Rpf (Mukamolovaefa /., PNAS USA 95,8916-8921) appeared to be responsible for some of the activity in the culture supernatant. Genetically engineered strain of M.smegmatis produced secreted form Rpf revealed spontaneous resuscitation of "non-culturable" cells in liquid medium.

    Formation of non-culturable cells of the "Academia" strain of Mycobacterium tuberculosis was similarly observed following growth in Sauton's medium and further incubation for an extended stationary phase. This resulted in the formation, 4-5 mo. post inoculation, of a homogeneous population of ostensibly "non-culturable" cells (zero CFU). Remarkably, these cells were able to spontaneous resuscitation increased by using supernatant from an actively growing culture or Rpf. Similarly viability of populations of My. tuberculosis isolated from murine peritoneal macrophage lysates several days postinfection in vivo enhanced when the Rpf was incorporated into the liquid culture medium at picomolar concentrations.

    The "non-culturable" (dormant) cells that accumulate during prolonged stationary phase in both organisms or after surviving of My.tuberculosis inside of macrophages are small ovoid and coccoid forms with an intact permeability barrier but with undetectable respiratory activity. We consider these "non-culturable" bacteria to be dormant. The observed activity of culture supernatants and Rpf with non-culturable bacterial suspensions invites the speculation that one (or more) of the cognate My. tuberculosis Rpf-like molecule (s),

    could be involved in mechanisms of latency and reactivation of tuberculosis in vivo.

    THE IMMUNE RESPONSE TO MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS: LESSONS FOR RATIONAL VACCINE DESIGN

    Kaufmann S.H.E.

    Max-Planck-Institute for Infection Biology Schumannstr. 21/22, D-10117 Berlin, Germany

    The available vaccine against tuberculosis, BCG, protects newborns from miliary tuberculosis, but fails to prevent the most prevalent form of disease, pulmonary tuberculosis in adults. Thus: (i) Mycobacterium tuberculosis can be controlled (though not eradicated) by the immune response induced by natural infection; (Ii) BCG fails to induce a protective immune response at least in those individuals who are susceptible to tuberculosis. Acquired immunity against tuberculosis is a T cell-dependent phenomenon. The T cell system comprises distinct populations. CD4 T cells are undoubtedly of central importance for acquired resistance against tuberculosis. Antigens or M. tuberculosis also have access to MHC class I processing, probably through cross-priming. In addition, unconventional T cells also seem to participate in immunity against tuberculosis. These include CD8 T cells restricted by non-classical MHC class lb molecules, T cells restricted by group I and group IICD1 molecules and yS T cells. CD1 restricted T cells are of particular interest as they recognize glycolipids, which are abundant constituents of the mycobacterial cell wall. What can we learn for rational vaccine design? Novel vaccination strategies either focus on subunit vaccines including naked DNA-vaccines or viable attenuated vaccines. Subunit vaccination strategies are based on the assumption that one or few antigens suffice for an efficient immune response. Hence, the identification of protective antigens represents an essential prerequisite for the success of this type of vaccines. Subunit vaccines come in two forms: Protein / adjuvant formulations or naked DNA constructs. Viable attenuated vaccines are based on the assumption that multiple antigens are required for efficacious protection. Two major strategies are being pursued: Knockout mutants of M. tuberculosis and improved recombinant (r) -BCG vaccines. Crippled versions of M. tuberculosis should not only be deleted of genes involved in virulence / persistence, but also in genes that manipulate the protective immune response. Improved r-BCG should first be endowed with a higher immunogenicity and second may need a broader antigenic repertoire. Taking advantage of our increasing knowledge about the immune response to M. tuberculosis will clearly facilitate rational design of novel vaccines against one of the most frightening threats in the world, tuberculosis.

    ОЦІНКА ВПЛИВУ ІМУНОМОДУЛЯТОРА Лікопід НА ФУНКЦІОНАЛЬНУ АКТИВНІСТЬ ГРАНУЛОЦИТІВ ДОНОРІВ І ХВОРИХ НА ТУБЕРКУЛЬОЗ IN VITRO.

    КісінаТ.Е., ФрейдлінІ.С., КнорінгБ.Е., БасекТ.С., Єлькіна А.В., Андронова Т.М.

    ГУ НІІЕМ РАМН, СПб, Росія; НДІ Фтізіопул'-монолог, СПб, Росія;

    Ликопид є синтетичним аналогом універсальної структурної субодиниці клітинної стінки всіх відомих бактерій, в т. Ч. Мікобактерій, і являє

    собою глікозильований дипептид. В останні роки висловлено припущення про те, що дія ликопида, як і інших глікопептидів, що відносяться до молекул бактеріального «патерну», опосередковано через То11-по-добние рецептори (TLR). Оскільки TLR експресувати в основному на фагоцитах, в тому числі і на грануло-цітах, найбільш ймовірними клітинами-мішенями ликопида в крові є гранулоцити. Раніше нами було показано недостатність деяких функцій грануло-цитов крові хворих на туберкульоз легень. При туберкульозної інфекції ликопид використовується при лікуванні, однак порівняно мало робіт стосується вивчення впливу препарату на фагоцитирующие клітини. Метою роботи було порівняльне вивчення безпосереднього впливу ликопида на гранулоцити здорових людей і хворих на туберкульоз легень in vitro. Ми вивчали зміни функціональної активності гранулоцитів крові здорових донорів (п = 14) і хворих на туберкульоз легень (п = 17) при інкубації в присутності різних концентрацій ликопида in vitro. Як показники функціональної активності гранулоцитів оцінювали окислювальний вибух (спонтанний та індукований зи-мозаном НСТ-тест), а також фагоцитарну здатність по активності захоплення дріжджових клітин. Нами показано, що ликопид надає нормалізує, на спонтанний окислювальний вибух гранулоцитів донорів. Ликопид стимулював індукований окислювальний вибух гранулоцитів донорів, однак у 3 з 6 донорів даний ефект ликопида in vitro не виявився. Коригувальну дію ликопида на спонтанний окислювальний вибух гранулоцитів хворих проявилося у всіх хворих і не залежало від вихідних рівнів цього показника. Відносно індукованого окислювального вибуху у хворих переважав збочений відповідь на ликопид, виявлявся придушенням цієї функції. Хоча ликопид надавав в цілому стимулюючий вплив на фагоцитоз гранулоцитів, зміни фагоцитарного числа і фагоцитарного індексу в присутності ликопида в деяких випадках не спостерігалося: серед здорових донорів у 5 і 4 осіб, а серед хворих у 7 і 5 осіб відповідно. Це дозволило нам висловити припущення про існування індивідуальної чутливості гранулоцитів людей, в тому числі хворих на туберкульоз легень, до дії ликопида.

    ДИНАМІКА імунологічні ПОКАЗНИКІВ У ХВОРИХ НА ТУБЕРКУЛЬОЗ ЛЕГЕНЬ ПРИ ЛІКУВАННІ ГЛУГОКСІМОМ

    КнорінгБ.Е .. Єлькіна А.В., Аветисян А.О.

    ГУ Санкт-Петербурзький НДІ фтізіопул'монологіі МОЗ, Санкт-Петербург, Росія

    Розвиток важких форм туберкульозу супроводжується вираженими порушеннями в імунному статусі, які вимагають проведення імунокорекції. В даний час ведеться активний пошук доступних і ефективних засобів, здатних поліпшити роботу імунної системи при туберкульозі легенів. Новий вітчизняний препарат

    - метаболічний імуномодулятор Глутоксим показав високу імунологічну ефективність при вторинних імунодефіцитних станах у хворих на онкологічні захворювання. Імуномодулююча дія глутоксіма при туберкульозі легень не вивчалося.

    Метою даної роботи було дослідження впливу глутоксіма на деякі імунологічні показники у хворих на фіброзно-кавернозний туберкульоз легень. Клініко-імунологічне обстеження виконано у 92 чоловік. З них поширений процес (>6 сегментів) виявлено у 52 пацієнтів, обмежений (<= 6 сегментам) - у 40 чоловік. 47 хворих отримували глутоксім, 45 склали контрольну групу. У всіх хворих початково були ті чи інші порушення імунітету, в основному виражаються в придушенні факторів клітинної відповіді і підвищенні гуморального. Найбільш різко виражена недостатність клітинного імунітету і активація гуморального, а також зниження продукції 1Ь-2, індукованого ФГА, в поєднанні з високим синтезом при стимуляції ППД, відповідали наростанню тяжкості процесу. Препарат вводився внутрішньом'язово в дозі 60 мг щодня протягом 15 днів. Аналіз імунологічних зрушень після лікування Глутоксімом виявив чітку тенденцію до нормалізації змінених показників імунітету. Найбільш виражену стимулюючу дію глутоксім надавав на параметри клітинної ланки імунітету. Підвищення кількісних і якісних показників клітинних факторів імунітету відзначено у 60-75% хворих проти 38-52% в контролі. Початково низькі або слабо виражені показники специфічного клітинного відповіді (<5% бластів), функціональної активності лімфоцитів (<40% бластів) і продукції 1Ь-2, індукованої ФГА (<= 10 у.о.) зросли відповідно з 1,8 ± 0,24% до 3,2 ± 0,6%, з 29,3 ± 1,3% до 36,8 ± 0,2% і з 0, 85 ± 0,2 у.о. до 11,4 ± 3,6 у.о., р<0,05. Виявлений під час вступу відсоток хворих з початково зниженим вмістом СОЗ + -клітин (50% пацієнтів), значним пригніченням проліферативної активності лімфоцитів у відповідь на ППД (78,6% пацієнтів), на ФГА (45% хворих) і зниженою продукцією індукованого ФГА 1Ь- 2 (77% хворих) зменшився відповідно до 28,9, 68,6, 32,3,59,0% (р<0,05). Наростання початково низькою продукції 1Ь-2, викликане ППД, відзначено у 40% хворих контрольної групи і лише у 10% - основний. В 1,5 рази збільшилася кількість хворих з високою продукцією 1Ь-2, індукованого ФГА, і низькою у відповідь на ППД. При цьому аналогічні показники в групі контролю в ті ж терміни дослідження або залишалися без зміни, або продовжували знижуватися. Істотних відмінностей в динаміці середніх значень вмісту СБ4 '- і СБ8 + - клітин у хворих основної та контрольної груп немає. Помітного впливу глутоксіма на показники гуморального імунітету (рівень ПТАТ, імуноглобулінів, ЦВК) не виявлено.

    Найвиразніше стимулюючу дію препарату на показники клітинного імунітету проявляється у хворих з обмеженим процесом. При поширеному процесі імуномодулюючий ефект глутоксіма був значно менше. Встановлено, що у хворих з початково вираженими порушеннями в імунному статусі, відповідними тяжкості процесу, при лікуванні Глутоксімом прогресування процесу відбувається в 1,5-2 рази рідше, а стабілізація в 2-4 рази частіше, ніж у контрольній групі. Гладке післяопераційний перебіг після курсу глутоксіма спостерігалося у 82,1% хворих (у контролі у 63%). Лікування Глутоксімом ні в одному випадку не супроводжувалося розвитком ускладнень, а клінічний ефект відзначений у 51,1% випадків проти 33,3% в контролі. Таким чином, результати дослідження сві-

    чать про иммуномодулирующем дії глуток-сіма і про перспективність його використання в якості ефективного препарату, що сприяє відновленню початково низьких параметрів клітинного імунітету у хворих на фіброзно-кавернозний туберкульоз легень, переважно при обмежених процесах.

    ОСОБЛИВОСТІ ІМУННОЇ ОТВЕТАУ ХВОРИХ РІЗНИМИ ФОРМАМИ ТУБЕРКУЛЬОЗУ ЛЕГЕНЬ

    КнорінгБ.Е., Єлькіна А.В .. БасекТ.Ф .. Іванова Л.А., Арчакова Л.І., Сахарова И.Я.

    ГУ Санкт-Петербурзький

    НДІ фтизиопульмонологии МОЗ,

    Санкт-Петербург, Росія

    Виникнення і розвиток туберкульозу легенів практично завжди супроводжується явищами дисфункції з боку імунної системи. Спектр імунологічних порушень при цьому в кожному окремому випадку відрізняється великою різноманітністю.

    Справжня робота присвячена порівняльному дослідженню порушень імунітету та продукції деяких цитокінів (ІЬ-ір, ІЬ-8, Тоб-а, 1Ь-2) у хворих на туберкульоз з подальшою оцінкою їх ролі в патогенезі різних форм туберкульозу легенів.

    Клініко-імунологічне обстеження виконано у 193 хворих на активні форми туберкульозу легенів. В їх число увійшло 87 пацієнтів з інфільтративним туберкульозом легень (І.Т.), 49 - з фіброзно-кавернозний (Ф.К.Т.), 25 - з дисемінований (Д.Т.), 32 - з казеозной пневмонією (К І.П..). Виявлення найбільш значущих відмінностей в характері імунної відповіді у хворих на різні форми туберкульозу виконано при оцінці особливостей цитокинового статусу і вираженості факторів клітинного і гуморального імунітету.

    Інтенсивність вироблення цитокінів при різних варіантах перебігу туберкульозного процесу неоднозначна. Зміст і частота виявлення ІЬ-ір, індукованого ЛПС, були максимально високими при І.Т. і Д.Т. і мінімальними при К.П. Спонтанна і індукована ЛПС продукція ТОЙ-а достовірно частіше і в більш високій концентрації виявлялася у хворих Д.Т. Найнижчими ці показники були при К.П. Найбільш високий синтез 1Ь-8 зареєстрований у осіб з І.Т. легких. Найменш інтенсивна спонтанна вироблення всіх прозапальних цитокінів, відзначалася при К.П. Максимальний індекс стимуляції ІЬ-ір і ТОТ-а виявлений у хворих І.Т., мінімальний - у хворих К.П. Максимальний індекс стимуляції 1Ь-8 відзначався серед хворих К.П., мінімальний - у пацієнтів з І.Т. і Д.Т. Частота виявлення 1Ь-2 виявилася найвищою у хворих Ф.К.Т. Найбільш низький вміст 1Ь-2 відзначено у хворих К.П. Виражена активація гуморального ланки імунітету характерна для хворих Д.Т. Клітинний імунодефіцит найбільш різко був виражений у хворих К.П. Ця група пацієнтів характеризується вираженим пригніченням проліферативної активності Т-лімфоцитів, низьким вмістом Т-хелперів в поєднанні з підвищеною експресією НЬА-І + антигенів. Ф.К.Т. навпаки, відрізнявся високим вмістом зрілих Т-клітин, В-лімфоцитів, рецепторів до 1Ь-2. При І.Т. ступінь активації факторів гуморального імунітету і підвищення числа CD16 * і СБ25 + достовірно нижче, ніж при інших формах туберкульозу.

    Зміни з боку показників специфічної імунної відповіді мали місце у більшості хворих. Найбільш інтенсивне продукування ПТАТ характерно для хворих Ф.К.Т. і К.П, найменш виражене -для хворих І.Т. Низькі показники проліферативної відповіді на туберкулін значно частіше визначалися при К.П і найрідше - при Ф.К.Т. Незалежно від форми захворювання виявлено виразна залежність у змінах імунного і цитокінового статусу від ступеня тяжкості туберкульозного процесу. Тяжкість захворювання корелює зі ступенем депресії Т-клітинного імунітету і активацією гуморального ланки, пригніченням продукції IL-2, інтенсивністю синтезу прозапальних цитокінів і зменшенням співвідношення індукованої та спонтанної продукції IL-1P, TNF-a, IL-8. Відзначено значне зростання продукції IL-8 при появі деструктивних змін. Зниження продукції не тільки IL-2, а й IL-1P і TNF-a, поряд з високим рівнем IL-8, відповідає вкрай важкого стану хворих. Одночасно наростання патологічних змін у легенях відповідало підвищення рівня CD8 + -, CD25 + -, HLA-IP-клітин. Особливості імунного статусу, виявлені під час кожної з вивчених форм туберкульозу легенів, дають більш повне уявлення про патогенез захворювання. Розвиток Д.Т. і К.П. супроводжується найбільш вираженими порушеннями в системі імунітету. Для цих форм туберкульозу характерний переважно гуморальний тип імунної відповіді, що не має при туберкульозі протективного значення. Значне підвищення індексу стимуляції в продукції IL-8 вказує на суттєву роль IL-8 в патогенезі розвитку казеозний пневмонії. У хворих Ф.К.Т. поряд зі збільшенням індукованої продукції IL-8 і високого синтезу ПТАТ мають місце значно вищий специфічний клітинний відповідь і рівень продукції IL-2, які відіграють протективногороль при туберкульозі. Найменша ступінь порушень в показниках імунітету у хворих І.Т. узгоджується з меншою виразністю клініко-рентгенологічних проявів захворювання в порівнянні з іншими пацієнтами. Таким чином, наведені дані свідчать про суттєві відмінності в патогенезі формування різних форм туберкульозу легенів і про роль імунологічних механізмів у розвитку процесу.

    Протитуберкульозною вакциною НА ОСНОВІ ДЕНДРИТНИХ КЛІТИН

    Кондратьєва Т. К .. Рубакова Е. І., Петровська С. Н.

    Центральний науково-дослідний інститут туберкульозу РАМН, Москва, Росія

    Індукція протективного імунітету проти Mycobacterium tuberculosis багато в чому залежить від ефективності презентації антигену антиген-презентірующімі клітинами легенів, в результаті якої індукується специфічний Т-клітинну відповідь. Відомо, що ефективність захисту людей від легеневої форми туберкульозу єдиною наявною на сьогодні протитуберкульозної вакцини BCG не перевищує 50%, а в деяких випадках ефективність вакцинації майже нульова. Цей факт, а також зростання захворюваності на туберкульоз в усьому світі за останнє десятиліття стимулював активні пошуки більш досконалої протитуберкульозної вакцини.

    У нашій роботі ми досліджували ефективність використання дендритних клітин, навантажений рекомбінантними антигенами мікобактерій (Ag85B, ESAT6), для індукції тривалого специфічного протитуберкульозного імунітету при експериментальній туберкульозної інфекції у лінійних мишей лінії С57В1 / 6. На першому етапі роботи були вивчені умови вирощування DC з клітин кісткового мозку мишей в присутності ростового фактора GM-CSF, визначені оптимальні дози навантаження мико-бактеріальними антигенами in vitro для стимуляції імунної відповіді наївних і прімірованних Т-лімфоцитів in vivo і in vitro. За допомогою методу проточної цітофлюоро-метрії показано, що до 8-10 дня інкубації клітин кісткового мозку в присутності 200 од / мл GM-CSF і подальшої активації 50цд / мл антигену в присутності lug / мл ЛПС або 500ед / мл TNF-a на більшій частини досліджуваних клітин спостерігається високий рівень експресії маркерів активованих DC: CDllc, CDllb, антигени гістосумісності II класу, CD86. За допомогою пролиферативного тесту in vitro виявлено, що при підшкірному введенні DC, навантажених антигенами мікобактерій, індукується специфічну імунну відповідь, який зберігається не менше 3-х тижнів після імунізації. На даний момент ми вивчаємо протективний ефект вакцин на основі дендритних клітин після 2-кратної імунізації на моделі летальної туберкульозної інфекції.

    М. TUBERCULOSIS PERSISTANCEAND IMMUNE RESPONSES OF LUNG INFILTRATING LYMPHOCYTES IN HUMAN TUBERCULOSIS

    Kosmiadi G.A., Ulrichs T. *, Mishenko V.V., Gushina N.N., Kaufmann S.H.E.

    Central Research Institute for Tuberculosis RAMSci, Moscow, Russia;

    * Max Planck Institute for Infection Biology, Berlin, Germany

    Mycobacterium tuberculosis infection in man induces the disease with a wide spectrum of clinical manifestations, from asymptomatic to disseminated and rapidly progressing tuberculosis. Protective immune response in tuberculosis is associated with CD4 lymphocytes, elaborating IFNy and activating macrophage bactericidal function. However, many aspects of immune response, developing at the site of infection in human lung, as well as the effect of mycobacterial load on the immune response, are not clear. To study these we employed both immunological and bacteriological approaches.

    Lung tissue samples were obtained at surgery from patients with either tuberculoma or cavity tuberculosis and caseous pneumonia, who differ significantly in severity of disease and lung affection. Infected lung tissue was minced and the concentration of live mycobacteria (CFU per gram tissue) was determined by plating onto Dubos agar. The tissue was further digested with collagenase / DNAse, following which macrophages were obtained by adhesion to plastic surface and lymphocytes-by nylon wool column purification. Following subpopulation analysis, responses to mitogens and mycobacterial antigens were determined with lymphocytes. The macrophages were infected with 2-20-fold quantities of H37Rv strain of mycobacteria and macrophage killing effect was assessed by inhibition of 3H-uracil uptake by growing mycobacteria.

    The study showed that the mycobacterial load in the lungs of sputum-negative treated patients varied from 108

    CFU / g in caseous pneumonia to 103 CFU / g in tuberculoma patients. High levels of intralung mycobacteria correlated with the level of their multi-drug resistance. The intensity of lymphocyte and macrophage infiltration into the lung was variable, but tended to be less expressed in the cavity-adjacent areas of the lung; Intralung lymphocytes were represented mainly by CD4 cells, containing significant numbers of memory CD4 CD45R0 cells. Lymphocytes, derived from pericavital lung tissue expressed a strong spontaneous and antigen-induced response in vitro and macrophages exerted a regulatory effect onto lymphocyte responses. Bactericidal effect of lung macrophages was strongly dependent on the presence of exogenic IFNy.

    The interrelations of immune response with mycobacterial load and the severity of lung immunopathology are discussed.

    Персистенції мікобактерій туберкульозу У ЛЮДИНИ І ІМУННИЙ ВІДПОВІДЬ внутрілегочное ЛІМФОЦИТІВ

    Косміалі Г.А .. Ульріха Т. *, Міщенко В.В., Гущина М.М., Кауфманн С. *

    ГУ Центральний НДІ туберкульозу РАМН, Москва, Росія;

    * Інститут біології інфекції ім. Макса Планка, Берлін, Німеччина

    Інфекція М.tuberculosis у людини викликає захворювання з широким спектром клінічних проявів - від безсимптомного до поширеного і швидко протікає туберкульозу. Протективний імунну відповідь при туберкульозі прийнято пов'язувати з CD4 лімфоцитами, які виробляють IFNy і стимулюють бактерицидну активність макрофагів. У той же час деталі формування імунної відповіді в зоні розвитку інфекції в легкому людини, а також вплив мікобактеріаль-ної навантаження на імунну відповідь не вивчені. Для дослідження локального імунної відповіді в легенях людини ми використовували кілька методичних підходів.

    Тканина легкого отримували від хворих, що істотно розрізняються за ступенем ураження легкого - з діагнозами туберкулома, фіброзно-кавернозний туберкульоз і ка-зеозная пневмонія. З тканини робили висів на щільну живильне середовище Дюбо і визначали вміст мікобактерій в 1 г тканини (КУО / г). Далі тканину переварювали в розчині колагенази / ДНКази і з отриманої суспензії клітин виділяли лімфоцити і чисті легеневі макрофаги. Визначали субпопуляційний приналежність лімфоцитів, а також здатність до проліферативної відповіді на мітогени і антигени мікобактерій, яку враховували по включенню ЗН- тимідину. Макрофаги заражали 2 - 20 кратним кількістю М.tuberculosis лабораторного штаму H37Rv і визначали бактеріостаті-чний активність клітин з придушення включення ДТ-урацилу в зростаючі мікобактерії.

    Встановлено, що питома мікобактеріальній навантаження на легке у лікувалися хворих, що не виділяють бацили з мокротою, може становити від 108 КУО / г тканини при казеозний пневмонії до 103 КУО / г тканини при туберкул-ме, причому високий вміст мікобактерій супроводжувалося посиленням їх стійкості до протитуберкульозних препаратам. Інфільтрація легеневої тканини макрофагами і лімфоцитами варіювала і була більш виражена в зонах, віддалених від каверни. Внутрілегеневі

    лімфоцити були представлені головним чином CD4 клітинами, значна частина яких була клітинами пам'яті CD4 CD45RO. Лімфоцити, инфильтрирующие прікавернозную тканину, відрізнялися сильним спонтанним і антиген-індукованим відповіддю in vitro, а макрофаги надавали регуляторний вплив на відповідь. Бак-теріостатіческая активність легеневих макрофагів in vitro залежала від присутності екзогенного IFN-y.

    Обговорюється зв'язок імунної відповіді з мікобактеріями-альної навантаженням і виразністю туберкульозної патології легкого у людини.

    ГЕТЕРОГЕННІСТЬ ЛІМФОЦИТІВ CD4 + CD44HICD62LL0 ПРИ ОТВЕТЕ НАМІКОБАКТЕРІАЛЬНИЕ ІНФЕКЦІЇ

    Лядова І.В.1>2, Сейлз п.2, Ерусланов Б.В.2, Свейн С. Л.2 АПТ А.С.1

    1 Центральний інститут туберкульозу РАМН, Москва, Росія;

    2 Інститут Трюдо, Саранак Лейк, США

    Ефективність протекції проти інфекцій, викликаних М. tuberculosis, в значній мірі залежить від генерації клітин CD4 +, здатних продукувати IFN-y і, таким чином, стимулювати антімікобактеріаль-ву активність макрофагів. Встановлення Т-клітинно-го відповіді зазвичай реєструється по появі клітин CD4 +, що експресують фенотип клітин-ефекторів / клітин-пам'яті (CD44h'CD62Ll0 / CD45RBl0), що відповідають на стимуляцію мікобактеріальній антигенами пролиферацией, і продукують IFN-y. Взаємозв'язок між цими процесами, проте, досі остаточно не встановлена. Для її з'ясування ми використовували два експериментальних підходу.

    По-перше, ми порівнювали активацію, проліферацію і продукцію IFN-y лімфоцитами CD4 +, виділеними з легких мишей, чутливих (I / St) і резистентних (A / Sn) до інфекції, викликаної М. tuberculosis. У мишей I / St і A / Sn, заражених М. tuberculosis, відсоток лімфоцитів легкого, експресують фенотип активованих клітин (CD44hiCD62Ll0) був однаковим. Проліферативна активність Т-лімфоцитів in vitro і in vivo була вище у мишей I / St, а продукція IFN-y - у мишей A / Sn. Таким чином, була виявлена ​​дисоціація між проліферацією Т-кле-ток і їх здатністю секретувати ефекторні цітокі-ни.

    По-друге, ми безпосередньо порівнювали проліферативну активність і здатність секретувати IFN-y Т-клітин, що експресують різний поверхневий фенотип. В якості моделі використовували інфекцію М. bovis BCG у мишей C57BL / 6. Активація Т-лімфоцитів, проліферативний відповідь і секреція IFN-y реєструвалися, починаючи з 2-го тижня після зараження. Вираженою проліферативною активністю володіли тільки клітини, що мають фенотип CD44hi CD62L '°, однак, не всі вони секретувати IFN-y. Одночасна забарвлення клітин на BrdU і внутрішньоклітинні цитокіни показала, що зазначені процеси не відбуваються в клітині одночасно. Використовуючи два різні способи введення BCG (інтратра-хеально і підшкірно), ми индуцировали інфекцію М. bovis BCG з різною локалізацією (легеневої або в дренуючих лімфовузлах) і показали, що в легеневу тканину, в тому числі і при позалегеневий формі інфекції, мігрують переважно клітини CD4 +, які мають фенотип клітин-ефекторів, і продукують IFN-y. Навпаки, в лімфа-

    тичних вузлах, інфікованих BCG, скупчуються і клітини-ефектори, і «наївні» (CD44 '° CD62L +) Т-лімфоцити. Таким чином, ми продемонстрували гетерогенную природу Т-клітинної відповіді на мікобактерії, відсутність жорсткої кореляції між проліферацією Т-лімфоцитів і продукцією ними IFN-y і переважне накопичення високодиференційованих ефекторів, які продукують IFN-y, в легеневої тканини.

    TRANSCRIPTOME SIGNATURES IN HUMAN TUBERCULOSIS DISEASE

    Mollenkopf H. J.1, Jacobsen M.1, Neher A.2, Feldmann K.2, Nietfeld W.3, Schuchard J.4, Eickhoff H.5, KauftnannS.H.E.1

    1 Department of Immunology, Max Planck Institute for Infection Biology, D-10117 Berlin, Germany;

    2 Central hospital Gauting, Germany;

    3 Max Planck Institute for Molecular Genetics,

    D-14195Berlin, Germany;

    4MicroDiscovery GmbH, D-10405 Berlin, Germany;

    5 ScienionAG, D-12489 Berlin, Germany

    Mycobacterium tuberculosis is the cause for one of the most prevalent bacterial infections in humans with probably more than two billion latently infected individuals worldwide provoking about three million deaths annually. Two major obstacles hinder eradication of this disease: The lack of an effective vaccine and the long time period needed for diagnosis and chemotherapy. Vaccine candidates which show efficacy in animal models have to be tested in humans and therefore tools to assess the degree of protection evoked by vaccine candidates is absolutely needed (correlates of protection). To develop a method that meets this demand we selected a global approach using oligonucleotide micro-arrays to determine the transcriptome of freshly isolated human immune cells from ТВ patients, healthy contacts of ТВ patients, and a reference RNA-Pool. We identified discrete genes which differed significantly between patients and controls. Differentially expressed genes comprised molecules directly involved in antimicrobial host response, chemokines, and chemokine receptors. Three different types of pattern could be identified, (a) genes highly expressed only in ТВ patients, (b) molecules expressed to a lower level in Tb patients, and (c) genes strongly expressed in the RNA-Pool, less in patients and least of all in protected controls. Out data support the notion that transcriptome analysis can reveal key gene expression pattern correlated with the degree of protection against disease. Further studies are aimed at defining a custom made array for measuring correlates of protection.

    МОРФО-ФУНКЦІОНАЛЬНІ ЗМІНИ нейтрофіл ьних ГРАНУЛОЦИТІВ КРОВІ ДІТЕЙ ПРИ ПЕРВИННОМУ ТУБЕРКУЛЬОЗ

    Новикова Н.С .. Перехрест С.В., Альошина Г.М., Сахарова І.Я., Потапенко О.І., Корнєва Е.А.

    ГУ Науково-дослідний інститут експериментальної медицини РАМН, Санкт-Петербург, Росія; ГУ Санкт-Петербурзький науково-дослід-ницького інститут фтизиопульмонологии М3 РФ, Санкт-Петербург, Росія

    Питання ранньої діагностики туберкульозу та визначення лабораторних ознак, що дозволяють виявити

    групу ризику до даного захворювання, актуальні в даний час. Розвиток туберкульозного процесу залежить від стану клітинної ланки імунітету, в першу чергу, від функціональної активності макрофагів і лімфоцитів. У той же час з'являється все більше фактів на користь активної участі нейтрофільних грануло-цитов (НГ) - важливої ​​ланки природженого імунітету - в протитуберкульозної захисті організму. Морфо-функ-нальні характеристики НГ периферичної крові дорослих людей є важливим показником при діагностиці захворювань різними формами вторинного туберкульозу (Сахарова І.Я., 1993; Новикова Н.С., 2000; Шендерова Р.І., 2001). Однак немає однозначних даних

    про стан вродженого імунітету при первинному туберкульозі.

    Мета даної роботи - дослідження основних морфологічних і функціональних характеристик НГ периферичної крові при первинному туберкульозі легенів.

    Матеріалом дослідження була периферична кров дітей з туберкульозом внутрішньогрудних лімфовузлів (32 людини) у віці від 6 до 16 років. У роботі були використані наступні методи: 1) лізосомальної-ка-ції тест (ЛКТ), запропонований В.Є. Пігаревскім (1979); 2) цитологічний НСТ-тест в двох варіантах, спонтанному і стимульованому, за стандартною методикою в модифікації Ю.А. Мазінга (1995); 3) реакція фагоцитозу (В.Є. Пігаревскій, 1987). При мікроскопії-ровании переглядали 100 нейтрофілів, визначали відсоток фагоцитовані клітин, і обчислювали коефіцієнт бактерицидної активності (КБА) катіонних білків, оцінюваний в процентах, як відношення числа мертвих бактерій до їх загальної кількості. Крім того, використовували дані клінічного аналізу крові (загальна кількість лейкоцитів і лейкограма).

    В результаті були отримані наступні дані. При незначній нейтропенії і кількості лейкоцитів, що відповідає нормі, в групі хворих спостерігали зниження значення середнього цитохимического коефіцієнта (СЦК) при ЛКТ: 1,28 ± 0,16 (норма 1,56 ± 0,19). Аналіз результатів реакцій НСТ-тесту дозволив виявити досить високий рівень значень СЦК в спонтанному варіанті (0,55 ± 0,21, у порівнянні з нормою 0,15-0,25) і низький - в стимульованому варіанті (1,05 ± 0, 26 при нормі 1,5-2,0). Кількість НСТ-позитивних нейтрофілів при стимуляції зростала в 1,5-2 рази, при цьому їх відсоток значно перевищував норму: в спонтанної пробі 33-67% (норма 2-20%); в стимульованої пробі 63-95% (норма 23-32,4%). Аналіз реакцій фагоцитозу показав, що кількість фагоцитовані клітин через 1 годину інкубації зростала в порівнянні з тим же кількістю після 15 хвилин інкубації; при цьому відбувалося збільшення значень КБА (з 6,42-15,58% до 18,75-29,25%). Після 3 годин інкубації кількість фагоцитовані клітин залишалося на тому ж рівні, що і після 1 год інкубації, при продовжують зростати значеннях КБА (до 26,87-37,13%).

    Таким чином, показано, що діти з вперше виявленим первинним комплексом туберкульозу мають знижені параметри ЛКТ, підвищений рівень спонтанного НСТ-тесту і знижені показники завершеності фагоцитозу, що свідчить про знижену функціональної активності нейтрофілів. Раніше було встановлено, що діти, які мають низький рівень ЛКТ, схильні до частих захворювань дихальних шляхів, зокрема, бронхітами (Мазінг Ю.А., 1995).

    Аналіз отриманих даних дозволяє зробити припущення, що знижені показники морфо-функціо-нальної активності нейтрофілів крові можуть бути одним з факторів ризику захворювання первинним туберкульозом і часто рецидивуючими респіраторними захворюваннями.

    Робота підтримана грантом НАН України № 03-06-00140

    GENE EXPRESSION IN THE LUNGS FOLLOWING ТВ CHALLENGE: COMPARATIVE ANALYSIS IN SUSCEPTIBLE AND RESISTANT MOUSE STRAINS

    Orlova M.O., SchurrE. *, Lyadova I.V., Majorov K.B., Eruslanov E.B., Apt A.S.

    Laboratory forlmmunogenetics, Central Institute for Tuberculosis, Moscow, Russia * McGill Center for the Study of Host Resistance, Montreal, Canada

    Earlier it was shown in our laboratory that mice of I / St and A / Sn strains display, respectively, the highest and the lowest susceptibility to ТВ infection among 30 strains studied. Comparative studies in these two strains revealed the differences in survival time, lung pathology level, and bactericidal activity of macrophages. The results of [3H] -uracil assay indicated a lower level of antimycobacterial effector function of lung macrophages from susceptible I / St than from resistant A / Sn mice. A / Sn lung macrophages, being cultured in vitro, also demonstrate a 2-fold higher TNF-a and IL-12 production.

    As far as ТВ is a polygenically controlled disease, we focused our study on assessment of gene expression patterns, anticipating to find significant differences between lung macrophages from I / St and A / Sn mice. Interstitial lung macrophages obtained from lungs of non-infected mice were cultured for 24 hours with (infected) or without (control) administration of M. tuberculosis H37Rv at MOI 5: 1 and subjected to RNA extraction. Gene expression patterns in the probes were assessed using Affymetrix Genechip® U74Av2 that contain probes for approximately 12,000 mouse genes. Preliminary analysis of hybridization data indicates that the infection caused up-regulation of IL-10Ra, Csf-2, hsp70, iNOS and MMP10, but down-regulation of MMP8, genes. A 3-fold increase in post-infection IL-6 production was detected in A / Sn but not in I / St macrophages, although the general level of its expression in the latter cells was 2-fold higher. Interestingly, the most profound interstrain difference observed was that in the expression level of anti-inflammatory cytokine IL-11: non-infected I / St macrophages synthetize 30-fold more IL-11 mRNA than their A / Sn counterparts. Even though its level increased 12-fold in A / Sn macrophages following infection, it remained 2.5- and 7-fold lower than that in control and infected I / St cells, respectively.

    To confirm microarray data, TaqMan real-time PCR analysis of RNA samples obtained from the whole lung tissue of control and infected mice of these strains was performed. In contrast to the results obtained using purified lung macrophages, both MMP10 and MMP8 genes were up-regulated. The interstrain difference in the level of IL-11 expression was readily confirmed: 3 and 6-fold higher levels of corresponding mRNA were found in I / St lungs compared to control and infected A / Sn lungs, respectively. Taken together, our results provide some new insights into regulation of defensive and / or pathogenic mechanisms of

    response in the lung tissue, suggesting an important role of IL-11 and macrophage metalloproteinases, i.e. pathways that are poorly characterized yet.

    ГЕННА експресії В ЛЕГКИХ ПРИ туберкульозної інфекції: Порівняльний аналіз чутливі та резистентні ЛІНІЙ МИШЕЙ

    Орлова М.О., Шурр Е. *, Лядова І.В., Майоров К.Б., Ерусланов Є.Б., АПТ А.С.

    Лабораторія імуногенетики туберкульозу, ЦНДІ Туберкульозу РАМН, Москва, Росія

    * Центр Вивчення Резистентності Господаря, Університет МакГілл, Монреаль, Канада

    Раніше в нашій лабораторії було показано, що миші лінії I / St і A / Sn виявляють, відповідно, найбільшу і найменшу чутливість до туберкульозної інфекції серед 30 вивчених ліній. Порівняльний аналіз мишей цих двох ліній виявив відмінності в тривалості життя, тяжкості патологічних змін легень, бактерицидної активності макрофагів. Результати оцінки включення [3Н] -ураціла вказують на більш низький рівень антимікобактеріальною ефек-битим функції легеневих макрофагів чутливих мишей I / St, ніж резистентних A / Sn. Також, легеневі макрофаги A / Sn, культивовані in vitro, продукують в два рази більшу кількість TNF-a і IL-12.

    Так як туберкульоз - полигенно контрольоване захворювання, ми сфокусували наші дослідження на вивченні генної експресії, в надії знайти достовірні відмінності між легеневими макрофагами мишей ліній I / St і A / Sn. Отримані з нормальних легких інтерстиціальні макрофаги культивувалися in vitro протягом 24 годин з додаванням (заражені) або без додавання (контрольні) М. tuberculosis H37Rv з співвідношенням 5: 1 і використовувалися для отримання проб РНК. Результати за рівнями експресії генів були отримані за допомогою Affymetrix Genechip® U74Av2, що містять близько 12000 мишачих генів. Попередній аналіз даних показав, що інфекція веде до збільшення експресії генів IL-10Ra, Csf-2, hsp70, iNOS і MMP10, але зниження експресії ММР8. Також, при зараженні спостерігалося 3-кратне збільшення продукції IL-6 в макрофагах A / Sn, хоча вихідний рівень його експресії у макрофагів I / St в 2 рази вище і не змінюється після зараження. Цікаво, що найбільше міжлінійне відміну спостерігалося в рівні експресії протизапального цитокіну IL-11: не-заражені макрофаги I / St синтезують в 30 разів більше мРНК IL-11, ніж макрофаги A / Sn .Даже, незважаючи на зростання його рівня в заражених макрофагах A / Sn в 12 разів, він залишався в 2,5 і 7 разів нижче, ніж у контрольних і заражених клітин I / St відповідно.

    Для підтвердження даних, отриманих за допомогою мікрочіпів, ми провели додатковий TaqMan Real-Time PCR аналіз проб РНК, виділених з цілісних легких заражених і контрольних мишей тих же ліній мишей. На відміну від результатів, отриманих з використанням виділених легеневих макрофагів, спостерігалося збільшення експресії як ММР10 так і ММР8. Була підтверджена міжлінійні різниця в рівні IL-11: в 3 і

    6 раз більш високі рівні відповідної мРНК були знайдені в легенях мишей I / St, в порівнянні з контрольними і зараженими легкими A / Sn відповідно. Таким

    чином, наші результати народжують нові погляди на регуляцію захисного і / або патогенного механізмів імунної відповіді в легеневої тканини, припускаючи важливу роль таких поки що слабо вивчених факторів, як IL-11 і макрофагальні металлопротеінази.

    СУЧАСНИЙ СТАН І ПЕРСПЕКТИВИ ВДОСКОНАЛЕННЯ ДІАГНОСТИКИ І ЛІКУВАННЯ микобактериозом

    Оттен Т.Ф.

    ДУ «Санкт-Петербурзький НДІ фтізіопул'моно -логії МОЗ Росії»

    Мікобактеріоз - інфекційне захворювання, що викликається нетуберкульозні мікобактеріями (НТМБ). У регіоні Північно-Заходу Росії серед збудників микобактериоза (М-за) переважають М.avium комплекс, M.malmoense і Mxenopi. Для своєчасної та достовірної діагностики М-за необхідні виділення та ідентифікація збудника. НТМБ володіють високою резистентністю до більшості антибактеріальних препаратів, тому пошук нових лікарських препаратів для лікування М-за є актуальним завданням сучасної фтизіатрії.

    Мета дослідження - вдосконалення старих і розробка нових методів діагностики та лікування М-за.

    Нами розроблені 3 етапи бактеріологічного та біохімічної ідентифікації мікобактерій, що включають оптимальний набір діагностичних тестів, які дозволяють відокремити мікобактерії туберкульозного комплексу від НТМБ і ідентифікувати 10 із 18 найбільш часто зустрічаються в регіоні НТМБ. Спільно зі співробітниками НІІЕМ ім.Пастера проведена ідентифікація НТМБ за допомогою ПЛР-ріботіпірованія і ПЛР з універсальними праймерами, що дозволило дати додаткову характеристику деяких видів НТМБ. Так, підтверджена філогенетична віддаленість M.fortuitum від інших випробуваних видів, виділені істотні відмінності між M.avium і M.intracellulare, що відносяться з клінічної точки зору до одного комплексу.

    Розроблено клініко-бактеріологічні критерії діагностики М-за, в основі яких лежить одночасність появи клініко-рентгено-лабораторних ознак, характерних для мікобактеріозного процесу і виділення культури НТМБ.

    Досліджено активність левофлоксацину (препарат фторхінолонового ряду) проти 10 видів НТМБ. До критичної концентрації (10мкг / мл) були чутливі 8 з 10 випробуваних видів. 16,7% шт. M.avium і 30% M.chelonei були стійкі до цієї концентрації. Отже, ле-вофлоксацін можна розглядати як ефективний препарат в складі комбінованої терапії хворих М-зом.

    ОСОБЛИВОСТІ ІМУННОЇ ГОМЕОСТАЗУ У ХВОРИХ НА туберкульозних лімфаденітів при ХІРУРГІЧНИХ ВТРУЧАННЯХ

    Потапенко Є.І .. Баринов B.C., Прохорович Н.А., Якунова О. А., Семенченко П.В.

    ГУ Санкт-Петербурзький НДІ фтизиопульмонологии М3 РФ

    За останні роки відзначається збільшення кількості ускладнень туберкульозного лімфаденіту (тла) до

    36%, що в основному пояснюється слабким виявленням хворих у загальній лікувальній мережі і об'єктивними труднощами диференціальної діагностики TJIA.

    Специфічне ураження лімфатичних вузлів, найважливіших периферичних органів імунної системи, викликає зміни імунореактивності хворих на місцевому і системному рівнях. Поглиблене вивчення імунного гомеостазу у хворих тла при хірургічних втручаннях до теперішнього часу не проводилося.

    Метою роботи було вивчення кількісних і функціональних показників клітин імунної системи (КВО) у оперованих хворих тла. Обстежено 42 хворих (30 жінок, 12 чоловіків, середній вік 42,9 ± 2,9 років) до і через 3 міс. після операції. При вивченні динаміки імунітету особливу увагу приділили показниками КИО на специфічний антиген. Імунологічні дані зіставили з гематологічними та клінічними даними.

    Встановили, що нормальний рівень лімфоцитів (>35%), Т-клітин (>1000 в 1 мкл) і помірне вміст циркулюючих протитуберкульозних антитіл (ПТАТ в ІФА > 0,30 ед.ОП), характерні для хворих тла, що не залежать від локалізації та поширеності специфічного ураження лімфовузлів. У міру зниження ШОЕ (до операції >18 мм / год, після > 15 мм / год) відзначили падіння титру ПТАТ в ІФА до > 0,26 ед.ОП. Визначили залежність між наявністю (відсутністю) абсцедирования лімфовузлів і лабораторними показниками. До операції у хворих абсцедуюча тла (11 пацієнтів), в порівнянні з хворими без абсцедування (31), є достовірні відмінності (р<0,05) в ШОЕ (24,3 мм / год проти 15,7 мм / год), вмісті лейкоцитів (6,0-109 кл / л проти 4,6-109 кл / л), лімфоцитів (>34% проти 40%), Т-клітин (>1250 кл. проти >1550 кл.), Рівні ПТАТ в РПК (>20 у.о. проти > 14,5 у.о.) і РПГ (> 15 у.о. проти 9 у.о.). Специфічна проліферативна активність Т-клітин та зміст ПТАТ в ІФА були однакові (РБТЛ з ППД >6,0%, ІФА - 0,30-0,35 ед.ОП). В післяопераційному періоді у міру стабілізації клінічної картини захворювання і нормалізації ШОЕ у всіх хворих знижувалася специфічна проліферація Т-клітин і титрів ПТАТ в РПК і РПГ.

    Отримані нові дані показників КИО відображають початкове клінічний стан хворих тла і результати виконаного хірургічного втручання.

    LATENT AND CHRONIC FORMS OF EXPERIMENTAL TUBERCULOSIS: COMPARISON BETWEEN CORNELL-LIKE AND LOW-DOSE CHALLENGE MODELS

    Radaeva T.V .. Nikonenko B.V., Mischenko V.V., Apt A.S.

    Laboratory for Immunogenetics, Central Institute for Tuberculosis, Russian Academy of Medical Sciences, Moscow, Russia

    In adults, many cases of lung tuberculosis (ТБ) are thought to develop as a reactivation disease which occurs due to relapse of infection which initially had affected the individual during childhood. The cause of ТВ relapse remains mostly unknown, and there is no reliable experimental model that reproduces a spontaneous ТВ

    reactivation in humans as yet. In mice, the best characterized model of ТВ relapse (Cornell model) does not mimic normal physiological conditions, since it includes treatment of animals with corticosteroids following withdrawal of antibiotic therapy.

    I / St inbred mouse strain is the most susceptible among approximately 30 strains studied in our lethal ТВ infection models, regarding both the mean survival time and mycobacterial growth in spleens and lungs. On the basis of this mouse strain we have established a novel murine model of spontaneous tuberculosis reactivation in the absence of hormone treatment. Although chemotherapy resulted in a complete lack of culturable mycobacteria in lungs and spleens of mice of both I / St and B6 strains, after a 5-month "resting" period mycobacteria could be recovered from spleens of 100% of animals. In genetically susceptible mice of I / St strain mycobacterial loads were 1,000-10,000-fold higher than in more resistant B6 mice.

    Importantly, it was demonstrated that reactivation of ТВ following antibiotic treatment and "resting" period initially occurs in extrapulmonary anatomical sites, predominantly in the spleen.

    Interestingly, mice that reactivate ТВ after chemotherapy withdrawal survive much worse than their non-treated syngenic counterparts suffering chronic ТВ infection induced by an extremely low initial M. tuberculosis challenge dose (70 CFU / mouse). Despite a much lower mycobacterial burden in the group of I / St mice with reactivation ТВ (103 - 104 CFUs per lung at 5

    - 6 month following therapy withdrawal) compared to non-treated animals challenged with a low dose (106 CFUs per lung at 5 - 6 months of chronic infection), the former died, presumably of lung pathology, whereas chronically infected animals survived their 100-fold higher mycobacterial load more or less indefinetely, without much pathology in the lung tissue.

    Латентність і ХРОНІЧНА ФОРМИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ТУБЕРКУЛЬОЗУ: ПОРІВНЯННЯ МОДЕЛІ низькодозового ЗАРАЖЕННЯ І КОРНЕЛЛ-ПОДІБНОЇ МОДЕЛІ

    Радаева Т.В .. Никоненко Б.В..

    Міщенко В.В., АПТ А.С.

    Лабораторія імуногенетики, ЦНДІ туберкульозу РАМН, Москва, Росія

    Вважається, що більшість випадків туберкульозу легень у дорослих виникає внаслідок реактивації інфекції, з якою спочатку людина зустрілася ще в дитинстві. Причина реактивації туберкульозу залишається невідомою, і все ще не існує надійної експериментальної моделі, яка відтворювала б спонтанну реактивацію туберкульозу у людини. На мишах найбільш добре охарактеризована модель (Корнелловского модель) реактивації туберкульозу не відображає нормальні фізіологічні процеси, так як включає в себе лікування тварин кортикостероїдами після відміни антибіотиків.

    Лінія інбредних мишей I / St є найбільш чутливою серед приблизно 30 ліній, досліджених в нашій моделі летального туберкульозу, оцінюючи за середнім часу виживання і висіву мікобактерій з легких і селезінки. На основі цієї чи-

    ванні мишей ми створили нову мишачу модель спонтанної реактивації туберкульозу, яка не включає застосування гормонів. Хоча в результаті хіміотерапії нам вдалося повністю видалити культивовані форми мікобактерій з кіс і легких мишей обох ліній I / St і В6, через 5 місяців після скасування хіміотерапії мікобактерії висівали із кіс 100% тварин. У генетично чутливих мишей I / St висівалось мікобактерій більше в 1000-10000 разів, ніж у більш резистентних мишей В6. Важливо, що після антибіотикотерапії та тривалого періоду очікування реактивация туберкульозу починається позалегеневого, переважно в селезінці.

    Цікаво, що миші, які переживають реактивацію туберкульозу після відміни антибіотиків, виживають значно гірше, ніж тварини цих же ліній з хронічною формою туберкульозу, що розвилася в результаті введення вкрай низькою дози М. tuberculosis (70 КУО на миша). Незважаючи на значно нижчу бактеріальну навантаження у мишей I / St з реактивацией туберкульозу (103 - 104 КУО на легке через 5-6 місяців після відміни антибіотиків) в порівнянні з лікувалися тваринами з хронічною формою туберкульозу (106 КУО на легке через 5-6 місяців хронічної інфекції), перші гинуть, ймовірно, від патологічних змін в легкому, тоді як тварини з хронічною інфекцією переживають в 100 разів більшу мікобактеріальну навантаження більш-менш байдуже і з набагато менш вираженими патологічними змінами в легкому.

    Порівняльна характеристика імунного СТАТУСУ У ХВОРИХ НА АКТИВНИМ НА ТУБЕРКУЛЬОЗ ЗАЛЕЖНО ВІД РІВНЯ ПРОТИТУБЕРКУЛЬОЗНИХ АНТИТІЛ

    Тюлькова Т.Є., Чебишева Е.В .. Кашуба Е.А., Чугаєв Ю.П., Каленова Л.Ф..

    Міська иммуноаллергологического консультативно-діагностична поліклініка;

    Тюменська державна медична академія

    Серологічні методи діагностики туберкульозу, за допомогою яких визначали протитуберкульозні антитіла (ПТАТ), багато років привертали увагу дослідників. Освіта ПТАТ грунтується, як правило, на результатах комплексного специфічного гуморального відповіді (Ягафарова Р.К., 2001). Дослідження (Кнорінг Б.Є., 1991, Стаханов В.А., 2001) свідчать, що рівень ПТАТ змінюється адекватно змінам клінічної картини. У зв'язку з цим визначення ПТАТ може служити додатковим прогностичним критерієм перебігу туберкульозної інфекції (Чуканов В.І., 1991).

    Мета: виявлення залежності клінічного перебігу та результатів туберкульозу органів дихання (ТОД) і

    змін імунологічних показників від рівня ПТАТ в сироватці крові.

    Матеріали та методи. Дослідження проведено у 15 хворих у віці 7-15 років з інфільтративним ТОД, що знаходяться на лікуванні в спеціалізованому стаціонарі. Виділено наступні групи: 1-а група

    - діти, у яких концентрація ПТАТ була 0,5 і більше опт.усл.ед. (п = 5); 2-я група - пацієнти з рівнем ПТАТ 0,2-0,49 опт.уел.ед. (П = 10). Рецепторний апарат лімфоцитів (ЛФ) визначали методом проточної цитофлюориметрії на цитометрі ЕАС5сап з моноклональними антитілами ( "Сорбент", м.Москва). Оцінювали субпопуляційний складу ЛФ: СБЗ +, СБ4 +, СБ20 +, СБ16 +, СБ23 +, СБ54 +, СБ11Ь +, С014 +. Рівень ^ Е, ТОЙ-а, IЬ-1Р, 1Ь-4 в сироватці визначали методом ІФА (ТОВ "Протеїновий контур"). ПТАТ досліджували в розведенні 1/100 в оптичних умовних одиницях (опт.уел.ед) методом ІФА.

    В результаті дослідження виявлено, що високі титри ПТАТ мають пацієнти, у яких ТОД починається підгостро (в 100%) і виявляється пізно (40% випадків). При цьому в однієї п'ятої частини пацієнтів в результаті захворювання формуються фіброзні зміни. Навпаки, в осіб з низьким рівнем ПТАТ гострий початок ТОД має кожен третій пацієнт, захворювання діагностується в фазу інфільтрації в 100% випадків і закінчується більш благополучно розсмоктуванням і ущільненням морфологічних елементів в легеневої тканини.

    Як видно з табл.1, показники пацієнтів 1-ї групи відрізнялися від 2-й статистично достовірним підвищенням відносної кількості ЛФ, Т-ЛФ, які несуть маркери СОЗ \ СБ4 + і СБ20 + і рецептор міжклітинної адгезії (С054 +), р<0,05. Крім цього, в 1-й групі нами виявлені непрямі ознаки активації ТЬ2-лімфоцитів: збільшення експресії маркера СБ23 + (р<0,01) і підвищення концентрації ^ Е, (р<0,01). Зміст 1Ь-4 було однаковим в обох групах. Для 2-ї групи було характерно збільшення експресії маркера СБ16 + (р<0,01), ТОЙ-а і 1Ь-1 | 3 (р<0,05). Ці цитокіни посилюють експресію маркера СБ11Ь +, що і було зафіксовано в нашому дослідженні у пацієнтів 2-ї групи, р<0,05. На рівень представлення молекул міжклітинної адгезії 1Сам-1 (СБ54 +), СБ11Ь + на мембрані ЛФ впливають бактеріальні ліпополісахариди мікобактерій (Фрейдлін І.С., 2001). Рецептор до них (СД14 +) представлений приблизно однаково в обох групах (86,8 + 2,7% проти 82,7 ± 1,3%, відповідно, р>0,05).

    Висновок. Таким чином, при низькому рівні ПТАТ імунну відповідь здійснюється по раціональному шляху через активацію ТИ-лімфоцитів і закінчується розсмоктуванням інфільтрації. При наявності високого рівня ПТАТ має місце нераціональний шлях активації імунної системи по ТЬ2-шляху, що сприяє пізнього діагностування туберкульозної інфекції з подальшим формуванням грубих фіброзних змін в легеневій тканині.

    Табл. 1. ІМУНОЛОГІЧНІ ПОКАЗНИКИ ЗАЛЕЖНО ВІД РІВНЯ ПТАТ {М ± т)

    П-ль лимф CD3 * CD4 + CD16 * CD20 * CD11Ь JgE CD54 * CD23 + TNF-a IL-1 (3 IL-4

    1-а 2-а 52,2 ± 3,1 44,2 ± 5,5 72,5 ± 2,2 63,6 ± 2,7 42,5 ± 2,2 33,4 ± 2,8 9, 8 ± 1,7 13,9 ± 1 12,1 ± 1 9,9 ± 1,3 16,3 ± 3,9 22,2 ± 3,5 * 460 ± 94 136 ± 81 25,8 ± 5,4 13,3 ± 3,1 7,8 ± 2,7 5,2 ± 1,3 40 ± 28 502 ± 99 146 ± 93 1004 ± 64 311 ± 59 257 ± 86

    * -Достоверное збільшення, р<0,05

    IMMUNOPATHOGENESIS OF LUNG GRANULOMAS IN HUMAN TUBERCULOSIS PATIENTS

    Ulrichs T.1'2, Kosmiadi G.A.3, Titukhina M.4, Dallenbach F.5, Mishenko V.3, Gushina N.3, Stein H.5 and Kaufmann S.H.E.1

    1 Department of Immunology, Max-Planck-Institute for Infection Biology, Berlin, Germany;

    2 Department of Medical Microbiology and Infection Immunology, Institute for Infection Medicine, Freie Universitat, Berlin, Germany;

    3Department of Immunology, Central Tuberculosis Research Institute, Moscow, Russia;

    4Department of Thoracic Surgery, Central Tuberculosis Research Institute, Moscow, Russia;

    5Institute for Pathology, Freie Universitat, Berlin, Germany

    The human tuberculous granuloma and the surrounding lung tissue harbor local immune processes central to the outcome of tuberculosis. This study investigates both mycobacterial load in lesions and spread to different tissue locations. Moreover, we analyzed tissue distribution of immune cells throughout the infected lung in order to get information about different stages of Mycobacterium tuberculosis infection. We found that load and spread of mycobacteria significantly differs between active (open) cavities and organized tuberculomas. Active cavities were consistently surrounded by infected pericavital lung tissue, and mycobacteria were even found in histologically normal peripheral lung tissue. Abundance of mycobacteria correlated with severity of their multi-drug resistance. However, sputum abacillarity did not reflect mycobacterial load in lung tissue. From different lung specimens (i.e. cavity, pericavital, peripheral lung tissue, lymph node, peripheral blood) lymphocytes were isolated and their phenotype and effector functions were investigated. Cavity-surrounding tissue and distant unaffected lung tissue were infiltrated by both CD4 + and CD8 + T cells. Among T cell subpopulations, a high level of CD45RO + cells was identified. T cells isolated from lung tissue showed a significantly higher level of activation upon stimulation with mycobacterial antigens as compared to peripheral blood lymphocytes. B cells were found forming follicle-like structures in the tissue surrounding the central lesion of the granuloma, neighboring blood and lymphatic vessels.

    Taken together, immunohistological analysis of the lung tissue revealed a cell distribution and frequency similar to that found in draining lymph nodes. Our data suggest the establishment of a lymphoid organ-type organization

    surrounding granulomas, the immunological focus where the main immune response against M. tuberculosis takes place.

    РІВЕНЬ ПРОТИТУБЕРКУЛЬОЗНИХ АНТИТІЛ, ЯК ПОКАЗНИК латентною туберкульозною інфекцією В ГРУПАХ РИЗИКУ

    Яковлєва Л.Ф. .. Суркова Л.К., Лисенко А.П., Федорович С.В.

    Білоруське суспільство імунологів і алергологів.

    Мета дослідження. Вивчення рівня протитуберкульозних антитіл в групах ризику.

    Матеріали та методи. Для визначення протитуберкульозних антитіл (ПТАТ) використовували іммунофер-цементних тест-систему "ІФА-ТУБ" виробництва "НВЦ" Червона крапля "(специфічність - 98%, чутливість

    - 68%). Досліджували 153 сироватки крові осіб з різних груп ризику (нетранспортабельні хворі, психічні захворювання, хронічні неспецифічні захворювання легенів, хронічний алкоголізм, цукровий діабет, контакти з туберкульозними хворими в установах соціального забезпечення, виразкова хвороба шлунка, переселенці із зони, забрудненої радіонуклідами).

    Результати досліджень визначення рівня протитуберкульозних антитіл представлені в таблиці.

    За кількістю позитивних реакцій (20,8%) виділялася група осіб з установ соціального забезпечення, що мала контакти з хворими на відкриту форму туберкульозу. Однак більш значущим фактором стала наявність патології, що протікає з розвитком імунодефіциту, порушенням бар'єрних функцій слизових оболонок або асоціальною поведінкою. У таких випадках частота активізації імунної відповіді на антигени збудника зростала в 6,8-14 разів. Звертають увагу високий рівень ПТ АТ в групі переселенців із зон забруднених радіонуклідами.

    Висновок. У осіб з обстежених груп ризику відзначаються значні порушення в роботі імунної системи, які сприятимуть розвитку туберкульозної інфекції. Отримані дані підтвердили достовірно вищий рівень імунної відповіді на антигени збудника туберкульозу в групах ризику як показника латентної протікає туберкульозної інфекції. Визначення рівня специфічних антитіл може використовуватися для поглибленого вивчення епідемічної ситуації, бути обов'язковим тестом для виявлення осіб з активізується туберкульозною інфекцією та проведення ранньої профілактики хвороби.

    Табл. РІВЕНЬ ПРОТИТУБЕРКУЛЬОЗНИХ АНТИТІЛ В ГРУППАХЛІЦС РІЗНОЮ ПАТОЛОГІЄЮ

    Група осіб Досліджено проб реагувати позитивно

    проб%

    Нетранспортабельні хворі 21 3 14,3

    Психічні захворювання 17 5 29,4

    Хронічні неспецифічні захворювання легенів 10 2 20

    Хронічний алкоголізм 19 4 21,1

    Цукровий діабет 4 1 25

    Виразкова хвороба шлунка 16 4 25

    Контакти з туберкульозними хворими в установах соціального забезпечення 24 5 20,8

    Переселенці з зони, забрудненій радіонуклідами 42 7 16,7


    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити