Досліджували здатність до утворення гіперицину, псевдогіперицину і гіперфорин в інтактних (in vivo) рослинах Hypericum perforatum L. (звіробою звичайного) і отриманих методом мікроклонального розмноження (In vitro). Як об'єкти дослідження використовували дикорослі і культурні (сорт Сонячний) рослини. Надземну частину рослин, отриманих in vivo, а також листя, стебла і калусних тканину рослин, отриманих in vitro, піддавали ліофільної сушінні. Перед початком вимірювань проводили екстракцію метанолом протягом 1 ч. Для виявлення зазначених хімічних сполук застосовували часопролітної мас-спектрометр з лазерною десорбцією / іонізацією (ЛДІ). У метанольна екстракті лиофильно висушених дикорослих і культурних рослинах, вирощених in vivo, були виявлені всі досліджувані сполуки. При вирощуванні in vitro в дикорослому зверобое були також визначені всі вищевказані сполуки, проте в рослинах сорту Сонячний гіперфорин мас-спектрометричного ідентифікувати не вдалося. Після зберігання лиофильно висушених рослин в ексикаторі темряві при 20 ° С протягом 2,5 місяця в темряві вдалося виявити всі досліджувані сполуки тільки у рослин, вирощених in vivo. У рослинах дикорослого і культурного звіробою, вирощених in vitro, був виявлений тільки псевдогиперицин.

Анотація наукової статті по агробіотехнології, автор наукової роботи - Овчинникова Віра Миколаївна, Гончарова Ірина Сергіївна, Харченко Петро Миколайович, Леонова Тетяна Геннадіївна, Буряк Олексій Костянтинович


Область наук:
  • Агробіотехнології
  • Рік видавництва: 2016
    Журнал: Хімія рослинної сировини
    Наукова стаття на тему 'Мас-спектрометрія з лазерною десорбцією / іонізацією для порівняльної оцінки змісту гіперицину, псевдогіперицину і гіперфорин в культурному і дикорастущем Hypericum perforatum l in vivo і in vitro'

    Текст наукової роботи на тему «Мас-спектрометрія з лазерною десорбцією / іонізацією для порівняльної оцінки змісту гіперицину, псевдогіперицину і гіперфорин в культурному і дикорастущем Hypericum perforatum l in vivo і in vitro»

    ?Хімія рослинної сировини. 2016. №3. С. 35-40.

    DOI: 10.14258 / jcprm.2016031273

    УДК 543.51; 58.085; 615.322

    Мас-спектрометрії З лазерною десорбцією / іонізацією ДЛЯ ПОРІВНЯЛЬНОЇ ОЦІНКИ ЗМІСТУ гіперицинів, псевдогіперицину І гіперфорин В культурних і дикорослих HYPERICUM PERFORATUM L IN VIVO І IN VITRO

    © B.H. Овчіннікова1, І.С. Гончарова2, П.Н. Харченко1, Т.Г.Леонова1, А.К. Буряк:

    всеросійський науково-дослідний інститут сільськогосподарської біотехнології, вул. Тімірязєвська, 42, Москва, 127550 (Росія), e-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    2 Інститут фізичної хімії та електрохімії ім. А.Н. Фрумкіна РАН, Ленінський проспект, 31, к. 4, Москва, 119071 (Росія)

    Досліджували здатність до утворення гіперицину, псевдогіперицину і гіперфорин в інтактних (in vivo) рослинах Hypericum perforatum L. (звіробою звичайного) і отриманих методом мікроклонального розмноження (in vitro). Як об'єкти дослідження використовували дикорослі і культурні (сорт Сонячний) рослини. Надземну частину рослин, отриманих in vivo, а також листя, стебла і калусних тканину рослин, отриманих in vitro, піддавали ліофільної сушінні. Перед початком вимірювань проводили екстракцію метанолом протягом 1 ч. Для виявлення зазначених хімічних сполук застосовували часопролітної мас-спектрометр з лазерною десорбцією / іонізацією (ЛДІ). У метанольна екстракті лиофильно висушених дикорослих і культурних рослинах, вирощених in vivo, були виявлені всі досліджувані сполуки. При вирощуванні in vitro в дикорослому зверобое були також визначені всі вищевказані сполуки, проте в рослинах сорту Сонячний гіперфорин мас-спектрометричного ідентифікувати не вдалося. Після зберігання лиофильно висушених рослин в ексикаторі темряві при 20 ° С протягом 2,5 місяця в темряві вдалося виявити всі досліджувані сполуки тільки у рослин, вирощених in vivo. У рослинах дикорослого і культурного звіробою, вирощених in vitro, був виявлений тільки псевдогиперицин.

    Ключові слова: звіробій, мікроклональне розмноження, гиперицин, псевдогиперицин, гіперфорин, лазерна десорбція / іонізація (ЛДІ).

    Лікарські рослини синтезують величезний спектр вторинних метаболітів, які знаходять застосування у фармакологічній промисловості. Звіробій - джерело важливих біологічно активних сполук, таких як нафтодіантрони (гіперецін, псевдогіперецін і ін.), Флороглюцин (гіперфорин) [1]. Крім рослин гиперицин був виявлений і в грибах ендофітів, які мешкають в зверобое [2].

    Вступ

    Овчинникова Віра Миколаївна - кандидат

    біологічних наук, провідний науковий співробітник,

    e-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Гончарова Ірина Сергіївна - аспірант,

    e-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Харченко Петро Миколайович - академік РАН,

    e-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Леонова Тетяна Геннадіївна - кандидат

    біологічних наук, провідний науковий співробітник,

    e-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Буряк Олексій Костянтинович - доктор хімічних наук, завідувач лабораторією, професор, e-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Рід Hypericum включає 484 види, але найбільш інтенсивно використовується в медичній практиці Hypericum perforatum L. (звіробій звичайний) [3]. Перевага цього виду віддається в зв'язку з тим, що саме в цьому виді в достатній кількості знайдені сполуки, які представляють інтерес для медиків і фармацевтів.

    Клінічні дослідження показали, що звіробій становить найбільший інтерес як антидепресант, але також вивчається антивірусна, протизапальна, антиоксидантна актив-

    Автор, з яким слід вести листування.

    ність. Останнім часом виявлено, що гиперицин є одним з найпотужніших фотосенсибилизаторов в природі і це його властивість може бути використано в фотодинамічної терапії раку [4]. Інтенсивно вивчається властивість гіперфорин стимулювати зростання і диференціацію кератиноцитів [1]. Слід зазначити, що вперше структура гіперфорин була визначена радянськими дослідниками [5]. Кількість вторинних метаболітів звіробою залежить не тільки від виду звіробою, а й від сезону, погодних умов та інших факторів навколишнього середовища. Численні дослідження присвячені вивченню здатності звіробою синтезувати вторинні метаболіти в культурі in vitro [6, 7]. Культура тканин рослин має певні переваги перед традиційним рослинним сировиною, так як біологічно активний продукт можна отримувати незалежно від поширення рослини, сезону, погодних умов, грунту. Якщо врахувати швидке виснаження природних ресурсів, а також забруднення рослин природними та антропогенними речовинами, то переваги використання клітинних технологій стає очевидним. Крім того, використання методів біотехнології, в тому числі генної і метаболічної інженерії, дозволить збільшити освіту фармакологічно активних сполук в промисловому виробництві [8].

    У зверобое визначено набір генів, імовірно відповідальних за синтез активних інгредієнтів [9]. Одним з головних підходів для вирощування рослин in vitro є вибір найбільш продуктивних з точки зору синтезу вторинних метаболітів видів, сортів лікарської рослини. Склад і стабільність фармацевтичних препаратів звіробою в значній мірі варіюється в залежності від способів підготовки рослинного матеріалу, липофильности розчинника та умов зберігання [1012]. Добре відома нестабільність гіперицину і гіперфорин під дією світла, температури і т.д. [13]. В даний час в літературі описані різні способи підготовки рослин звіробою до хімічного аналізу, а також представлені різні методи визначення гіперицину і гіперфорин [14]. Серед цих методів найбільш привабливим є метод лазерної десорбції / іонізації (ЛДІ) і його варіанти - методи матрично-активованої лазерної десорбції / іонізації і поверхнево-активованої лазерної десорбції / іонізації (Малда / Палден), завдяки експресності визначення і, в ряді випадків, відсутність складної пробопідготовки. З нашої точки зору, правильніше вказувати обидва методи разом, оскільки часто важко виключити вплив поверхні навіть при використанні інертних підкладок [15]. Метод ЛДІ може бути застосований для вивчення розподілу вторинних метаболітів (гиперицин, псевдогиперицин) в різних видах звіробою [16]. Крім того, ці методи мають високу чутливість, дозволяючи виявляти сполуки в концентрації на рівні 1 фемтомоля, що дозволяє використовувати незначні навішування рослин.

    Мета даного дослідження - визначити методом ЛДІ здатність культурного (сорт Сонячний) і дикорослого звіробою до синтезу гіперицину, псевдогіперицину і гіперфорин в умовах in vivo та in vitro.

    експериментальна частина

    Об'єктом дослідження служили рослини Hypericum perforatum L. культурні (сорт Сонячний звіробою звичайного) і дикоростучий (насіння зібрані в Московській області). Для проведення дослідів in vitro використовували метод мікроклонального розмноження. Насіння протягом 7 хв стерилізували в 0,1% -ному діаціде [17], три рази промивали стерильною деионизованной водою і поміщали їх для проростань на середу Мурасіге-Скуга (МС) з 2% сахарози, 0,7% агару, рН - 5,7 [18]. Після утворення 2-3 листків двуузловие апікальні живці для індукції побегообразования пересаджували на середу МС, що містить індолилмасляної кислоту (ІМК) в концентрації 0,1 мг / л. Середовища були автоклавуватися (20 хв, 120 ° С). Рослини вирощували в клімокамер WLR-351 (Японія) при 25 ° С вдень, 16 ° С вночі та тривалості світлового дня 16 год. Через місяць культивування рослини використовували для хімічного аналізу.

    Для отримання рослин in vivo стерилізовані насіння висівали в розсадні горщики діаметром 10 см з торфогрунт ( «ФАРТ», Росія). Рослини вирощували в теплиці при 25 ° С вдень, 16 ° С - вночі і тривалістю світлового дня 16 год. Рослини використовували для мас-спектрометричного аналізу після вирощування протягом 1 місяця з моменту проростання.

    Після фіксації рідким азотом надземні частини рослини, отримані in vivo, а також листя, стебла і калусних тканину рослин, отримані in vitro, лиофильно висушували. Проби складалися з 6-8 рослин. Першу серію рослин аналізували відразу після висушування, іншу серію - після 2,5 місяця зберігання в ексикаторі при температурі не вище 20 ° С, без доступу світла і повітря. Гіперецін,

    псевдогиперицин і гіперфорин визначали в витяжках, отриманих при розтиранні 30 мг ліофілізують-ванного рослинного матеріалу з подальшою екстракцією в 5 мл метанолу (HPLC-grade) протягом 1 год при 24 ° С.

    Для дослідження зразків поверхні використовували часопролітної мас-спектрометр Bruker Daltonics Ultraflex II (Bruker, Німеччина), обладнаний азотним лазером з робочою довжиною хвилі 337 нм і максимальною енергією 110 мкДж. Експерименти проводилися в режимі рефлектрона і реєстрації позитивних і негативних іонів. Діапазон мас - 20-3600 дальтон (Так). Для отримання і обробки мас-спектрів використовували програмне забезпечення фірми Bruker «Flex Control 3.4» і «Flex Analysis 3.4». Всі три визначених компонента здатні депротонованої в умовах лазерної десорбції / іонізації з утворенням негативно заряджених молекулярних іонів без використання матриці, що спрощує процедуру пробопідготовки. Приклад отриманого спектра ЛДІ в режимі реєстрації негативних іонів представлений на малюнку.

    Статистичне порівняння експериментально отриманого ізотопного розподілу з теоретично розрахованим за допомогою доступної в Інтернеті програми IsoPro 3.0 проводили на основі простого тесту Стьюдента, який показав відповідність отриманих ізотопних розподілів з їх розрахунковими значеннями. Таким чином проводили ідентифікацію всіх груп піків в отриманих мас-спектрах.

    Обговорення результатів

    У дикорослих і культурних рослинах in vivo були виявлені гиперицин, псевдогиперицин і гіперфорин (табл. 1). Слід підкреслити, що зміст гіперфорин в рослинах сорту Сонячний було вище, ніж в дикорослих рослинах. У дикорослих рослинах, отриманих in vitro, також були знайдені всі досліджувані сполуки. Однак вирощування рослин сорту Сонячний в системі in vitro призводило до виникнення відмінностей у порівнянні з рослинами, вирощеними in vivo. У зразках сорти Сонячний в умовах in vitro гіперфорин не було визначено мас-спектрометричного. Найбільший вміст псевдогіперицину спостерігали при вирощуванні рослин in vitro.

    Дослідження рослинних екстрактів, отриманих при зберіганні ліофілізованих зразків протягом 2,5 місяця в ексикаторі при температурі 20 ° С (табл. 2), показало, що в рослинах, вирощених in vivo, присутні всі з'єднання, але зміст гіперфорин знизилося, а псевдогіперицину і гипе-рицину - зросла. Однак в рослинах, вирощених in vitro, був знайдений тільки псевдогиперицин.

    Мас-спектр екстракту звіробою (сорт Сонячний, in vivo), отриманий в режимі реєстрації негативних іонів, де А - гиперицин (m / z [М-Н] "= 503,4), В - псевдогиперицин (m / z [М- Н] "= 519,5), С - гіперфорин (m / z [М-Н] - = 535,8)

    Таблиця 1. Визначення методом ЛДІ МС гіперицину, псевдогіперицину і гіперфорин в зразках, отриманих in vivo і in vitro

    Зразок Гіперицину псевдогіперицину гіперфорин

    Сорт Сонячний in vivo 2,1% 5,8%, 92,1%

    Сорт Сонячний in vitro 9,5% 90,5% -

    Дикоростучий in vivo 15,3% 23,7% 60,8%

    Дикоростучий in vitro 6,9% 68,8% 24,2%

    Таблиця 2. Визначення методом ЛДІ МС гіперицину, псевдогіперицину і гіперфорин в зразках після 2,5 місяця зберігання

    Зразок Гіперицину псевдогіперицину гіперфорин

    Сорт Сонячний in vivo 17,8% 17,9% 64,2%

    Сорт Сонячний in vitro - 100% -

    Дикоростучий in vivo 24,3% 35,5% 46,1%

    Дикоростучий in vitro - 100% -

    Таким чином, гіперфорин був знайдений тільки в дикорослих рослинах, вирощених in vivo і in vitro, а також в рослинах сорту Сонячний в умовах вирощування in vivo. Гіперицину і псевдогіпері-цин присутні у всіх зразках незалежно від умов вирощування. Зберігання ліофілізований рослинного матеріалу, отриманого in vivo протягом 2,5 місяця в темному місці при температурі 20 ° С, не впливало на збереження досліджуваних сполук. Однак зберігання в цих умовах рослин, отриманих in vitro, сприяло утворенню тільки псевдогіперицину.

    Розрахунок відносного змісту компонентів проводили за вибіркою інтенсивностей сигналів, які визначаються m / z з 3 спектрів для кожного із зразків, нормируя щодо максимального піку. У всіх випадках передбачалося, що перетин іонізації всіх досліджених сполук однаково. Це досить грубе наближення досить для порівняльної класифікації різних зразків.

    висновки

    1. Серед інших методів аналізу варіант лазерної десорбції / іонізації видається оптимальним по простоті, експресності і інформативності для порівняльного аналізу таких складних об'єктів, як культурний і дикоростучий звіробій in vivo і in vitro.

    2. На підставі отриманих результатів можна припустити, що для біотехнологічних досліджень слід віддавати перевагу дикорастущим рослинам Hypericum perforatum L. (звіробою звичайного) .

    Список літератури

    1. Wolfle U., Schempp С., Seelinger С. Topical Application of St John s Wort // Planta Med. 2014. Vol. 8. Pp. 109-120.

    2. Kusari S., Lamshoft M., Zuhlke S., Spiteller M. An - endophytic fungus from Hypericum perforatum L that produces hypericin // J. Nat. Prod. 2008. Vol. 71. Pp. 159-162.

    3. Stojanovic G., Dordevic A., Smelcerovic A. Do other Hypericum species have medical potential as St. John's Wort СHypericum perforatum)? // Curr. Med. Chem. 2013. Vol. 20. Pp. 2273-2295.

    4. Karioti A., Bilia A. Hypericins as potential leads for new therapeutics // Int. j. Mol. Sci. 2010. Vol. 11. Pp. 562-594.

    5. Бистров H.C., Гупта Ш.Р., Добринін B.H., Колосов М.М., Чернов Б.К. Хімія гіперфорин // Біоорганічна хімія. 1978. Т. 4, №2. С. 943-947.

    6. Gadzovska S., Maury S., Ounnar S., Righezza M., Kascakova S., Refregiers M., Spasenoski M., Joseph C., Hagege D. Identification and quantification of hypericin and pseudohypericin in different Hypericum perforatum L in vitro cultures // Plant Physiology and Biochemistry. 2005. Vol. 43. Pp. 591-601.

    7. Savio L.E.B., Astarita L.V., Santarem E.R. Secondary metabolism in micropropagated Hypericum perforatum L grown in no aerated liquid medium // Plant Cell Tiss. Organ Cult. 2012. Vol. 108. Pp. 465 ^ 72.

    8. Gandhi S.G., Mahajan V., Bedi Y.S. Changing trends in biotechnology of secondary metabolism in medicinal and aromatic plants // Planta. 2015. Vol. 241. Pp. 303-317.

    9. Kosuth J., Smelcerovic A., Borsch Т., Zuehlke S., Karppinen K., Spiteller M., Hohtola A., Cellarova E. The hyp-1 gene is not a limiting factor for hypericin biosynthesis in the genus Hypericum // Funct. Plant Biol. 2011. Vol. 38. Pp. 35 ^ 3.

    10. Smelcerovic A., Spiteller M., Zuehlke S. Exhaustive extraction of hypericin, flavonoids, hyperforin from Hypericum perforatum L. // J. Agric. Food Chem. 2006. Vol. 54. Pp. 2750-2754.

    11. Cossuta L., Vata Т., Bathri M., Hohmann J., Keve Т., Simandi B. Extraction of hypericin and hyperforin from St John s Wort Hypericum perforatum with different solvents // J. of Food Process Engineering. 2012. Vol. 32. Pp. 222-235.

    12. Ломовский І.О. Вплив умов механохимической обробки на екстракцію гіперицину з трави звіробою // Хімія рослинної сировини. 2012. №3. С. 93-99.

    13. Ang C.Y., Ні L., Heinze Т.М., Cui Y., Freeman J.P., Kozak К., Luo W., Liu F.F., Mattia A, Dinovr M. Instability of St. John s Wort (Hypericum perforatum) and degradation of hyperforin in aqueous solutions and functional beverge // J. Agric. Food Chem. 2004. Vol. 52. Pp. 6156-6164.

    14. Kusari S., Sergin S., Nigutova К., Cellarova E "Spiteller M. Spatial chemo-profiling of hypericin and related phyto-chemicals in species using MALDI-HRMS imaging // Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2015. Vol. 407. Pp. 4779 ^ 791.

    15. Буряк A.K., Сердюк T.M. Фізико-хімічні основи застосування мас-спектрометрії з ініційованої матрицею / поверхнею лазерною десорбцією / іонізацією для дослідження інгібіторів // Корозія: матеріали, захист. 2010. №9. С. 38 ^ 17.

    16. Holsher D., Shroff R., Knop К., Gottschaldt M., Crecelius A., Schneider B, Heckel DG, Schubert US, Svatos A. Matrix-free UV-laser desorption / ionization (LDI) mass-spectrometric imaging at the single-cell level: distribution of secondary metabolites of Arabidopsis thaliana and Hypericum species. // The Plant Journal. 2009. Vol. 60. Pp. 907-918.

    17. Leonova Т., Ovchinnykova V., Souer E., de Boer A., ​​Kharchenko P., Babakov A. Isolated Thellungiella shoots do not require roots to survive NaCl andNa2S04 salt stress // Plant Signaling Behavior. 2009. Vol. 4. Pp. 1059-1062.

    18. Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture // Physiol. Plant. 1962. Vol. 15. Pp. 473 ^ 197.

    Надійшло до редакції 18 квітня 2016 р.

    Після переробки 4 червня 2016 р.

    40

    B.H. Obhhhhhkoba, H.C. Tohhapoba, ILH. Xaphehko h

    Ovchinnykova V.N.1, Goncharova I.S.2, Kharchenko P.N.2, Leonova T.G.2 *, Butyak A.K.1 LDI MASS-SPECTROMETRY ASSESSMENT OF HYPERICIN, HYPERFORIN AND PSEUDOHYPERICIN IN CULTIVAR AND WILD HYPERICUM PERFORATUM L. IN VIVO AND IN VITRO

    1 All-Russia Research Institute of Agricultural Biotechnology, ul. Timiryazevskaya 42, Moscow, 127550 (Russia), e-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    2A.N. Frumkin Institute of Physical chemistry and Electrochemistry of the Russian academy of sciences, Leninsky prospect, 31 k.4, Moscow, 119071 (Russia)

    The abilities to form hypericin, pseudohypericin and hyperforin in vivo Hypericum perforatum L. and in vitro by microclonal propagation were investigated. Wild and cultural (cultivar Solnechney) plants were used as the research objects. The aerial parts of the plants, which had been obtained in vivo, as well as the leaves, stems and plant callus tissue which had been obtained in vitro, were freeze-dried. Before the start of measurement methanol extraction was being carried out for 1 hour. TOF mass spectrometer with laser desorption / ionization (LDI) were used for detecting certain chemical compounds. All research chemicals were found in the methanol extract of freeze-dried lyophilized wild and cultivated plants, grown in vivo. All of the mentioned compounds were also detected in vitro in wild grown Hypericum perforatum L, however mass spectrometry could not detect hyperforin in cultivar Solnechney plants. After freeze-dried lyophilized plants storing in desiccator in the dark place at 20 ° C for 2,5 month all compounds were found only in vivo grown plants. In plants of wild and cultivated Hypericum grown in vitro only pseudohypericin was detected.

    Keywords: Hypericum perforatum L., cultivar, wild plant, microclonal propagation, LDI-MS.

    References

    1. Wolfle U., Schempp C., Seelinger C. PlantaMed., 2014 року, vol. 8, pp. 109-120.

    2. Kusari S., Lamshoft M., Zuhlke S., Spiteller M. J. Nat. Prod., 2008, vol. 71, pp. 159-162.

    3. Stojanovic G., Dordevic A., Smelcerovic A. Curr. Med. Chem., 2013, vol. 20, pp. 2273-2295.

    4. Karioti A., Bilia A. Int. j. Mol. Sci., 2010 vol. 11, pp. 562-594.

    5. Bystrov N.S., Gupta Sh.R., Dobrynin V.N., Kolosov M.N., Chernov B.K. Bioorganicheskaia khimiia, 1978, vol. 4, no. 2, pp. 943-947. (InRuss.).

    6. Gadzovska S., Maury S., Ounnar S., Righezza M., Kascakova S., Refregiers M., Spasenoski M., Joseph C., Hagege D. Plant Physiology and Biochemistry, 2005, vol. 43, pp. 591-601.

    7. Savio L.E.B., Astarita L.V., Santarem E.R. Plant Cell Tiss. Organ Cult. 2012, vol. 108, pp. 465 ^ 72.

    8. Gandhi S.G., Mahajan V., Bedi Y.S. Planta, 2015-го, vol. 241, pp. 303-317.

    9. Kosuth J., Smelcerovic A., Borsch T., Zuehlke S., Karppinen K., Spiteller M., Hohtola A., Cellarova E. Fund. Plant Biol., 2011, vol. 38, pp. 35 ^ 3.

    10. Smelcerovic A., Spiteller M., Zuehlke S. J. Agric. Food Chem., 2006, vol. 54, pp. 2750-2754.

    11. Cossuta L., Vata T., Bathri M., Hohmann J., Keve T., Simandi B. J. of Food Process Engineering 2012, vol. 32, pp. 222-235.

    12. Lomovskii I.O. Khimiia rastitel'nogo syr'ia 2012, no. 3, pp. 93-99. (In Russ.).

    13. Ang C.Y., Hu L., Heinze T.M., Cui Y, Freeman J.P., Kozak K., Luo W., Liu F.F., Mattia A, Dinovr M. J. Agric. Food Chem., 2004, vol. 52, pp. 6156-6164.

    14. Kusari S., Sergin S., Nigutova K., Cellarova E., Spiteller M. Analytical andBioanalytical Chemistry, 2015-го, vol. 407, pp. 4779 ^ 791.

    15. Buriak A.K., Serdiuk T.M. Korroziia: materialy, zashchita 2010, no. 9, pp. 38-47.

    16. Holsher D., Shroff R., Knop K., Gottschaldt M., Crecelius A., Schneider B, Heckel D.G., Schubert U.S., Svatos A. The Plant Journal, 2009 vol. 60, pp. 907-918.

    17. Leonova T., Ovchinnykova V., Souer E., de Boer A., ​​Kharchenko P., Babakov A. Plant Signaling Behavior, 2009 vol. 4, pp. 1059-1062.

    18. Murashige T., Skoog F. Physiol. Plant, 1962, vol. 15, pp. 473 ^ 97.

    Received April 18, 2016 Revised June 4, 2016

    Corresponding author.


    Ключові слова: ЗВІРОБІЙ /мікроклонального розмноження /гіперицинів /псевдогіперицину /гіперфорин /Лазерною десорбцією / ІОНІЗАЦІЯ (ЛДІ)

    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити