Сучасні методи лікування ВІЛ-інфекції дозволяють стримувати швидкість розвитку захворювання, але не призводять до його лікуванню. Антиретровірусна терапія є довічною, дорогої і супроводжується накопиченням побічних ефектів. Останні досягнення науки дозволили запропонувати принципово новий підхід до лікування ВІЛ-інфекції - генну терапію. Ця публікація присвячена одному з напрямків генної терапії ВІЛ, яке отримало назву «внутрішньоклітинна імунізація». В основі цього напрямку лежить ідея введення антивірусних генів в чутливі до ВІЛ клітини. У статті розглянуті механізми дії різних антивірусних генетичних агентів, обговорюються питання, пов'язані з вибором клітин-мішеней і способом доставки терапевтичних генів. Представлені результати клінічних випробувань деяких генно-терапевтичних препаратів для лікування ВІЛ-інфекції.

Анотація наукової статті з біотехнологій в медицині, автор наукової роботи - Глазкова Діна Вікторівна, Богословська Олена Володимирівна, Маркелов Михайло Леонідович, Шипулін Герман Олександрович, Покровський Вадим Валентинович


Treatment Of HIV-Infection By Means Of Gene Therapy

Current methods of HIV treatment can contain a progression of the disease; however they do not lead to a cure. Lifelong antiretroviral therapy is therefore necessary, leading to problems of cost and toxicity of chemical drugs. The recent advances in science have allowed a new approach to the HIV-treatment - gene therapy. In the present publication we focus on one strategy of the gene therapy called «intracellular immunization». The strategy is based on the introducing of antiviral genes into the HIV-sensitive cells. We highlight the mechanisms of action of various antiviral genetic agents and discuss some issues concerning target cells and genes delivery. Finally we summarize the results of certain gene therapy clinical trials.


Область наук:
  • Біотехнології в медицині
  • Рік видавництва діє до: 2012
    Журнал: Вісник Російської академії медичних наук

    Наукова стаття на тему 'Лікування ВІЛ-інфекції за допомогою генної терапії'

    Текст наукової роботи на тему «Лікування ВІЛ-інфекції за допомогою генної терапії»

    ?Д.В. Глазкова1, Е.В. Богословская1, М.Л. Маркелов2, Г.А. Шіпулін1, В.В. Покровскій1

    1 ФГБУН «Центральний науково-дослідний інститут епідеміології» Росспоживнагляду, Москва

    2 ФГБУ «Інститут медицини праці» РАМН, Москва

    Лікування ВІЛ-інфекції за допомогою генної терапії

    Сучасні методи лікування ВІЛ-інфекції дозволяють стримувати швидкість розвитку захворювання, але не призводять до його лікуванню. Антиретровірусна терапія є довічною, дорогої і супроводжується накопиченням побічних ефектів. Останні досягнення науки дозволили запропонувати принципово новий підхід до лікування ВІЛ-інфекції - генну терапію. Ця публікація присвячена одному з напрямків генної терапії ВІЛ, яке отримало назву «внутрішньоклітинна імунізація». В основі цього напрямку лежить ідея введення антивірусних генів в чутливі до ВІЛ клітини. У статті розглянуті механізми дії різних антивірусних генетичних агентів, обговорюються питання, пов'язані з вибором клітин-мішеней і способом доставки терапевтичних генів. Представлені результати клінічних випробувань деяких генно-терапевтичних препаратів для лікування ВІЛ-інфекції. Ключові слова: генна терапія, ВІЛ, вірусний вектор, антивірусні гени.

    16 Введення

    Сучасні успіхи в лікуванні ВІЛ-інфекції були досягнуті за допомогою препаратів, отриманих традиційними методами хімічного синтезу активних молекул, які блокують дію ферментів ВІЛ або перешкоджають проникненню ВІЛ в CD4 + Т-лімфоцити - основну популяцію клітин, слабости вірусом. Одночасне застосування декількох препаратів різних типів, зване високоактивної антиретровірусної терапією (ВААРТ), пригнічує реплікацію ВІЛ і призводить до поступового збільшення числа CD4 + клітин. Однак особливістю реплікації ВІЛ є його здатність інтегруватися в геном клітин і роками зберігатися в формі провируса в довгоживучих клітинах, що не піддаючись дії антиретровірусних препаратів. При відміні терапії окремі провіруси активуються, і знову починається розмноження ВІЛ. У зв'язку з цим сучасне лікування комбінацією препаратів повинно проводитися довічно, що робить його виключно дорогим і призводить до накопичення побічних ефектів, пов'язаних з токсичністю використовуваних хімічних препаратів.

    У 2011 р було опубліковано повідомлення про унікальний випадок повного лікування від ВІЛ-інфекції. Даний випадок пов'язаний з активно розвивається та є перспективним підходом в лікуванні ВІЛ-інфекції, який називають генною терапією. Підхід заснований на введенні в клітини генетичних конструкцій, експресія яких (тобто утворення функціональних молекул білка або РНК на підставі кодируемой генетичними конструкціями інформації) надає організму стійкість до вірусу. Можна виділити три основних напрямки в генній терапії ВІЛ. Перше - введення генетичних послідовностей, які кодують молекулярні агенти, що пригнічують реплікацію вірусу в чутливих клітинах або захищають ці клітини від проникнення вірусу, - напрямок, який одержав назву «внутрішньоклітинна імунізація» [1]. Другий напрямок передбачає генетичну модифікацію цітотоксіч-ських лімфоцитів і / або В-лімфоцитів за рахунок введення генів, що кодують специфічні до ВІЛ рецептори, цитокіни або інші агенти, які посилюють противірусний імунну відповідь господаря [2]. І, нарешті, третій напрямок - це терапевтична або профілактична вакцинація, заснована на введенні генів ВІЛ для

    D.V. Glazkova1, E.V. Bogoslovskaya1, M.L. Markelov2, G.A. Shipulin1, V.V. Pokrovskiy1

    1 Central Research Institute of Epidemiology, Russian Federal service on customers 'rights protection

    and human well-being surveillance

    2 Research Institute of Occupational Health of Russian Academy of Medical Sciences

    Treatment Of HIV-Infection By Means Of Gene Therapy

    Current methods of HIV treatment can contain a progression of the disease; however they do not lead to a cure. Lifelong antiretroviral therapy is therefore necessary, leading to problems of cost and toxicity of chemical drugs. The recent advances in science have allowed a new approach to the HIV-treatment - gene therapy. In the present publication we focus on one strategy of the gene therapy called «intracellular immunization». The strategy is based on the introducing of antiviral genes into the HIV-sensitive cells. We highlight the mechanisms of action of various antiviral genetic agents and discuss some issues concerning target cells and genes delivery. Finally we summarize the results of certain gene therapy clinical trials. Key words: gene therapy, HIV, viral vector, antiviral genes.

    експресії окремих вірусних антигенів всередині клітини [3]. Даний огляд присвячений обговоренню робіт, що ведуться в рамках першого напряму, яке, на наш погляд, на сьогоднішній день є найбільш перспективним.

    Внутрішньоклітинна імунізація передбачає введення терапевтичних генів в клітини імунної системи (клітини-мішені), які вражає ВІЛ. Для цього використовується метод ex vivo, який включає ізоляцію даних клітин пацієнта, їх генетичну модифікацію в умовах культивування in vitro і аутологічну трансплантацію. В даний час в якості клітин-мішеней в генотерапіі ВІЛ використовують або CD4 + Т-лімфоцити, або гемопоетичні стовбурові клітини (ГСК). Перевагою використання Т-лімфоцитів є простота умов культивування і відносна легкість нарощування in vitro цієї популяції клітин, що дозволяє отримати Т-клітинну масу в кількостях, достатніх для декількох інфузій. Результати клінічних випробувань I фази підтверджують безпеку процедури пересадки Т-лімфоцитів [4-7]. Недоліком Т-клітинної терапії є обмежений термін життя лімфоцитів, що обумовлює необхідність повторних введень трансгенних клітин.

    Крім CD4 + Т-лімфоцитів ВІЛ може заражати і утворювати латентний резервуар в моноцитах / макрофагах, дендритних та деяких інших клітинах. Генетична модифікація ГСК може захистити весь спектр сприйнятливих клітин, оскільки вони є попередниками всіх клітин, залучених в інфекцію вірусом. Модифіковані ГСК можуть протягом усього життя бути джерелом ВІЛ-стійких клітин. Однак на даний момент не існує надійних способів розмноження ГСК в культурі, оскільки культивування ГСК веде до прогресуючої втрати стовбурових властивостей. Досліджується можливість використання та інших клітинних популяцій, наприклад, загальних попередників лімфоцитів [8] або індукованих стовбурових клітин [9, 10].

    Щоб захистити всіх нащадків модифікованих клітин, терапевтичний ген повинен передаватися в дочірні клітини, що можливо тільки в тому випадку, якщо він інтегрований в хромосому. Здійснити вбудовування генетичних конструкцій в хромосому дозволили вектори, створені на базі у-ретровірусів і лентивирусов. у-ретровірусних вектор був першим вектором, який застосували в клінічних випробуваннях [11]. Основною проблемою, з якою зіткнулися при використанні цього вектора, виявилася генотоксіч-ність, тобто здатність викликати злоякісне переродження клітини. Крім того, з плином часу відбувалося зменшення експресії, що призводило до послаблення терапевтичного ефекту [12]. Цих недоліків позбавлені лентівірусние вектори, які, крім того, на відміну від у-ретровірусних векторів, здатні переносити генетичний матеріал в клітки, що не, що особливо важливо при маніпуляціях з ГСК [12]. У зв'язку з цим в останні клінічні випробування віддають перевагу саме цим векторах.

    антивірусні агенти

    Перші генетичні конструкції кодували антивірусні агенти, які були спрямовані на пригнічення вірусної транскрипції і трансляції на

    пізніх стадіях життєвого циклу вірусу після вбудовування вірусної ДНК в геном. До таких агентів відносяться домінантно-негативні білки, внутрішньоклітинні антитіла (intrabodies) проти білка Tat, TAR (trans-activating response region) -ловушка, антісмис-ловие послідовності, рибозими, короткі интерферирующие РНК (кіРНК), спрямовані проти вірусу і ін.

    Трансдомінантний білок Rev є мутований вірусний білок, який зберігає РНК-що зв'язує активність по відношенню до ВІЛ, проте затримується в ядрі і таким чином порушує транспорт мРНК ВІЛ з ядра в цитоплазму.

    Було створено кілька варіантів трансдомінантного білка (RevM10, TdRev, huRevM10), які ефективно працювали in vitro і були використані в клінічних випробуваннях [13]. Інший антивірусний агент, TAR-пастка, являє собою короткий фрагмент РНК ВІЛ, який пов'язує вірусний білок Tat, який є активатором транскрипції. Наявність в клітці TAR-пастки призводить до зниження концентрації вільного білка Tat і у багато разів зменшує швидкість реплікації ВІЛ [14]. Механізм дії внутрішньоклітинних антитіл, специфічних до білку Tat, також заснований на зв'язуванні і інактивації цього білка [15]. Антисмислового (антисенс) РНК - короткі або 17 довгі РНК-послідовності, комплементарні послідовності РНК ВІЛ - утворюють дуплекси з вірусної РНК, роблячи її нефункціональної і приводячи до деградації. Безліч антисенс-конструкцій, досліджених in vitro, мали здатність пригнічувати розмноження вірусу [16]. Було показано, що молекули РНК довжиною більше 800 пар основ (Пар нуклеотидів) володіють великим антивірусним потенціалом, і опосередковане ними інгібування менш чутливо до виникнення мутованих вірусних варіантів [16]. Одна з конструкцій, що містить антисенс-послідовність, була протестована в II фазі клінічних випробувань (див. Нижче).

    Для внутрішньоклітинної імунізації були використані також рибозими - РНК-ферменти, здатні розщеплювати РНК-мішені. Зв'язування з мішенню і її подальше руйнування визначається комплек-плементарним плечей рибозима і РНК-молекули. Рибозими, сконструйовані для специфічного розщеплення РНК ВІЛ, дозволили пригнічувати розмноження вірусу на декількох експериментальних моделях [7, 17, 18].

    Після відкриття РНК-інтерференції, яка полягає в специфічному придушенні експресії генів за допомогою малих дволанцюжкових молекул РНК, було досліджено величезна кількість коротких інтерферуючих РНК (кіРНК), спрямованих проти вірусної РНК, і показано інгібування реплікації вірусу на різних модельних системах [19]. Істотним недоліком використання кіРНК і рибозимов проти ВІЛ є швидке виникнення стійких вірусних мутантів. Для вирішення цієї проблеми було запропоновано застосовувати комбінації з декількох антивірусних агентів, спрямованих проти консервативних ділянок РНК вірусу [20, 21].

    Теоретично інгібування ВІЛ на ранній стадії життєвого циклу має значні переваги. Використання механізмів, блокуючих вірус до інтеграції провируса в геном, повинно призводити до накопичення пулу незаражених модифікованих клітин, які можуть нормально функціонувати в орга-

    низме, вносячи свій внесок в боротьбу з ВІЛ. Було запропоновано кілька генетичних агентів, що запобігають інтеграцію вірусу в геном, серед яких модифіковані клітинні фактори рестрикції, інгібітори злиття, а також різні агенти, що порушують експресію корецептора ВІЛ CCR5.

    вимкнення рецепторів

    Після того як було встановлено, що для проникнення в клітину ВІЛ необхідна взаємодія вірусної частинки з рецептором CD4 і корецептор CCR5 або CXCR4, виникла ідея виключення цих рецепторів для захисту клітини від зараження. Від маніпуляцій з рецепторами CD4 і CXCR4 в генній терапії довелося відмовитися, тому що було показано, що вони необхідні для нормального функціонування клітин [22]. Блокування ж CCR5, навпаки, виявилося багатообіцяючим. Було показано, що наявність поліморфного варіанту гена ССR5A32, що містить делецию 32 п.н. і кодує нефункціональний білок, зменшує ймовірність інфікування та уповільнює розвиток захворювання [23]. Серед ВІЛ-інфікованих осіб частота народження гетерозигот знижена в порівнянні 18 з такою в популяції в 3 рази, а для гомозигот QQR5b32 описані лише поодинокі випадки зараження вірусом [23, 24]. Важливо відзначити, що не було виявлено патологій, асоційованих з наявністю делетірованного варіанти OGR5.

    Яскравим свідченням ефективності в боротьбі з вірусом і безпеки виключення OGR5 є унікальний випадок одужання ВІЛ-інфікованого пацієнта після трансплантації кісткового мозку, отриманого від донора, гомозиготного по OOR5A32. Пересадка кісткового мозку, проведена в зв'язку з рецидивом гострої міелодной лейкемії, привела до повного заміщення пулу CD4 + -клітин крові і лімфоїдних органів донорськими клітинами без CCR5-рецептора. Пізніше відбулося і заміщення макрофагів. Незважаючи на те, що ВААРТ була перервана відразу після трансплантації, спостереження показало відсутність вірусу в плазмі і провірусної ДНК в клітинах периферичної крові протягом 46 міс після операції [25].

    Було запропоновано кілька різних способів виключення CCR5-рецептора за допомогою терапевтичних генів, в т.ч. РНК-інтерференція, розщеплення CCR5 РНК-рибозимами, нейтралізація рецептора внутрішньоклітинними антитілами, інактивація гена за рахунок внесення делеций в ДНК з використанням сайт-специфічних нуклеаз [26].

    У двох незалежних лабораторіях були створені рибозими, що розщеплюють мРНК гена OGR5, що зменшують вираженість експресії гена рецептора і тим самим інгібуючі розмноження CCR5-тропного вірусу in vitro [27, 28]. Інший підхід дозволив сконструювати ген, що кодує внутрішньоклітинний антитіло, специфічне до CCR5. В цьому випадку внутрішньоклітинні антитіла пов'язують рецептор CCR5 і утримують його в ендо- плазматичної ретикулуме, таким чином значно знижуючи кількість рецепторів на поверхні клітини. В експериментах in vitro було показано, що клітини, які експресують даний ген, були стійкі до зараження CCR5-тропний вірусом [29].

    Були досліджені різні кіРНК для стабільного виключення гена OGR5 [30 - 33]. Введення в клітини кіРНК ефективно знижувало кількість рецепторів

    на поверхні клітин і обумовлювало стійкість клітин до ВІЛ. Однак високий рівень експресії кіРНК в багатьох випадках був Цитотоксичність для клітини. Одна з причин токсичності - насичення білкових комплексів, процесує клітинні кіРНК, і конкуренція штучних кіРНК з ендогенними [34]. Крім того, при високих концентраціях кіРНК можливо інгібування інших клітинних генів за рахунок часткової комплементарності [35]. Для того, щоб уникнути цитотоксичности, було запропоновано застосовувати вектор, що містить високоефективну кіРНК під більш слабким промотором. Дослідження in vivo показали, що пересадка модифікованих цим вектором ГСК людини гуманізувати мишам приводила до зменшення вираженості експресії гена рецептора в диференційованих Т-лімфоцитах і моноцитах, при цьому побічних ефектів не спостерігалося [33].

    Ще більш привабливою альтернативою може послужити використання кіРНК, сконструйованих в формі штучних мікроРНК, що імітують ендогенні мікроРНК. Такі мікроРНК більш ефективні в порівнянні з кіРНК: значно менше число молекул мікроРНК в клітині призводить до аналогічного рівня інгібування при відсутності цитотоксичности [36 - 38]. Крім того, в складі одного транскрипту можуть бути експресувати кілька штучних мікроРНК, спрямованих проти різних ділянок гена, що дозволяє збільшити їх ефективність [38].

    Нещодавно був запропонований і випробуваний новий метод виключення рецептора за допомогою штучно створеної сайт-специфічної дезоксирибонуклеази (ферменту, що розщеплює ДНК) [39]. Така нуклеаза здатна вибірково зв'язуватися з послідовністю гена ССК5 в хромосомі і вносити в неї дволанцюжкові розрив. Після репарації в цій області ДНК утворюються делеции або вставки, що призводять до інактивації гена. Оптимізований метод обробки клітин за допомогою даної нуклеази дозволяє модифікувати близько 17% клітин, при цьому у 5-7% клітин руйнуються обидва алелі. В експериментах на гуманізувати мишах, заражених ВІЛ, відбувалася швидка селекція клітин без рецептора, і спостерігалося зменшення вірусного навантаження у тварин [40]. Результати I фази клінічних випробувань вектора, що кодує CCR5-нуклеазу, використаного для модифікації Т-лімфоцитів, досить оптимістичні (див. Нижче).

    Інгібітори злиття ВІЛ з кліткою

    Білок вірусної оболонки gp41 бере участь у злитті вірусної і клітинної мембрани, причому зближення з кліткою відбувається за рахунок взаємодії його Сі N-кінцевих ділянок. Був сконструйований короткий пептид, що повторює С-кінцеву частину gp41 (С-пептид), який, зв'язуючись з N-кінцевою частиною вірусного gp41, блокує конформаційні зміни, необхідні для злиття мембран. В результаті зараження клітини не відбувається. Один з варіантів С-пептиду (С36) довжиною 36 амінокислот є основою антиретровірусного препарату енфувіртід (Т20, Фузеон) і схвалений для застосування в клінічній практиці в 2003 р [41]. Недоліком препарату є швидке утворення стійких до нього варіантів вірусу, а також парентеральний спосіб введення, через що клінічне його використання обмежене.

    Для використання С-пептиду в генній терапії von Laer і співавт. розробили вектор, який кодує С46-пептид, який експонується на поверхні клітинної мембрани, забезпечуючи високу концентрацію білка безпосередньо в області взаємодії з вірусом. Збільшений на 10 амінокислотних залишків С46-пептид мав антивірусної активністю по відношенню до вірусів, стійких до T20. Його висока інгібуюча активність була показана на культурі первинних лімфоцитів [42].

    Клітинні фактори рестрикції

    У процесі вивчення механізмів стійкості клітин приматів до ВІЛ були виявлені фактори рестрикції - клітинні білки, здатні пригнічувати розмноження вірусу. Встановлено, що в клітинах макак-резус (Macaca mulatta) захист від вірусу забезпечує мавпячий білок rhTRIM5a, який зв'язується з капсидом віріона і викликає його деградацію до освіти провируса [43]. Дослідження людського гомолога білка huTRIM5a показало, що він неефективний по відношенню до ВІЛ, однак зміна всього одного амінокислотного залишку в області зв'язування капсида робить клітини більш стійкими до ВІЛ [44]. Заміна 11 амінокислотних залишків у білку huTRIM5a на 13 залишків з білка мавп дозволила отримати химерний білок, активність якого була показана на декількох модельних системах, в тому числі in vivo на моделі гуманізувати мишей [45]. У іншого представника мавп, трехполосие дурукулі (owl monkey), клітини від зараження ВІЛ захищає білок TRIM-Cyp, перша частина амінокислотноїпослідовності якого гомологична білку TRIM, а друга - білку циклофіліном А (cyclophilin A) [46]. В процесі роботи Neagu et al. був сконструйований людський аналог, який з'єднав huTRIM5a і циклофіліном А людини в один білок, і продемонстровано пригнічення ВІЛ в CD4 + -клітинах і макрофагах, модифікованих даним геном [47].

    Виявлено і інші противірусні клітинні фактори, які можуть бути використані як потенційні агенти в генній терапії - це білки APOBEC3G і Tetherin. Однак ВІЛ має природний захист від цих чинників у вигляді білків vif і vpu, які нейтралізують дію APOBEC3G і Tetherin, відповідно. Кілька дослідників запропонували використовувати vif-стійкий APOBEC3G, отриманий за допомогою одиничної амінокислотної заміни [48, 49], а в роботі Gupta отриманий Tetherin, стійкий до вірусного vpu [50]. Показано, що в процесі реплікації ВІЛ взаємодіє з сотнями клітинних генів, деякі з яких можуть проявляти ингибирующую активність, як, наприклад, гени Mov10 [51] і CPSF6 [52].

    Комбінування антивірусних генів

    Внаслідок високої мінливості ВІЛ введення в клітину одного противірусного гена в багатьох випадках призводить до появи стійких до цього агенту варіантів вірусу. У разі пригнічення рецептора CCR5 зберігається ймовірність розмноження варіантів ВІЛ, тропних до CXCR4-рецептора, які виявляються у пацієнтів, що мають давню історію інфікування ВІЛ. Рішенням даної проблеми може стати викорис-

    тання в структурі одного вектора комбінації генів, механізм дії яких різний. Такі вектори були розроблені в декількох лабораторіях [30, 53,

    54]. «Потрійний» вектор (triple vector), що містить три різних РНК-гена (CCR5-Рибозим, TAR-пастку і кіРНК проти gag), показав хороші результати на моделі імунодефіцитних гуманізувати мишей і дійшов до клінічного випробування I фази [53]. Інший варіант комбінованого вектора, що з'явився пізніше, також включав три елементи - CCR5 кіРНК, химерний білок TRIM5a і TAR-пастку - і ефективно ингибировал ВІЛ в макрофагах і CD4 + -лімфоцитів, диференційованих з ГСК [30]. Запобігти виникненню стійких варіантів вірусу при використанні РНК-інтерференції дозволило введення чотирьох кіРНК, спрямованих проти різних ділянок вірусного транскрипта [20]. Продемонстровано успішне придушення вірусу за допомогою комбінації інгібітора злиття C46 і двох кіРНК, спрямованих проти ВІЛ РНК [54]. В цілому накопичені дані показують, що включення в вектор генетичних послідовностей, що кодують кілька антиВІЛ-агентів, дозволяє блокувати появу стійких мутантів і підсилює антивірусний ефект.

    В даний час в Росії у ФБУН ЦНДІ епідеміології Росспоживнагляду ведеться розробка протидії 19 вірусної конструкції, до складу якої повинні увійти мікроРНК проти рецептора CCR5, гібридний білок TRIM5a, антисмислового послідовність, а також TAR-пастка. Доставка цієї конструкції в клітку буде здійснюватися за допомогою лентівірусного вектора.

    Для пригнічення CCR5-рецептора створена комбінація з двох штучних мікроРНК, її ефективність продемонстрована на індикаторної лінії клітин людини [55]. Антивірусна активність інших генів показана на моделі лімфобластоідних клітинних ліній [56].

    Клінічні випробування

    Результати першого клінічного випробування антивірусного трансгени (RevM10) були опубліковані в 1996 р [57]. З тих пір в рамках напрямку по внутрішньоклітинної імунізації було ініційовано більше 30 клінічних випробувань, в яких протестовано не менше 20 генно-терапевтичних препаратів [58].

    Велика частина досліджень була проведена з метою оцінки безпеки і здійсненності трансплантації пацієнтам CD4 + Т-лімфоцитів або CD34 + ГСК, модифікованих антиВІЛ-генетичними конструкціями, тобто вони були клінічними випробуваннями I фази. У ранніх дослідженнях в якості антивірусних агентів використовували трансдомінантний білок RevM10 або Рибозим, які вводили в клітини за допомогою у-ретровирусного вектора [13]. Пацієнти добре переносили трансплантацію, серйозних побічних ефектів не спостерігалося. У всіх дослідженнях після інфузії в крові пацієнтів спостерігалося селективне виживання клітин, що експресують терапевтичні гени. Однак відсоток модифікованих клітин виявився дуже низьким, і терапевтичного ефекту досягнуто не було.

    Збільшення ефективності окремих препаратів було продемонстровано в подальших дослідженнях. Десять пацієнтів на пізній стадії розвитку СНІДу брали участь у клінічному випробуванні препа-

    рата, що включає інгібітор злиття С46 в складі у-ретровирусного вектора. Ізольовані CD4 + Т-клітини були модифіковані вектором і введені назад пацієнтам. Маркери трансгени виявляли в клітинах периферичної крові протягом одного року [59]. Вірусне навантаження не змінилася, проте спостерігалося збільшення числа і функціональної активності CD4 + Т-лімфоцитів. З урахуванням неспроможності ВААРТ і низького числа CD4 + -клітин до лікування (<200 кл / мкл) результати випробування видаються досить оптимістичними: через рік число CD4 + -клітин було вище або знаходилося на початковому рівні, у 4 з 7 пацієнтів після зміни антиретровірусних препаратів вірусне навантаження вдалося знизити до невизначуваним. Через два роки всі пацієнти залишалися живі [59].

    У 2009 р були опубліковані результати першого клінічного випробування II фази препарату для анти-ВІЛ-терапії [60]. У рандомізованому подвійному сліпому плацебо-багатоцентровому дослідженні брало участь 74 людини (38 пацієнтів у досліджуваній і 36 - у контрольній групах). у-ретровірусних вектор був використаний для перенесення в ГСК гена, що кодує Рибозим OZ1, що розщеплює геномної РНК ВІЛ в області, що кодує білки tat / vpr. Клітини CD34 +, 20 мобілізовані з кісткового мозку, збирали з периферичної крові, модифікували in vitro і вводили назад в кров пацієнтам без попереднього застосування хіміотерапевтичних препаратів, спрямованих на часткове видалення ендогенних клітин кісткового мозку (ціторедуктівних кондиціонування). Протокол випробування включав два перерви в прийомі антиретровірусних препаратів, метою яких було забезпечити селективний відбір захищених трансгенних клітин. Після трансплантації пацієнтів спостерігали протягом 46 міс, вимірюючи вірусне навантаження, оцінюючи присутність в периферичної крові модифікованих клітин, що містять ДНК і РНК рибозима, абсолютне число CD4 + -лімфоцитів в крові, а також функцію тимуса. Серйозних побічних ефектів зафіксовано не було. Через 4 тижні після інфузії ДНК і РНК рибозима можна було виявити в клітинах крові у 94% пацієнтів, а через 100 днів - тільки у 7% пацієнтів. Незважаючи на те, що рівні ДНК і РНК-трансгени виявилися нижче рівня, достатнього для кількісного визначення, через 100 днів у пацієнтів досліджуваної групи відзначалося статистично значуще зниження титру вірусних частинок. Абсолютне число клітин CD4 + у хворих з OZ1 групи в середньому було вище, ніж у контрольній групі, але різниця виявилася статистично недостовірною. Середня тривалість часу після аналітичного переривання ВААРТ до появи вірусу в крові, що вимагає відновлення терапії, в OZ1 групі склала більше 60 тижнів, тоді як в контрольній групі - 29,4 тижнів. Була встановлена ​​зворотна кореляція між вірусним навантаженням і рівнем експресії рибозима, а також кількістю пересаджених клітин [60].

    З 2003 р в клінічних випробуваннях для доставки трансгенів почали використовувати лентівірусние вектори, які здатні забезпечити стабільну експресію генів. Вперше лентівірусний вектор був застосований для перенесення в CD4 + Т-лімфоцити антисмислової РНК проти гена ENVВІЧ (вектор VRX496) [5]. У клінічному випробуванні II фази препарату VRX496 компанії VIRxSYS брали участь 17 ВІЛ-інфікованих пацієнтів, які перебували на ВААРТ. Кожен хворий отримував від 3 до 6 вливань модифікованих клітин, через 6 тижнів

    після останньої процедури проводили запланований перерву в прийомі антиретровірусних препаратів. Для оцінки результатів дослідження враховували час після скасування ВААРТ, через яке вірус знову з'явився в крові, а також рівень сталої вірусного навантаження. Переривання ВААРТ виявилося можливим у 13 з 17 пацієнтів, а отримати кінцеві показники ефективності вдалося у 8 з них. У 7 з 8 хворих спостерігали зменшення вірусного навантаження на 0,2-0,98 логарифма в порівнянні з результатами аналізів до призначення ВААРТ, число CD4 + -клітин залишалося стабільним. У одного з пацієнтів протягом 104 днів рівень вірусного навантаження знаходився нижче межі детекції (50 копій / мл), а число CD4 + Т-лімфоцитів становило більше 1200 клітин / мкл, при початковому 772 кл / мкл на тлі ВААРТ [61].

    Вельми обнадійливими є результати випробування генно-терапевтичного препарату, який кодує нуклеазу, специфічно розщеплюють ген рецептора CCR5 [62]. У випробуваннях I фази взяли участь 6 пацієнтів, які перебувають на антиретровірусній терапії, у яких число CD4 + Т-лімфоцитів становило від 200 до 500 кл / мкл. Т-клітини були зібрані з периферичної крові і трансдуціровани аденовірусні вектором, до складу якого входив ген нуклеази, потім введені назад в кровотік. В даному випадку дія ферменту має бути одноразовим, тому використовувався вектор, не вбудовується ген в хромосому. У 5 з 6 пацієнтів спостерігалося збільшення числа CD4 + на 14-й день після інфузії, після чого протягом 1 року залишалося вище, ніж до інфузії на 86-911 кл / мкл. У 3 з 5 пацієнтів відбулася нормалізація співвідношення числа CD4 + / CD8 + -клітин. Т-лімфоцити з зруйнованим CCR5-геном були виявлені в слизовій оболонці кишечника, що свідчить про нормальну здатності модифікованих клітин мігрувати в периферичні лімфоїдні органи [62]. На підставі отриманих результатів ініційовано клінічне дослідження II фази.

    Описані вище клінічні випробування свідчать про безпеку застосовуваних підходів і про поступове збільшення ефективності тестованих препаратів і процедур введення клітин. Основною проблемою залишається низька процентний вміст модифікованих клітин, що досягається після трансплантації. При використанні Т-лімфоцитів важливою умовою подолання цієї проблеми є збереження репликативного терміну життя повертаються пацієнту клітин. За результатами проведених недавно досліджень можна говорити про те, що на функціональну активність і тривалість життя клітин, що вводяться пацієнтам, драматично впливають фенотип вводяться лімфоцитів (наївні Т-лімфоцити - непрімірованние Т-клітини, клітини пам'яті, ефектори) і вибір методу маніпуляції in vitro [ 63-65]. Вже запропоновані оптимізовані способи отримання клітинної маси, збагаченої клітинами пам'яті [64, 65]. Також необхідно відзначити, що у пацієнтів з пізніми стадіями СНІДу Т-клітинна терапія може бути менш ефективною, оскільки ВІЛ-інфекція викликає порушення функцій лімфоцитів, а також зменшення Т-клітинного репертуару

    [66]. Модифікацію CD4 + -клітин часто розглядають як перший етап у клінічних випробуваннях трансгенів, оскільки метод дозволяє швидко досягти терапевтичного ефекту, а процедура є більш безпечною і простий в порівнянні з трансплантацією модифікованих ГСК.

    Застосування лентівірусних векторів вирішило проблему низької ефективності трансдукції клітин CD34 + і нестабільної експресії трансгена. Однак, як уже згадувалося, отримання великої кількості ГСК поки важко, а селективного тиску недостатньо для того, щоб відсоток цих клітин збільшувався після трансплантації, як, наприклад, в разі важкого комбінованого імунодефіциту, зчепленого з Х-хромосомою

    [67]. Значно збільшити відсоток приживлення і фракцію трансгенних клітин в циркулюючої крові дозволяє ціторедуктівних кондиціювання, що використовується в онкогематології, але висока токсичність процедури обмежує її застосування тільки у пацієнтів із злоякісними захворюваннями крові. У той же час досвід лікування генетичних захворювань за допомогою трансплантації ГСК показав, що зменшені дози хіміотерапевтичних препаратів добре переносяться пацієнтами і помітно збільшують відсоток приживляється-мости трансгенних ГСК [12, 68], відкриваючи перспективу їх використання і в генотерапіі ВІЛ. Крім того, ведеться розробка принципово нових, безпечних методів кондиціонування, заснованих на застосуванні антитіл, специфічних до ГСК [69].

    висновок

    На сьогоднішній день створено безліч генетичних конструкцій, внутрішньоклітинна експресія яких пригнічує розмноження ВІЛ або захищає чутливі клітини від зараження вірусом. При дослідженні in vitro і на тваринних моделях окремі генетичні конструкції продемонстрували високу антивірусну активність, а також дозволили запобігти розвитку резистентності вірусу. Деякі з них були протестовані в клінічних випробуваннях, де була показана безпеку генно-терапевтичних препаратів і процедур введення генів, проте досягти бажаної ефективності поки не вдалося. У зв'язку з цим триває робота щодо подальшого вдосконалення терапевтичних генів і їх комбінування, проводиться оптимізація технологій роботи з клітинами і клінічних протоколів трансплантації. На стику цих напрямків в найближчому майбутньому можна очікувати розробки ефективного генно-терапевтичного лікарського препарату, що дозволяє не тільки проводити підтримуючу терапію, але і виліковувати пацієнтів з ВІЛ-інфекцією.

    1. Baltimore D. Gene therapy. Intracellular immunization. Nature.

    1988; 335 (6189): 395-396.

    2. Engels B, Uckert W. Redirecting T lymphocyte specificity by T cell receptor gene transfer- a new era for immunotherapy. Mol. Aspects Med. 2007; 28 (1): 115-142.

    3. Puls R.L., Emery S. Therapeutic vaccination against HIV current progress and future possibilities. Clin Sci (Lond). 2006; 110 (1):

    59-71.

    4. June C.H., Blazar B.R., Riley J.L. Engineering lymphocyte subsets: tools, trials and tribulations. Nat. Rev. Immunol. 2009 року; 9 (10): 704-716.

    5. Levine B.L., Humeau L.M., Boyer J. et al. Gene transfer in humans using a conditionally replicating lentiviral vector. Proc. Natl. Acad.

    Sci. USA. 2006; 103 (46): 17372-17377.

    6. van Lunzen J., Glaunsinger T., Stahmer I. et al. Transfer of autologous gene-modified T cells in HIV-infected patients with advanced immunodeficiency and drug-resistant virus. Mol. Ther.

    2007; 15 (5): 1024-1033.

    7. Macpherson J.L., Boyd M.P., Arndt A.J. et al. Long-term survival and concomitant gene expression of ribozyme-transduced CD4 + T-lymphocytes in HIV-infected patients. J. Gene Med. 2005; 7 (5): 552-564.

    8. Payne K.J., Crooks G.M. Immune-cell lineage commitment: translation from mice to humans. Immunity. 2007; 26 (6): 674-677.

    9. Kambal A., Mitchell G., Cary W. et al. Generation of HIV-1 resistant and functional macrophages from hematopoietic stem cell-derived induced pluripotent stem cells. Mol. Ther. 2011 року; 19 (3): 584-593.

    10. Park I.H., Zhao R., West J.A. et al. Reprogramming of human somatic cells to pluripotency with defined factors. Nature. 2008; 451 (7175): 141-146.

    11. Rosenberg S.A., Aebersold P., Cornetta K. et al. Gene transfer into 23.

    humans - immunotherapy of patients with advanced melanoma,

    using tumor-infiltrating lymphocytes modified by retroviral gene transduction. N. Engl. J. Med. 1990; 323 (9): 570-578. 24.

    12. Pluta K., Kacprzak M.M. Use of HIV as a gene transfer vector. Acta Biochim. Pol. 2009 року; 56 (4): 531-595.

    13. Marathe J.G., Wooley D.P. Is gene therapy a good therapeutic 25. approach for HIV-positive patients? Genet. Vaccines Ther. 2007; 5: 5.

    14. Michienzi A., Li S., Zaia J.A., Rossi J.J. A nucleolar TAR decoy

    inhibitor of HIV-1 replication. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002; 26.

    99 (22): 14047-14052.

    21

    Mhashilkar A.M., LaVecchio J., Eberhardt B. et al. Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication in vitro in acutely and persistently infected human CD4 + mononuclear cells expressing murine and humanized anti-human immunodeficiency virus type 1 Tat single-chain variable fragment intrabodies. Hum.

    Gene Ther. 1999; 10 (9): 1453-1467.

    16. Lamothe B., Joshi S. Current developments and future prospects for HIV gene therapy using interfering RNA-based strategies. Front.

    Biosci. 2000; 5: 527-555.

    17. Castanotto D., Li J.R., Michienzi A. et al. Intracellular ribo-zyme applications. Biochem. Soc. Trans. 2002; 30 (Pt. 6): 1140-

    +1145.

    18. Amado R.G., Mitsuyasu R.T., Rosenblatt J.D. et al. Anti-human immunodeficiency virus hematopoietic progenitor cell-delivered ribozyme in a phase I study: myeloid and lymphoid reconstitution in human immunodeficiency virus type-1-infected patients. Hum.

    Gene Ther. 2004; 15: 251-262.

    19. Lee N.S., Rossi J.J. Control of HIV-1 replication by RNA interference. Virus Res. 2004; 102 (1): 53-58.

    20. ter Brake O., 't Hooft K., Liu Y.P. et al. Lentiviral vector design for multiple shRNA expression and durable HIV-1 inhibition. Mol.

    Ther. 2008; 16 (3): 557-564.

    21. Aagaard L.A., Zhang J., von Eije K.J. et al. Engineering and optimization of the miR-106b cluster for ectopic expression of multiplexed anti-HIV RNAs. Gene Ther. 2008; 15 (23): 1536-1549.

    22. Lapidot T., Kollet O. The essential roles of the chemokine SDF-1 and its receptor CXCR4 in human stem cell homing and repopulation of transplanted immunedeficient NOD / SCID and NOD / SCID / B2m (null) mice. Leukemia. 2002; 16: 1992

    2003.

    O'Brien S.J., Moore J.P. The effect of genetic variation in chemo-kines and their receptors on HIV transmission and progression to AIDS. Immunol. Rev. 2000; 177: 99-111.

    Biti R., French R., Young J. et al. HIV-1 infection in an individual homozygous for the CCR5 deletion allele. Nature Medicine. 1997; 3:

    252-253.

    Allers K., Hutter G., Hofmann J. et al. Evidence for the cure of HIV infection by CCR5A32 / A32 stem cell transplantation. Blood. 2011 року;

    117 (10): 2791-2799.

    Swan C.H., Torbett B.E. Can gene delivery close the door to HIV-1 entry after escape? J. Med. Primatol. 2006; 35: 236-247.

    ЛІТЕРАТУРА

    15.

    27. Feng Y., Leavitt M., Tritz R et al. Inhibition of CCR5-dependent HIV-1 infection by hairpin ribozyme gene therapy against CC-chemokine receptor 5. Virology. 2000; 276 (2): 271-278.

    28. Cagnon L., Rossi J.J. Downregulation of the CCR5 beta-chemokine receptor and inhibition of HIV-1 infection by stable VA1-ribozyme chimeric transcripts. Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 2000; 10 (4): 251-261.

    29. Swan C.H., Buhler B., Steinberger P. et al. T-cell protection and enrichment through lentiviral CCR5 intrabody gene delivery. Gene Ther. 2006; 13 (20): 1480-1492.

    30. Anderson J.S., Javien J., Nolta J.A., Bauer G. Preintegration HIV-1 inhibition by a combination lentiviral vector containing a chimeric TRIM5 alpha protein, a CCR5 shRNA, and a TAR decoy. Mol. Ther. 2009 року; 17 (12): 2103-2114.

    31. Butticaz C., Ciuffi A., Munoz M. et al. Protection from HIV-1 infection of primary CD4 T cells by CCR5 silencing is effective for the full spectrum of CCR5 expression. Antivir. Ther. 2003; 8 (5): 373-377.

    32. Kim S.S., Peer D., Kumar P. et al. RNAi-mediated CCR5 silencing by LFA-1-targeted nanoparticles prevents HIV infection in BLT mice. Mol. Ther. 2010 року; 18 (2): 370-376.

    33. Shimizu S., Hong P., Arumugam B. et al. A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model. Blood. 2010 року; 115 (8): 1534-1544.

    22 34. Grimm D., Wang L., Lee J.S. et al. Argonaute proteins are key

    determinants of RNAi efficacy, toxicity, and persistence in the adult mouse liver. J. Clin. Invest. 2010 року; 120 (9): 3106-3119.

    35. Jackson A.L., Linsley P. S. Noise amidst the silence: off-target effects of siRNAs? Trends Genet. 2004; 20 (11): 521-524.

    36. Silva J.M., Li M.Z., Chang K. et al. Second-generation shRNA libraries covering the mouse and human genomes. Nat. Genet. 2005; 37 (11): 1281-1288.

    37. Boden D., Pusch O., Silbermann R. et al. Enhanced gene silencing of HIV-1 specific siRNA using microRNA designed hairpins. Nucleic Acids Res. 2004; 32 (3): 1154-1158.

    38. Liu YP., Haasnoot J., ter Brake O. et al. Inhibition of HIV-1 by multiple siRNAs expressed from a single microRNA polycistron. Nucleic Acids Res. 2008; 36 (9): 2811-2824.

    39. Perez E.E., Wang J., Miller J.C. et al. Establishment of HIV-1 resistance in CD4 + T cells by genome editing using zinc-finger nucleases. Nat. Biotechnol. 2008; 26 (7): 808-816.

    40. Holt N., Wang J., Kim K. et al. Human hematopoietic stem / progenitor cells modified by zinc-finger nucleases targeted to CCR5 control HIV-1 in vivo. Nat. Biotechnol. 2010 року; 28 (8): 839-847.

    41. Lalezari J.P., DeJesus E., Northfelt D.W. et al. A controlled phase II trial assessing three doses of enfuvirtide (T-20) in combination with abacavir, amprenavir, ritonavir and efavirenz in nonnucleoside reverse transcriptase inhibitor-naive HIV-infected adults. Antivir. Ther. 2003; 8: 279-287.

    42. Egelhofer M., Brandenburg G., Martinius H. et al. Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 entry in cells expressing gp41-derived peptides. J. Virol. 2004; 78: 568-575.

    43. Strebel K., Luban J., Jeang K.T. Human cellular restriction factors that target HIV-1 replication. BMC Med. 2009 року; 7: 48.

    44. Li Y, Li X., Stremlau M. et al. Removal of arginine 332 allows human TRIM56 to bind human immunodeficiency virus capsids and to restrict infection. J. Virol. 2006; 80: 6738-6744.

    45. Anderson J., Akkina R. Human immunodeficiency virus type 1 restriction by human-rhesus chimeric tripartite motif 5alpha (TRIM 5alpha) in CD34 (+) cell-derived macrophages in vitro and in T cells in vivo in severe combined immunodeficient (SCID -hu) mice transplanted with human fetal tissue. Hum. Gene Ther. 2008; 19 (3): 217-228.

    46. ​​Sayah D.M., Sokolskaja E., Berthoux L., Luban J. Cyclophilin A retrotransposition into TRIM5 explains owl monkey resistance to HIV-1. Nature. 2004; 430 (6999): 569-573.

    47. Neagu M.R., Ziegler P., Pertel T. et al. Potent inhibition of HIV-1 by TRIM5-cyclophilin fusion proteins engineered from human components. J. Clin. Invest. 2009 року; 119 (10): 3035-3047.

    48. Bogerd H.P., Doehle B.P., Wiegand H.L., Cullen B.R. A single amino acid difference in the host APOBEC3G protein controls the primate species specificity of HIV type 1 virion infectivity factor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004; 101 (11): 3770-3774.

    49. Xu H., Svarovskaia E.S., Barr R et al. A single amino acid substitution in human APOBEC3G antiretroviral enzyme confers resistance to HIV-1 virion infectivity factor-induced depletion. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004; 101 (15): 5652-5657.

    50. Gupta R.K., Hue S., Schaller T. et al. Mutation of a single residue renders human tetherin resistant to HIV-1 Vpu-mediated depletion. PLoS Pathog. 2009 року; 5 (5).

    51. Burdick R., Smith J.L., Chaipan C. et al. P body-associated protein Mov10 inhibits HIV-1 replication at multiple stages. J. Virol. 2010 року; 84 (19): 10241-102453.

    52. Lee K., Ambrose Z., Martin T.D. et al. Flexible use of nuclear import pathways by HIV-1. Cell Host Microbe. 2010 року; 7 (3): 221-233.

    53. DiGiusto D.L., Krishnan A., Li L. et al. RNA-based gene therapy for HIV with lentiviral vector-modified CD34 (+) cells in patients undergoing transplantation for AIDS-related lymphoma. Sci. Transl. Med. 2010 року; 2 (36).

    54. Kiem H.P., Wu R.A., Sun G. et al. Foamy combinatorial anti-HIV vectors with MGMTP140K potently inhibit HIV-1 and SHIV replication and mediate selection in vivo. Gene Ther. 2010 року; 17 (1): 37-49.

    68. Woffendin C., Ranga U., Yang Z. et al. Expression of a protective gene-prolongs survival of T cells in human immunodeficiency virus-infected patients. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996; 93 (7): 2889-2894.

    69. http://www.wiley.com/legacy/wileychi/genmed/clinical/

    55. van Lunzen J., Glaunsinger T., Stahmer I. et al. Transfer of autologous gene-modified T cells in HIV-infected patients with advanced immunodeficiency and drug-resistant virus. Mol. Ther. 2007; 15: 1024-1033.

    56. Mitsuyasu R.T., Merigan T.C., Carr A. et al. Phase 2 gene therapy trial of an anti-HIV ribozyme in autologous CD34 + cells. Nat. Med. 2009 року; 15 (3): 285-292.

    57. Tebas P., Stein D., Zifchak et al. Prolonged Control of Viremia After Transfer of Autologous CD4 T Cells Genetically Modified with a Lentiviral Vector Expressing Long Antisense to HIV env (VRX496). Abstract. 17th Conference on Retrovirses and Opportunistic Infection, February 2010.

    58. Lalezari J. et al. Successful and persistent engraftment of ZFN-M-R5-D autologous CD4 T Cells (SB-728-T) in aviremic HIV-infected subjects on HAART. CROI 2011. Abstract 46.

    59 Hinrichs C.S., Borman Z.A., Gattinoni L. et al. Human effector CD8 + T cells derived from naive rather than memory subsets possess superior traits for adoptive immunotherapy. Blood. 2011 року; 117 (3): 808-814.

    60. Kaneko S., Mastaglio S., Bondanza A. et al. IL-7 and IL-15 allow the generation of suicide gene-modified alloreactive self-renewing central memory human T-lymphocytes. Blood 2009 року; 113 (5): 1006- 1015.

    61. Berry L.J., Moeller M., Darcy P.K. Adoptive immunotherapy for cancer: the next generation of gene-engineered immune cells. Tissue Antigens. 2009 року; 74 (4): 277-289.

    62. van Baarle D., Tsegaye A., Miedema F., Akbar A. Significance of senescence for virus-specific memory T cell responses: rapid ageing during chronic stimulation of the immune system. Immunol Lett. 2005; 97 (1): 19-29.

    63. Cavazzana-Calvo M., Hacein-Bey S., de Saint Basile G. et al. Gene therapy of human severe combined immunodeficiency (SCID) -X1 disease. Science. 2000; 288 (5466): 669-672.

    64. Aiuti A., Slavin S., Aker M. et al. Correction ofADA-SCID by stem cell gene therapy combined with nonmyeloablative conditioning. Science. 2002; 296: 2410-2413.

    65. Czechowicz A., Kraft D., Weissman I.L., Bhattacharya D. Efficient transplantation via antibody-based clearance of hematopoietic stem cell niches. Science. 2007; 318 (5854): 1296-1299.

    66. Glazkova D., Vetchinova A., Zhogina Y. et al. Stable reduction of CCR5 by lentiviral vector-expressed artificial microR-

    NAs. ESGCT and BSGT collaborative Congress. Brighton UK, 2011.

    67. Глазкова Д.В., Ветчинова А.С., Богословська Є.В. та ін. Генетичні конструкції для антиВІЛ-терапії. Патент на винахід РФ № 2426788, 01 березня 2010 р.

    КОНТАКТНА ІНФОРМАЦІЯ Глазкова Діна Вікторівна, кандидат біологічних наук, науковий співробітник відділу молекулярної діагностики та епідеміології ФБУН ЦНДІ епідеміології Росспоживнагляду Адреса: 111123, Москва, вул. Новогирєєвськая, ЗА E-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її. Тел. / Факс: (496) 30З-З4-23

    Богословська Олена Володимирівна, кандидат медичних наук, старший науковий співробітник відділу молекулярної

    діагностики та епідеміології ФБУН ЦНДІ епідеміології Росспоживнагляду

    Адреса: 111123, Москва, вул. Новогирєєвськая, д. ЗА

    E-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Тел. / Факс: (496) 30З-З4-23

    Маркелов Михайло Леонідович, кандидат біологічних наук, старший науковий співробітник лабораторії постге-

    автономних технологій Інституту медицини праці РАМН

    Адреса: 105275, Москва, проспект Будьонного, 31

    E-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Тел. / Факс: (496) 30З-З4-23

    Шипулін Герман Олександрович, кандидат медичних наук, завідувач відділом молекулярної діагностики

    і епідеміології ФБУН ЦНДІ епідеміології Росспоживнагляду

    Адреса: 111123, Москва, вул. Новогирєєвськая, ЗА

    E-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Тел. / Факс: (496) 30З-З4-23

    Покровський Вадим Валентинович, академік РАМН, заступник директора ФБУН ЦНДІ епідеміології

    Росспоживнагляду по науковій роботі

    Адреса: 111123, Москва, вул. Новогирєєвськая, ЗА

    E-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Тел .: (496) 974-96-46, факс: (496) 30З-З4-23

    23

    Ф


    Ключові слова: генна терапія / ВІЛ / Вірусний ВЕКТОР / антивірусні гени / GENE THERAPY / HIV / VIRAL VECTOR / ANTIVIRAL GENES

    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити