Найкраща стійкість до кріоконсервації була відзначена у ооцитів і 2-4-бластомерних ембріонів, а також у морул. Для того щоб упевнитися в життєздатності ембріонів, рекомендуємо культивування ембріона/ Заплідненої яйцеклітини в інкубаторі в 5% СО 2 протягом 1 доби при 39 оС. якщо ембріон продовжує розвиток, він вважається придатним для кріоконсервації.

Анотація наукової статті по агробіотехнології, автор наукової роботи - Айбазов А.-М.М., Мамонтова Т. В.


Область наук:

  • Агробіотехнології

  • Рік видавництва: 2013


    Журнал: Сільськогосподарський журнал


    Наукова стаття на тему 'Кріорезістентность ембріонів кіз в залежності від стадії розвитку'

    Текст наукової роботи на тему «Кріорезістентность ембріонів кіз в залежності від стадії розвитку»

    ?УДК 636.39: 611.013

    Кріорезістентность ембріонів кіз в залежності від стадії розвитку

    А.-М.М. Айбазов, д.с.-г.н, проф., Т.В. Мамонтова, к.с.-г.н. ГНУ СНІІЖК Россельхозакадеміі

    Одним з ефективних біотехнологічних прийомів, спрямованих на збереження генофонду високоцінних тварин, є метод кріоконсервації гамет. Технологія заморожування сперміїв різних тварин досить добре розроблена і успішно застосовується в науці і практиці тваринництва, в тому числі і в міжнародних експериментах, створені кріобанку сперми [1,2,3]. Що стосується кріоконсервації ембріонів, то цей метод не знайшов широкого застосування в нашій країні через низьку приживлюваності Дефростированное зигот. У той же час перевага кріохраніліща (банку) ембріонів перед банком статевих клітин полягає в тому, що ембріон є повноцінною біологічну особину, яку досить пересадити самкам-реципієнтам, щоб народилося потомство.

    За кордоном криоконсервация ембріонів застосовується вже кілька десятиліть (в основному в скотарстві), проте до цих пір ще не можна однозначно трактувати її як ефективну біотехнологію, занадто варіабельні результати і великий відсоток браку [4]. У нашій країні робилися спроби Кріоконсервувати ембріони великої рогатої худоби, однак не знайшли широкого застосування

    Що ж стосується заморожування ембріонів у кіз, то вперше такі спроби були зроблені нами в 2011 р При роботі з певним видом тварин на додачу до загальноприйнятих методів кріоконсервації ембріонів з'являється необхідність розробляти цілий пакет репродуктивних технологій, найбільш підходящий саме для цього виду.

    Методика експериментів. Дослідження проводили на дослідній станції ГНУ СНІІЖК Россельхозакадеміі. В статевої сезон були відібрані кози - донори. У них индуцировали поліовуляція за оригінальною схемою: для синхронізації статевого циклу в якості пролонгаторів лютеїнової фази використовували вушні імпланти «Крестар» (діюча речовина норгестамет); для її переривання і стимуляції оогенезу - «Фоллігон» в дозі 500 од. і «Оваген» в загальній дозі 8 мл. Синхронність овулірованія дозрілих фолікулів забезпечували застосуванням «Хорулона» - 300 од.

    Як середовище для культивування використовували власну середу для кріоконсервації ембріонів кіз [5]. Відмивання відтанути ооцитів / ембріонів після кріопротектори і їх подальше культивування здійснювали в тому ж середовищі.

    Для заморожування відбирали запліднені ооцити, ембріони на стадії 2-х, 4-х і більше бластомер, а також ембріони, які досягли стадії морули. Після еквілібраціі гамети поміщали в пайєти (соломинки) для заморожування сперми. Соломинки після фасування в них гамет запаювали ультразвуком, використовуючи для цього лінію по кріоконсервації 1му (Франція). Відтавання пайєт проводили в водяній бані при 40 ° С.

    В експерименті визначали стійкість ембріонів до кріоконсервації в залежності від їх стадії розвитку.

    Результати досліджень. В основу оцінки якості ембріонів кіз була покладена загальноприйнята класифікація ембріонів за якістю:

    1-й день розвитку. Оцінюється наявність ознак запліднення і якість зигот. Наявність в яйцеклітині 2-х пронуклеусов (Р ^ і 2-х полярних тел (РВ) вказує на нормальний розвиток процесу запліднення. Відзначають: розмір і симетричність пронуклеусов, число, кількість, рівність і розподіл нуклеоламі, включення цитоплазми;

    2-й день розвитку. На 2-у добу після злиття генетичного матеріалу сперматозоїда і яйцеклітини відбувається перше дроблення. Відзначають: ступінь фрагментації, форму і відносні розміри бластомерів.

    Тип А - ембріон відмінної якості без ануклеарних (без'ядерних) фрагментів (4А);

    Тип В - ембріон хорошої якості з вмістом ануклеарних фрагментів до 20% (4В);

    Тип С - ембріон задовільної якості з вмістом ануклеарних фрагментів від 21 до 50% (4С);

    Тип D - ембріон незадовільної якості з вмістом ануклеарних фрагментів більше 50%

    3-й день розвитку. Ембріон складається з 6-8 бластомерів.

    4-й день розвитку. Ембріон складається з 10-14 бластомерів, міжклітинні контакти ущільнюються і поверхню ембріона згладжується (процес компактизації) - стадія морули.

    В процесі експериментів були встановлені наступні видові особливості в морфології ембріонів кіз:

    - яйцеклітина і ранній ембріон покриті рясним шаром внутрішньоклітинного жиру. Для об'єктивної оцінки і роботи з клітинами необхідно їх обов'язкове центрифугування.

    -чоловічий і жіночий пронуклеус в заплідненої яйцеклітини кози одного розміру, ядерця при світловій мікроскопії, як правило, не помітні.

    Результати кріоконсервації ембріонів кіз представлені в таблиці.

    Таблиця 1 Результати кріоконсервації ембріонів різного віку

    Час культивування після дефростації Стадія розвитку і виживання ембріонів кіз

    оплодотво. ооцити (п = 5) 2-х бласт. ембріони (п = 4) 4-х бласт. ембріон и (п = 4) 6-8 бласт. ембріони (п = 2) морули (п = 3)

    Відновлення форми і розміру, шт ./% 5/100 3/75 3/75 0/0 2 / 66,6

    Через 24 год., Шт ./% 5/100 3/75 2/50 - 1 / 33,3

    Через 48 год., Шт ./% 3/60 2/50 2/50 - 1 / 33,3

    З таблиці видно, що відновлення форми і розміру відбувалося у 100% ооцитів, в той час як всі 6-8-бластомерние зародки загинули. Через 48 годин культивування лише 60% ооцитів і 50% 2-4-бластомерних ембріонів залишилися життєздатними.

    В експерименті помічений цікавий факт, який потребує свого пояснення, - ембріони на стадії морули знову набували здатність переносити глибоке заморожування.

    Таким чином, в результаті експериментів було встановлено додаткові критерії оцінки якості і вітабельності ембріонів кіз, доведено принципову можливість оборотного анабіозу гамет кіз після кріоконсервації при наднизьких температурах (-196 ° С) і визначені оптимальні параметри режиму кріоконсервації. Найкраща стійкість до кріоконсервації була відзначена у ооцитів і 2-4-бластомерних ембріонів, а також у морул. Для того щоб упевнитися в життєздатності ембріонів, рекомендуємо культивування ембріона / заплідненої яйцеклітини в інкубаторі в 5% СО2 протягом 1 доби при 39оС. Якщо ембріон продовжує розвиток, він вважається придатним для кріоконсервації.


    Ключові слова: ВІДТВОРЕННЯ /кріоконсервації /ЕМБРІОН /ЯІЦЕКЛЕТКА /ооцити

    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити