Досліджено можливість збереження життєздатності і генетичного статусу лінії мишачими ембріонами, пройшли процедури заморожування, тривалого зберігання в низькотемпературному банку (-196 ОС), розморожування і трансплантації самкам&ampреці&amp піентам. Встановлено, що 4&ampлетнее зберігання в кріобанку ембріонів мишей инбредной лінії С57ВL / 6Y не вплинуло ні на їх життєздатність, ні на генетичний статус лінії.

Анотація наукової статті по агробіотехнології, автор наукової роботи - Семенов Х. Х., Ігнатьєва Є. Л., Бескова Т. Б.


CRYOPRESERVATION OF MAMMALIAN EMBRYOS

Method of criopreservation of mouse embryos for conservation of mouse strains and their genomes has been studied. It was found that keeping C57BL / 6 inbred strain mice embryos in criobank (-196 OC) during 4 years did not affect viability and stability of genome.


Область наук:
  • Агробіотехнології
  • Рік видавництва: 2005
    Журнал: біомедицина
    Наукова стаття на тему 'Кріоконсервація ембріонів мишей інбредних ліній гарантія збереження їх генофонду'

    Текст наукової роботи на тему «Кріоконсервація ембріонів мишей інбредних ліній гарантія збереження їх генофонду»

    ?Біомедицини • № 1 2005, с. 96-102

    Кріоконсервація ембріонів мишей інбредних ліній - гарантія збереження їх генофонду

    Х.Х. Семенов, Е.Л. Ігнатьєва, Т.Б. Бескова

    Науковий центр біомедичних технологій РАМН, Москва

    Досліджено можливість збереження життєздатності і генетичного статусу лінії мишачими ембріонами, які пройшли процедури заморожування, тривалого зберігання в низькотемпературному банку (-196 ОС), розморожування і трансплантації самкам-реці-піентам. Встановлено, що 4-річне зберігання в кріобанку ембріонів мишей инбредной лінії C57BL / 6Y не вплинуло ні на їх життєздатність, ні на генетичний статус лінії.

    Ключові слова: криоконсервация, ембріони, трансплантація, хромосоми, аберації.

    Вступ

    Кріконсервація ембріонів, тобто тривале зберігання їх при низьких температурах (-196 ОС) - єдина можливість збереження генофонду деяких представників тваринного світу.

    Особливої ​​актуальності вона набуває в лабораторному тваринництві, від якості продукції якого залежать багато в чому результати біомедичних досліджень. В даний час створено таку кількість інбредних, конгенно-резистентних ліній і мутантних форм мишей, частина з яких представляє собою адекватні моделі спадкових патологій людини, таких, як діабет, м'язова дистрофія, різні форми анемії і т. Д., Що жодне, навіть дуже велике, наукова установа не в змозі утримувати весь їх набір. Крім того, завжди є загроза втрати будь-якої лінії в результаті генетичного засмічення або хвороби.

    Кріобанку можуть забезпечити повне збереження генетичної інформації у вигляді ембріонів, гонад, статевих і соматичних клітин. Можливість отримання повноцінних тварин з кріоконсерві-рованного матеріалу експериментально підтверджена для більшості лабораторних [3, 5-7, 9, 25-28], багатьох сельскохо-

    96

    зяйстенних [1, 4, 8, 11] і деяких диких тварин [21, 22].

    Роботи, присвячені кріоконсервації ембріонів, носять методичний характер, в яких автори досліджують вплив різних чинників на ефективність кріоконсервації, т. Е. На виживаність заморожене-відтанути ембріонів. Так, зокрема, особливо дискусійним залишається питання щодо вибору швидкості і кінцевої температури, до якої необхідно проводити заморожування в постійно контрольованих умовах.

    У ранніх дослідженнях по кріоконсервації ембріонів ссавців успішні результати були отримані при використанні малих швидкостей як при заморожуванні (0,2-0,5 ОС / хв), так і при розморожуванні (4-25 ОС / хв), в поєднанні з тривалим процесом контрольованого заморожування [12-15, 17-19]. Однак в більш пізніх повідомленнях [16,

    24, 26, 27] показано, що висока ефективність досягається при повільному заморожуванні (0,3-0,5 ОС / хв) і швидкому відтаванні (450-650 ОС / хв). У цих роботах крім швидкої швидкості відтавання застосовані незначні температури охолодження ембріонів з постійно контрольованою швидкістю: -25 ... -40 ОС.

    Разом з тим, питання про значення повільного заморожування активно заперечуючи-

    ється. Так, Вілладсан і співр. [23] використовували для заморожування ембріонів ссавців двоступеневі процедури. На першому етапі, до -30 ОС, використовувалася швидкість охолодження 0,3 ОС / хв, на другому, до -33 ... -36 ОС, об'єкти заморожувалися зі швидкістю 0,1 ОС / хв, а потім занурювалися в рідкий азот ( -196 ОС). Застосовуючи такий спосіб заморожування, автори отримали 60% -ву виживаність ембріонів.

    Таким чином, вибір швидкості і кінцевої температури, до якої необхідно проводити заморожування в постійно контрольованих умовах, повинен відповідати більш плавного перекладу ембріонів в рівноважний стан.

    Оптимальна швидкість охолодження - це така швидкість, при якій забезпечується запобігання утворенню внутрішньоклітинного льоду і досить швидке доведення до мінімуму зіткнення клітин з високими концентраціями солей.

    Разом з тим, оптимальна швидкість залежить від концентрації кріопротектори, а також від процедур, що використовуються при заморожуванні, т. Е. Температури, при якій здійснюється додавання кріопротектори, і часу еквілібраціі зародків з ним.

    Дослідження [20, 24-27] ефекту додавання і розведення кріопротектори при різних температурах (0, 20 і 37 ОС) на виживаність заморожене-відтанути ембріонів показали, що висока виживаність була досягнута шляхом розбавлення кріопротектори при температурі 37 ОС незалежно від температури додавання. Всі інші температурні комбінації додавання і розведення кріопротектори дають середні значення виживаності.

    В літературі по кріоконсервації ембріонів ссавців нам не вдалося виявити робіт, які вивчали вплив низькотемпературного зберігання на геном тварин. Тому в завдання цієї

    роботи входило, поряд з адаптацією методу кріоконсервації ембріонів в умовах НЦ БМТ РАМН, також дослідження впливу глибокого заморожування і тривалого зберігання їх в низькотемпературному банку (-196 ОС) на збереження генетичного статусу лінії.

    матеріали та методи

    В експерименті були використані до-імплантаційні ембріони мишей ВАLВ / c, отриманих з розплідника «Світлі Гори», і C57BL / 6JY і NMRI, що розводяться в колекційному фонді НЦ БМТ РАМН. Для кріоконсервації використовувалися ембріони в віці 3,5 днів на стадії морул і бластоцит. Це досягалося шляхом вимивання теплою середовищем 199 з статевих шляхів 2,5-3,5-місячних самок на 4-й день після виявлення вагінальної пробки в результаті нічного спарювання.

    Як кріопротектори використовували диметилсульфоксид (ДМСО). Кінцева концентраціяДМСО - 1,5 М. Додавання ДМСО здійснювали при кімнатній температурі поступово:

    0,5 М ДМСО в РВІ - 5 хв,

    1,0м ДМСО в РВІ - 5 хв,

    1,5 М ДМСО в РВІ - 25 хв.

    Кріоконсервації ембріонів проводили в пластикових трубочках з запаяними кінцями. Трубочка містилася в камеру заморожування при температурі -6 ОС. Через 5 хв проводили сідінг, т. Е. Стимулювали процес утворення льоду шляхом локального охолодження стінки трубочки з допомогою пінцета, кінці якого попередньо охолоджувалися в рідкому азоті.

    Потім здійснювали контрольоване заморожування ембріонів із середньою швидкістю 0,35 ОС / хв (0,2-0,5 ОС / хв) до температури -40 ОС. Після 3-хвилинної паузи трубочку з ембріонами переносили в контейнер, який опускали в посудину

    Дьюара з рідким азотом на тривале зберігання.

    Розморожування ембріонів здійснювали в теплій водяній бані при температурі 37 ОС. При цьому температура підвищується від -196 до +37 ОС за 24-27 секунд. Безпосередньо після відтавання, ембріони переносили в свіжоприготований розчин 1,5 М ДМСО в PBI і відмивали від ДМСО при кімнатній температурі (східчасто) в зворотній послідовності: 1,5 М ДМСО в PBI - 5 хв,

    1,0м ДМСО в PBI - 5 хв,

    0,5 М ДМСО в PBI - 10 хв.

    Потім ембріони переносили в чисте середовище PBI. Після адаптаційного періоду протягом одного-двох годин в термостаті (37 ОС) ембріони оцінюються на життєздатність. Попередня оцінка життєздатності ембріонів здійснюється шляхом прижиттєвої мікроскопії. Для остаточного тестування життєздатності ембріони трансплантують в матку псевдобеременностью самкам. Тільки народження життєздатних мишей може свідчити про успішність проведених процедур щодо заморожування та відтавання ембріонів. Як самок-реципієнтів були використані миші популяції ICR зі зміщенням терміну псевдобеременности на дві доби в порівнянні зі стадією розвитку ембріонів.

    В експерименті з дослідження впливу глибокого заморожування і тривалого зберігання ембріонів в кріобанку на збереження генетичного статусу лінії були використані дві групи мишей з лінії С57ВL / 6: досвідчена - з нащадками ембріонів, які пройшли процедури заморожування-відтавання і тривалого зберігання в кріобанку (4 роки), і контрольна - з їх аналогами, які пройшли природний процес утробного розвитку, предки яких всі 4 роки нормально розмножувалися в умовах колекційного фонду НЦ БМТ РАМН.

    98

    Контроль гомозиготности мишей дослідної групи здійснювався за генами гістосумісності (Н-генам). Критерієм гомозиготности служило 100% -ве приживлення шкірних трансплантатів. Обмін шкірними трансплантатами з хвоста (мишей контрольної групи) на бік (мишей дослідної групи) виконували на тварин однієї статі. Метод детально описаний З.К. Бландова [2].

    Також було досліджено вплив заморожування-відтавання і тривалого зберігання ембріонів на чутливість мишей лінії С57ВL / 6 до цитогенетичного ефекту тіофосфаміду (тіо-ТЕФ). Під час експерименту брали участь 2 групи мишей 2-місячного віку по 5 голів у кожній (по 4 самки і 1 самця). Чутливість оцінювали по частоті клітин кісткового мозку з індукованими хромосомними абераціями на метафазних препаратах, приготовлених через 24 години після обробки тио-ТЕФ в дозі 3 мг / кг внутрішньоочеревинно. Аналізувати по 100 клітин від кожної тварини. Методи введення мутагена, приготування препаратів і обліку хромосомних пошкоджень детально описані

    Н.І. Суркової, А.М. Малашенко [10].

    результати

    Стверджуючи численні варіанти по дослідженню впливу різних чинників на виживаність заморожене-від-таянних ембріонів, ми обрали метод, представлений вище, як найбільш ефективний в умовах НЦ БМТ РАМН.

    З метою виявлення впливу терміну зберігання та генотипу заморожених ембріонів на їх життєздатність в криобанк (-196 ОС) були закладені 357 доімплан-тационная ембріонів. У табл. 1 представлено число ембріонів кожного генотипу. Термін зберігання ембріонів в кріобанку в момент розморожування склав для генотипу С57ВL / 6 - 4 роки, для БАЬБ / с - 3 роки, NMRI - 1 рік.

    За попередньою оцінкою, близько 20% всіх ембріонів виявилися пошкодженими, причому приблизно в рівних кількостях по кожному аналізованому генотипу. Причиною ушкоджень були головним чином розриви блискучої оболонки з виходом цитоплазми або стиснення зародків, мабуть, в результаті порушеного осмотичного процесу. З 119 ембріонів генотипу С57ВL / 6, трансплантованих самкам-реципієнтам на 2-й день псевдобеременности, народився 31 живий мишеня, що становить 20,8% від загального числа закладених в криобанк, або 26,0% від числа трансплантованих ембріонів.

    Результати трансплантації заморожений-но-відтанути ембріонів у двох інших досліджених генотипів мишей аналогічні або відрізняються дуже незначно від С57ВL / 6 (табл. 1). Отже, на кінцевий результат, т. Е. На число народжених мишей з кріоконсервованих ембріонів, практично не вплинули ні тривалість терміну зберігання ембріонів в кріобанку (4 роки і 1 рік), ні їх генотип.

    Відповідь на допустимість практичного використання методу кріоконсервації ембріонів лабораторних тварин (мишей, щурів) може дати лише генетичний контроль. З досліджуваних нами ге-

    нотіпов перевірці генетичного статусу були піддані миші лінії С57ВL / 6, так як NMRI - неінбредная популяція, а миші ВАЬВ / с отримані з розплідника «Світлі гори». Перевірку мишей на го-мозіготность здійснювали методом гістосумісності. Шкірні клапті від мишей лінії С57ВL / 6, що розводяться в колекційному фонді НЦ БМТ РАМН, були трансплантовані на мишей тієї ж лінії, але отриманих після заморожування і 4-річного зберігання в кріобанку (при температурі -196 ОС). За результатами генетичного контролю встановлено, що миші, які пройшли стрес заморожування-відтавання і тривалого зберігання в кріобанку, були повністю гомозиготні, все трансплантат прижилися (термін спостереження 300 днів). Таким чином була підтверджена генетична стандартність мишей, які пройшли в ембріональній стадії процедури заморожування, тривалого зберігання в кріобанку, відтавання і трансплантації самкам-реципієнтам.

    Отже, гени, контрольовані Н-генами або генами гістосумісності, не зазнали змін. Однак відомо, що гени гістосумісності контролюють не весь геном. Тому порівняльне дослідження чувствітельнос-

    Таблиця 1

    Результати трансплантації самкам-реципієнтам (ІСЯ) заморожене-відтанути

    ембріонів мишей

    Г енотіп заморожений-но-оттаяних ембріонів Всього розморожених / пошкоджених ембріонів Транспланті- ровано ембріонів Народилося мишей живих / мертвих Частка народжених мишенят (%)

    - Від загального числа розморожених ембріонів Від загального числа транс-плантіро-ванних ембріонів

    С57L / 6JY 149/30 119 31 / - 20,8 26,0

    BALB / cY 68/11 57 13/2 22,0 26,3

    N1 ^! 140/28 112 28/2 21,4 26,8

    ти мишей до дії мутагена може дати додаткову інформацію про стан геному нащадків мишей, отриманих від ембріонів, які пережили стрес заморожування-відтавання і тривалого зберігання в кріобанку.

    Результати цитологічного аналізу клітин кісткового мозку нащадків мишей, які пройшли процес заморожування-відтавання і тривалого зберігання в низькотемпературному банку, а також їх аналогів з колекційного фонду після впливу тио-ТЕФ в дозі 3 мг / кг представлені в табл. 2.

    Зіставивши результати реального досвіду з раніше отриманими даними [10] на мишах цієї ж лінії, але з дослідженнями спонтанного рівня хромосомних пошкоджень у клітинах кісткового мозку, неважко помітити, що тио-ТЕФ в дозі

    3 мг / кг викликав достовірне збільшення клітин з абераціями в кістковому мозку обох досліджених груп мишей. Основним типом структурних пошкоджень як в дослідній групі мишей, так і в контрольній були фрагменти. Незначне число аберацій представлено кільцями і хроматидного обмінами. У контрольній

    групі мишей виявлена ​​одна клітина з множинними абераціями, т. е. у них були хромосомні пошкодження, які належать до окремих типів аберацій. Простежуючи відповідь мишей дослідної та контрольної груп на одну і ту ж дозу тио-ТЕФ, ми бачимо, що відмінності між ними по частоті хромосомних порушень в клітинах кісткового мозку не достовірні.

    Таким чином, всі маніпуляції з ембріонами, а саме заморозка, тривале зберігання при низькій температурі, розморожування, розконсервування та трансплантація прийомним матерям, не зробили значного впливу на чутливість клітин кісткового мозку народилися з них мишей. Вважаємо, що вищенаведені дослідження дають підставу вважати, що зберігання ембріонів в кріобанку не змінює їх генетичного статусу, і, отже, може бути цілком прийнятною формою збереження генофонду тварин на тривалий термін. Це означає, що зберігання ембріонів в кріобанку (-196 ОС) цілком може бути рекомендовано в практику утримання мишей як найбільш економічний спосіб їх підтримки, зокрема в колекційному фонді.

    Таблиця 2

    Чутливість клітин кісткового мозку до тио-ТЕФ в дозі 3 мг / кг у нащадків мишей С57БЬ / 6, які пройшли стрес заморожування-відтавання і тривалого зберігання в кріобанку, і їх аналогів, що розводяться в умовах колекційного фонду ГУ НЦ БМТ РАМН

    - Групи тварин Переглянуто метафаз Частота клітин (%), що містять Частота клітин (%) зі структурними абераціями

    гепи фрагменти кільця обміни множини ються аберації

    - Після кріо- 12 55 9 8 0

    консервації 500 (2,4) (11,0) (1,8) (1,6) (0,0) 14,4 ± 3,53

    З коллекці- 10 64 7 6 1

    ційного фонду 500 (2,0) (12,8) (1,4) (1,2) (0,2) 15,6 ± 3,65

    спонтанний

    рівень

    аберації 1000 8 3 - - - 0,3 ± 0,05

    100

    Обговорення результатів

    Проведені дослідження були обумовлені необхідністю гарантії збереження особливо цінних медико-біологічних моделей - інбредних ліній лабораторних мишей, які містяться в колекційному фонді НЦ БМТ РАМН.

    Аналізу піддалися ембріони від ін-брудні ліній С57ВL / 6Y, БALБ / cY і неінбредной популяції NMRI на доїмо-плантационной стадії розвитку (3,5 дня).

    Отримані результати підтвердили можливість народження живих мишей з ембріонів, які пройшли вищеназвані процедури. Хоча відсоток народження живих мишей невисокий (20%), проте він цілком гарантує відновлення лінії, так як для цього достатньо лише однієї репродуктивної пари мишей (самки і самця). Разом з тим відновлення лінії тільки тоді може вважатися можливим, коли підтверджується її генетичний статус. Контроль гомозигот-ності мишей по генам гістосумісності показав відсутність будь-яких змін в геномі лінійних мишей, т. Е. Все вони гомозиготні. На користь збереження генетичного статусу лінії свідчить також відсутність достовірної різниці по чутливості між тваринами дослідної та контрольної груп до дії мутагена в дозі 3 мг / кг.

    Отже, можна констатувати, що мета роботи досягнута, а саме - в умовах НЦ БМТ РАМН можливе створення кріобанку ембріонів мишей колекційного фонду, здатного гарантувати збереження будь-якої лінії в нього закладеної, які б зміни не мали місце (несприятлива для життя екологія або хвороби).

    висновки

    1. Отримано позитивні результати по кріоконсервації ембріонів мишей на доімплантаційної стадії розвитку.

    2. На виживаність ембріонів в рідкому азоті (-196 ° C) не вплинули ні термін зберігання (від 1 до 4 років), ні генотип тварини.

    3. Метод генетичного контролю дозволяє дати однозначну відповідь на допустимість практичного використання низькотемпературного заморожування ембріонів, а саме можливість створення кріобанку ембріонів ліній мишей колекційного фонду НЦ БМТ РАМН.

    література

    1. Білоус A.M., Грищенко В.І., Паращук Ю.С. Кріоконсервація репродуктивних клітин. Київ: Наукова думка, 1986, с. 207-211.

    2. Бландова З.К., Душкін ВЛ., Малашенко A.M., Шмідт Е.Ф. Контроль гомозиготности інбредних ліній мишей і щурів. В кн. Лінії лабораторних тварин для медикобіологічних досліджень. М .: Наука, 1983, с. 143-156.

    3. Дибан A.n. Досліди на зародках ссавців. Методи біології розвитку. М .: Наука, 1974, с. 217-245.

    4. Клинский Ю.Д., Aлексеенко A.K Трансплантація ембріонів сільськогосподарських тварин. Підсумки науки і техніки. Тваринництво та ветеринарія. М .: ВІНІТІ, 1972, т. 12, с. 84-89.

    б. Малашенко A.М., Косарев О.В. Вибір ліній мишей для тестування хімічних мутагенів. Генетика, 1984, т. ХХ, № 8, с. 128.

    6. Межевікіна Л.М., Ігнатьєва Т.В., вепр-ців Б.Н. Виживання ембріонів щурів і мишей при низькотемпературної консервації. Онтогенез, 1988, т. 19, № 5, с. 491-494.

    7. Мельникова О.В., Карнаухов В.Н., Дріняев ВЛ., Яшин ВЛ., Утешев В.К. Експрес діагностика життєздатності яйцеклітин і зародків ссавців. В кн. Консервація генетичних ресурсів. Пущино, 1984, с. 1-21.

    8. Пушкар М.С., Білоус А.М. Введення в кріобіології. Київ: Наукова думка, 1975, с. 334-337.

    9. Семенов Х.Х., Ігнатьєва О.Л. Кріоконсервація ембріонів - гарантія збереження генофонду ссавців. Ланімалогія, 1993, № 1, с. 88.

    10. Суркова Н.І., Малашенко А.М. Мутагенний ефект тио-ТЕФ у лабораторних мишей IV. Вплив генотипу і статі на частоту індукованих хромосомних аберацій в клітинах кісткового мозку. Генетика, т. XI, №1, 1975.

    11. Шихов Н.Я., Сергєєв М.І. Глибоке заморожування ембріонів сільськогосподарських тварин. Сільськогосподарська біологія, 1982, т. XVII, № 3, с. 420-426.

    12. Asahina E., Takahashi T. Survival of sea Urchin spermatozoa and embryos at very low temperatures. Cruobiology, 1977, v. 14, No. 6, 548 554.

    13. Baust I.C., Lawrence A.L. Rapid freezing an assential criterion for the successful cryopre-servation of immature larve shrimp. Cryobiology, 1977, v. 14, No. 6, 705-710.

    14. Bernard A., Fuller I. Cryopreservation of in vitro fertilized cell mouse embryos using a low glycerol concentration and normothemic cryoprotectant equlibration: a comparison with in vitro to fertilized ova. Crio-Lett., 1983, v. 4, No. 3, 171178.

    15. Betteriolge K.I. The importance of embryo or oocyte preservation in farm animal production and research. Cryobiology, 1979, v. 16, No. 6, 602-609.

    16. Miyamoto H. Factors affecting the survival of mouse embryos during freezing and thawing. I. Vitro Festil and embryo transfer, 1986, v. 3, No. 1, 28-32.

    17. Miyamoto H., Ishiboshi T. Survival of frozen thawed mouse and rat embryos in the presence of ethylene glycol. I. Reprod and Fertil, 1977, v. 50, No. 2, 373-375.

    18. Miyamoto H., Okimasu E., Ishibashi T. Survival of mouse embryos after freezing to various low temperatures under different cryoprotective agents and cooling rates. I. Zootechn. Sci. 1979, v. 50, No. 5, 312-319.

    19. Mobraaten Larry E. Mouse embriocryo-banking. I. Vitro Festil and embryo transfer. 1986, v. 3, No. 1, 28-32.

    20. Roll W.F., Meyer T. K. Fracture damage to the zonae of mammalian embryos during cryopreservation and its avoidance. Cryobiology, 1986, v. 23, No. 6, 437-439.

    21. Sheiton K., Craft I. The successful cryopreser-vation of in vitro fertilized mouse embryos. Cryo. Lett., 1982, v. 2, No. 6, 10, 305-310.

    22. Trounson A. Comparative embryo transfer in Australia. Theriogenology, 1986, v. 19, No. 1, 13-29.

    23. Willadsen S.M., Polge C., Rowson L.E., Moor R.M. Reservation of sheep embryos in liquid nitrogen. Cryobiology, 1974, v. 11, No. 6, 560-563.

    24. Whittingham D.G. Survival of mouse embryos after freezing and thawing. Nature, 1971, v. 233, No. 5314, 125-126.

    25. Wilmut I. The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of development on survival of mouse embryos during freezing and thawing. Life Sci., 1972, v. 11, No. 6, 1071-1079.

    26. Whittingham D.G., Whitten W.K. Long-term storage and eareal transport to frozen mouse embryos. I. Reprod. and Fertil, 1974, v. 36, No. 4, 433-435.

    27. Whittingham D.G. Low-temperature storage of mammalian embryos. In: Basic aspects of freeze-preservation of mouse strains. Stuttgard, 1976, 44-45.

    28. Whittingham D.G. Survival of mouse embryos frozen to -196 OC and -296 OC. Science, 1972, v. 178, No. 4, 411-414.

    CRYOPRESERVATION OF MAMMALIAN EMBRYOS H.H. Semenov, E.L. Ignatieva, T.B. Beskova

    Research Centre for Biomedical Technologies of RAMS, Moscow

    Method of criopreservation of mouse embryos for conservation of mouse strains and their genomes has been studied. It was found that keeping C57BL / 6 inbred strain mice embryos in criobank (-196 OC) during

    4 years did not affect viability and stability of genome.

    Key words: cryopreservation, embryos, transplantation, chromosomes, aberrations.

    102


    Ключові слова: криоконсервация / ембріони / ТРАНСПЛАНТАЦІЯ / ХРОМОСОМИ / аберації / cryopreservation / embryos / transplantation / chromosomes / aberrations

    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити