У даній роботі досліджено взаємозв'язок між спектральними характеристиками і показниками протеолітичної і ингибиторной активності сироватки крові і синовіальної рідини при артритах. Аналіз отриманих кореляційних залежностей свідчить про те, що в синовіальної рідини, так само, як і в сироватці крові хворих артритами, показники флуоресценції тісно пов'язані з протеолітичної активністю даних біологічних рідин. Встановлено комплексний вплив активності протеолізу і змісту основних інгібіторів на флуоресценцию сироватки крові і синовіальної рідини при артритах. Встановлені кореляційні залежності дозволили також зробити висновок про те, що біохімічні та спектральні показники сироватки крові відображають стан синовіальної рідини.

Анотація наукової статті з фундаментальної медицини, автор наукової роботи - Іванова С. В., Кірпіченок Л. Н., Кундер Е. В.


In the given work the interrelation between spectral characteristics and parameters of proteolytic and inhibitor activity of blood serum and synovial fluid in arthritis was investigated. The analysis of correlation dependences testifies that in synovial fluids as well as in blood serum of the patients suffering from arthritis parameters of fluorescence are closely connected with proteolytic activity of the given biological fluids. Complex influence of proteolytic and inhibitor activity on fluorescence of blood serum and synovial fluid in arthritis was established. The determined correlation dependences also allowed to draw a conclusion that biochemical and spectral parameters of blood serum reflect the condition of synovial fluid.


Область наук:
  • фундаментальна медицина
  • Рік видавництва: 2010
    Журнал: Вісник Вітебського державного медичного університету

    Наукова стаття на тему 'Кореляційний аналіз флуоресцентних і протеолітичних показників в сироватці крові та синовіальній рідині при артритах. '

    Текст наукової роботи на тему «Кореляційний аналіз флуоресцентних і протеолітичних показників в сироватці крові та синовіальній рідині при артритах. »

    ?© КОЛЕКТИВ АВТОРІВ 2010

    Кореляційний аналіз флуоресцентні та ПРОТЕОЛІТИЧНИХ ПОКАЗНИКІВ У СИРОВАТЦІ КРОВІ І синовіальнурідину при артритах

    ІВАНОВА С.В., КІРПІЧЕНОК Л.Н. Кундера Е.В.

    УО «Вітебський державний ордена Дружби народів медичний університет»

    Резюме. У даній роботі досліджено взаємозв'язок між спектральними характеристиками і показниками протеолітичної і ингибиторной активності сироватки крові та синовіальної рідини при артритах. Аналіз отриманих кореляційних залежностей свідчить про те, що в синовіальній рідині, так само, як і в сироватці крові хворих артритами, показники флуоресценції тісно пов'язані з протеолітичної активністю даних біологічних рідин. Встановлено комплексний вплив активності протеолізу і змісту основних інгібіторів на флуоресценцію сироватки крові і синовіальної рідини при артритах. Встановлені кореляційні залежності дозволили також зробити висновок про те, що біохімічні та спектральні показники сироватки крові відображають стан синовіальної рідини.

    Ключові слова: флуоресценція, протеолітична активність, сироватка крові, синовіальна рідина.

    Abstract. In the given work the interrelation between spectral characteristics and parameters of proteolytic and inhibitor activity of blood serum and synovial fluid in arthritis was investigated. The analysis of correlation dependences testifies that in synovial fluids as well as in blood serum of the patients suffering from arthritis parameters of fluorescence are closely connected with proteolytic activity of the given biological fluids. Complex influence of proteolytic and inhibitor activity on fluorescence of blood serum and synovial fluid in arthritis was established. The determined correlation dependences also allowed to draw a conclusion that biochemical and spectral parameters of blood serum reflect the condition of synovial fluid.

    Одним з найбільш ефективних додаткових методів контролю за гомеостазом живих систем є флуоресцентний метод. Відомо, що сироватка крові та синовіальна рідина мають власної флуоресценції як в ультрафіолетовій, так і у видимій областях [1]. В основному флуоресцентні дослідження сироватки крові та синовіальної рідини при артритах проводилися за допомогою флуоресцентних зондів. Так, спектральні параметри кому-

    Адреса для кореспонденції: 210041, м Вітебськ, вул. Чкалова, д. 41, к. 2, кв. 9, моб. + 375-297-124-124, е-Шаї: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.. - Іванова С.В.

    тами синовіальної рідини були інформативні при вивченні різних захворювань суглобів за допомогою зондової флуоресценції [2, 3]. Відомостей про дослідження власної флуоресценції даних біологічних матеріалів вкрай мало. Було встановлено, що визначення спектрально-флуоресцентних характеристик синовіальної рідини може бути використано як додатковий метод, що дозволяє з високою точністю діагностувати пігментний Ворсинчасті-вузловий синовит (ПВУС) [4]. Основні відмінності власної флуоресценції синовіальної рідини при ПВУС зак-

    Люча в зміщенні положення максимуму спектра в більш довгохвильову область у порівнянні з положенням максимумів спектрів флуоресценції синовитов іншої етіології.

    Одними з основних компонентів, що впливають на кількісний і якісний склад сироватки крові та синовіальної рідини при патології, є продукти про-теоліза білків, звані пептидами середньої маси. Різні патологічні стани супроводжуються збільшенням їх вмісту в сироватці крові, синовіальної рідини і порушеннями в роботі протеолити-чеський і інгібіторної системи. Вони мають токсичну дію і є одним з показників синдрому ендогенної інтоксикації організму [5-7].

    При захворюваннях суглобів також спрацьовують такі патогенетичні механізми розвитку синдрому ендогенної інтоксикації, як біохімічний та імунологiчний - неконтрольована активація протеолізу з пригніченням його природних інгібіторів, порушенням загального ферментативного гомеостазу організму і імунологічні порушення з накопиченням продуктів розщеплення пластичного матеріалу [7]. Згідно з літературними даними, протеолітична активність сироватки крові і синовіальної рідини при артритах підвищувалася, а відомості про зміст основних інгібіторів протеолізу носили різноспрямований характер [8-11]. Суперечливість літературних даних свідчить про те, що до сих пір залишається багато незрозумілих моментів в механізмах дії протеїназ-інгібіторної системи і окремих її компонентів при артритах.

    Протеолітичні процеси, утворення комплексу між ферментом і субстратом, ферментом та інгібітором супроводжуються істотними перебудовами в білкових молекулах, що, безсумнівно, повинно позначитися на флуоресценції хромофорних амінокислотних залишків реагентів. Раніше нами була виявлена ​​достовірна кор -реляціонная взаємозв'язок між інтенсивністю флуоресценції продуктів ферментативної реакції і активністю протеолізу в мо-

    слушних системах in vitro [12], що передбачає використання інтенсивності флуоресценції в якості параметра, достовірно описує зміни в білкових системах при фермент-субстратні взаємодіях. Крім того, ефективність флуоресцентних методів, нечисленність флуоресцентних досліджень ферментативних взаємодій і їх кінетики in vitro [13, 14] і in vivo викликають необхідність вивчення можливого взаємозв'язку між показниками проте-олітіческой і ингибиторной активності і параметрами спектрів флуоресценції даних біологічних матеріалів при різних патологічних процесах. Можливо, флуоресцентні дослідження сироватки крові та синовіальної рідини дозволять більш досконально вивчити молекулярні механізми функціонування протеолітичної системи при гострих і хронічних запальних процесах.

    Тому метою даної роботи було більш детальне дослідження кореляційних взаємозв'язків між спектральними характеристиками даних біологічних матеріалів і їх протеолітичної і ингибиторной активністю при артритах.

    методи

    Для визначення власної флуоресценції, ферментативної і протеолітичної активності сироватки крові та синовіальної рідини було обстежено 79 хворих артритами. Дослідження проводилися у осіб обох статей у віці 30-50 років. У зазначений вище загальне число пацієнтів увійшли 33 людини з ревматоїдним артритом (РА), 21 чоловік з псоріатичний артрит (ПА) і 25 осіб з реактивним артритом (РеА). Контрольну групу (КГ) для порівняння з групами хворих (пацієнтів) склали 46 практично здорових донорів віком 30-50 років.

    Досліджуваним біологічним матеріалом була сироватка крові та синовіальна рідина людей, які зберігалися не більше 14 днів при температурі -20 ° С. Для проведення флуоріметріческого дослідження сироватку піддавали однократному раз-

    моражіванію при кімнатних умовах і потім розводили в 20 разів 0,89% -ним розчином NaCl. Зразки синовіальної рідини після однократного розморожування розводили в 10 разів 0,9% -ним фізіологічним розчином і центрифугували протягом 15 хвилин при 1500 об. / Хв. Супернатант відбирали і позначали як безклітковий екстракт синовіальної рідини. Спектри флуоресценції реєстрували безпосередньо після розведення при кімнатній температурі на Спектрофлуориметр СМ-2203 (SOLAR, Білорусь) при довжині хвилі збудження 286 нм в діапазоні 300-500 нм з використанням кварцової кювети розміром 1,2х1,2 см. Ширина вхідний і вихідний щілин монохроматоров становила відповідно 5 нм і 2 нм відповідно [15-17]. Спектри флуоресценції всіх зразків сироватки крові, синовіальної рідини і продуктів ферментативних реакцій були відкориговані за спектральної квантової чутливості відповідно технічними характеристиками приладу [18]. Інтенсивність флуоресценції (I) висловлювали в відносних одиницях (отн. Од.) [17].

    Визначення протеолітичної активності в сироватці крові та синовіальній рідині проводили з використанням в якості субстратів високостабільного в розчині низ-

    комолекулярного хромогенного з'єднання -К-а-бензоїл-Б, Ь-аргінін паранітроанілід (БАПНА) і білкового субстрату - сироватковогоальбуміну людини (САЧ).

    При використанні БАПНА для визначення загальної протеолітичної активності (ОПА) за основу брали метод Бг1аіёег В. Б. й а1. [19, 20]. Основою для визначення активності основних інгібіторів (антипротеї-приз інгібітору (АПИ) і А2-макроглобу-лина (А2-МГ)) служив метод, запропонований Т.А. Хватовой і В.Б. Бєлової [21].

    Для визначення ферментативної (бе-локрасщепляющей, протеолітичної) активності сироватки крові та синовіальної рідини в якості субстрату був також використаний САЧ [22], оскільки він є природним субстратом для протеїназ і володіє власною флуоресценцией в діапазоні 330-350 нм (в залежності від умов збудження і реєстрації спектра). Реєстрацію активності здійснювали:

    а) по зміні інтенсивності флуоресценції продуктів реакції ферментативного взаємодії з САЧ (I 338);

    б) за концентрацією ТХУ-розчинних продуктів реакції (АА280).

    Схема проведення експерименту приведена в таблиці 1.

    Таблиця 1

    Схема проведення експерименту по визначенню ферментативної (протеолітичної) активності сироватки крові та синовіальної рідини (субстрат - САЧ)

    а) Інгредієнти Кількість, мкл

    Сироватка крові або безклітковий екстракт СЖ 500

    3% САЧ (кінцева концентрація 5 г / л) 500

    0,2 М Тріс-НС1 буфер (pH 8,0) 500

    0,89% розчин №С1 1600

    Перемішати, інкубувати 90 хвилин при 1 = 37 ° С, виміряти інтенсивність флуоресценції продуктів реакції 1пр 338 при довжині хвилі збудження 286 нм в діапазоні 300-500 нм, кювета 12 мм

    б) Сироватка крові або безклітковий екстракт СЖ 500

    3% САЧ (кінцева концентрація в розчині 5 г / л) 500

    0,2 М Тріс-НС1 буфер (pH 8,0) 500

    0,89% розчин №С1 1600

    Перемішати, інкубувати 90 хвилин при t = 37 ° G

    20% ТХУ (кінцева концентрація в розчині 2,78%) 0,5

    Проби охолодити, центрифугувати (1500 об / хв протягом 10 хв при + 5 ° С). Виміряти величину світлопоглинання в надосадової рідини при 280 нм (АЛ280), кювета 10 мм

    Для визначення протеолітичної активності реакцію зупиняли шляхом додавання трихлороцтової кислоти (Тху) в кінцевій концентрації 2,78%. Протеолити-чний активність в надосадової рідини визначали після охолодження проб і їх центрифугування (1500 об / хв протягом 10 хв при 5 ° С) за величиною светопоглощения при 280 нм [22] і виражали в умовних одиницях (AA280).

    Статистичну обробку результатів експериментів проводили за допомогою пакета прикладних програм «Statistica 6.0». Виявлення функціональних взаємозв'язків між досліджуваними параметрами (кореляція) проводилося за допомогою обчислення коефіцієнта рангової кореляції Спірмена (r Спірмена) із зазначенням виду і значущості (достовірності) коефіцієнта кореляції (Р) [23, 24].

    результати

    Раніше [25, 26] нами було встановлено, що такі параметри, як інтенсивність власної флуоресценції (I,), продуктів ферментативної реакції взаємодії з САЧ (I 338), показники протеолітичної і ингибиторной активності сироватки крові та синовіальної рідини (ОПА, АПИ, a2 -МГ) при артритах достовірно описують даний патологічний процес і можуть використовуватися в якості його додаткової характеристики.

    Для встановлення наявності та ступеня зв'язку між показниками протеолітичної активності (ОПА, AA280), змістом основних інгібіторів в сироватці крові (АПИ, a2-МГ) і її спектральними характеристиками (I333, I 338) нами досліджувалися відповідні кореляційні зв'язки між цими показниками в кожній окремо взятої групи хворих артритами і в КГ.

    У контрольній групі (рисунок 1 А) була встановлена ​​помірна позитивний кореляційний зв'язок між показниками протея-лізу ОПА і a2-МГ (r = 0,54; P<0,05), що пояснюється адаптивним синтезом і / або викидом інгібіторів у відповідь на підвищення протея-літичної активності. помірна отрица-

    кові зв'язок між ОПА і АПИ (r = - 0,42; P<0,05), ймовірно, свідчить про підвищення споживання АПИ не тільки як інгібітора протеолізу, але і як реактантов гострої фази. Було також встановлено, що у здорових донорів була помірна негативна зв'язок між між 1пр 338 і ДА280 (r = - 0,41; P<0,05), що відповідає даним, отриманим нами раніше в експерименті in vitro [12]. Крім того, виявлено помірна позитивний кореляційний зв'язок між I 338 і А2-МГ (r = 0,42; P<0,05) і помірна негативна зв'язок між I 338 і АПИ (r = - 0,42; P<0,05), аналогічно кореляційним зв'язкам між ОПА - А2-МГ і ОПА - АПИ. Однотипність кореляційних зв'язків, ймовірно, підтверджує, що показник I 338 відображає активність протеолітичних процесів в сироватці крові КГ.

    Зовсім іншим був характер кореляції флуоресценції і показників протея-лізу в сироватці крові хворих РА, РеА і ПА (рисунок 1 Б, В, Г). Кореляція між інтенсивністю флуоресценції продуктів розщеплення САЧ (I "") і а-МГ мала місце толь-

    4 пр., 338 '2

    до при РА, але не позитивна, як в КГ, а помірна негативна (r = - 0,51; P<0,05). У групах РеА і ПА, на відміну від КГ, інтенсивність флуоресценції продуктів розщеплення САЧ (I 338) при РеА і ПА не відображала інтенсивність протеолізу ні за активністю ферментів, ні за змістом інгібіторів, оскільки не було виявлено достовірних кореляційних зв'язків між інтенсивністю флуоресценції продуктів ферментативної реакції взаємодії сироватки крові з САЧ (I 338) і показниками протеолізу.

    Несподіваним було виявлення однотипних кореляційних зв'язків між власною флуоресценцией сироватки крові і активністю протеїназ та їх інгібіторів: помірна позитивний кореляційний зв'язок між I333 і ОПА (r = 0,58; P<0,05) в групі РА і позитивний зв'язок між I333 і АПИ в групах РеА і ПА (для РеА - помірна r = 0,61; P<0,05; для ПА - сильна г = 0,76; P<0,05). Це може бути пов'язано зі складом, конформаційними змінами білків си-

    ТАПІ

    Інтенсивність флуоресценції продуктів гідролізу СЛЧ (1 ^., Зз8)

    Протеолитическая

    активність

    ------А2-МГ

    Інтенсивність власної флуоресценції (І333) Протеолитическая

    і продуктів активність

    гідролізу САЧ (Іщ,., зз »)

    333

    (^ АПИ) Р333 ^ З ^ АПИ)

    Інтенсивність власної флуоресценції (І333)

    Протеолитическая

    активність

    Інтенсивність власної флуоресценції (І333)

    Протеолитическая

    активність

    В Г

    ^ Позитивна помірна (0,3 - 0,7) кореляційний зв'язок;

    ^ Позитивна сильна (0,7 - 0,9) кореляційний зв'язок;

    - > Негативна помірна (0,3 - 0,7) кореляційний зв'язок; , Негативна сильна (0,7 - 0,9) кореляційний зв'язок.

    Рис.1. Кореляційні залежності між інтенсивністю власної флуоресценції сироватки крові (тисячу триста тридцять три), флуоресценцией продуктів ферментативної реакції (I 338) і показниками протеолітичної і ингибиторной активності сироватки крові при артритах і в контрольній групі. А - контрольна група; Б - ревматоїдний артрит; В - реактивний артрит;

    Г - псоріатичний артрит.

    комірчики крові внаслідок їх обмеженого протеолізу, посиленням процесу розпаду білків і накопиченням продуктів протеолізу, низько- і середньомолекулярних органічних речовин, що надходять в кров при цих захворюваннях, продуктів порушеного метаболізму сполучної тканини [7].

    Взаємозв'язок між інтенсивністю флуоресценції і протеолітичної активністю синовіальної рідини при артритах в кожній окремо взятій групі була дещо іншою, ніж в сироватці крові, і виражалася в наступних кореляційних залежностях (рисунок 2 А, Б, В).

    У синовіальній рідині хворих РА (рисунок 2 А) спостерігалася сильна негативна зв'язок між I 338 і ОПА (r = - 0,90; Р<0,05) і помірна негативна зв'язок між 1пр., 338 і АА280 (r = - 0,4 !; Р<0,05). В групі

    хворих на РеА (рисунок 2-Б) показник I 338 мав помірну негативну кореляційний зв'язок з АПИ (r = - 0,53; Р<0,05), а показник 1335 - сильну позитивну зв'язок з ОПА (r = 0,80; Р<0,05). Для синовіальної рідини хворих ПА (рисунок 2 В) була характерна сильна негативний кореляційний зв'язок між I 338 і АПИ (r = - 0,89; Р<0,05) і помірна негативна зв'язок між I 338 і АА280 (r = - 0,50; Р<0,05). Негативні кор -реляціонние зв'язку між I 338 і АА280 в синовіальній рідини в групах хворих РА і ПА відповідають результатам, отриманим

    нами раніше для модельної системи розщеплення САЧ трипсином in vitro [12] (як і в сироватки крові КГ).

    Щоб встановити можливий взаємозв'язок між процесами, що відбуваються в сироватці крові та синовіальній рідині, нами були досліджені додаткові кореляційні зв'язки. Для цього було проведено аналіз співвідношення показників протеолити-чеський активності (ОПА, ДА280), змісту основних інгібіторів (АПИ, а 2-МГ) і спектральних характеристик (I333, I335, I 338) між синовіальною рідиною і сироваткою крові для кожного показника окремо ( малюнок 3 А, Б).

    Отримані кореляційні залежності були наступними. У групах хворих РА і РеА (рисунок 3 А) була виявлена ​​силь-

    Інтенсивність флуоресценції продуктів гідролізу САЧ (1пр., Зз «)

    Протеолитическая

    активність

    А

    власної флуоресценції (I335) і продуктів гідролізу САЧ (1пр., зз «)

    Протеолитическая

    активність

    Інтенсивність флуоресценції продуктів гідролізу САЧ (Іщ ,, зз «)

    Б

    Протеолитическая

    активність

    В

    позитивна помірна (0,3 - 0,7) кореляційний зв'язок; позитивна сильна (0,7 - 0,9) кореляційний зв'язок; негативна помірна (0,3 - 0,7) кореляційний зв'язок; негативна сильна (0,7 - 0,9) кореляційний зв'язок.

    Рис.2. Кореляційні залежності між інтенсивністю власної флуоресценції синовіальної рідини (1335), флуоресценцией продуктів ферментативної реакції I 338 і показниками протеолітичної і ингибиторной активності синовіальної рідини при артритах. А - ревматоїдний артрит; Б - реактивний артрит; В - псоріатичний артрит.

    (^ ОПА) ^ -------> (^ ОПА) (^ АПИ>------До ^ АПИ)

    Сироватка Синовіальная Сироватка Синовіальная

    крові рідина крові рідина

    А Б

    позитивна сильна (0,7 - 0,9) кореляційний зв'язок.

    Рис.3. Кореляційні взаємозв'язки між сироваткою крові та синовіальної рідиною за показниками протеолітичної і ингибиторной активності у хворих артритами.

    А - ревматоїдний і реактивний артрити; Б - псоріатичний артрит.

    ная позитивний кореляційний зв'язок між сироваткою крові та синовіальної рідиною за показником ОПА (r = 0,71; Р<0,05 і r = 0,80; Р<0,05 відповідно). У групі ПА між сироваткою крові та синовіальної рідиною також мала місце сильний кореляційний зв'язок за змістом АПИ (r = 0,91; Р<0,05). Ймовірно, рівень ОПА в сироватці крові при РА і РеА в якійсь мірі відображає протеолітичну активність в синовіальній рідині, а зміст АПИ в сироватці крові при ПА - його зміст в синовіальній рідині.

    Інтенсивність протеолізу в сироватці крові по флуоресценції продуктів ферментативної реакції (показник I 338) при РА також мала помірну позитивну кореляційний зв'язок з аналогічним показником в синовіальній рідині (r = - 0,55; Р<0,05). Мабуть, основне значення при РА в синовіальній рідини має активність не клітин суглобової рідини, а ферментів сироватки крові, т. К. Запалення призводить до руйнування тканин уражених суглобів, посилення дренування уражених тканин, внаслідок чого підвищується проникність гістогематичні бар'єрів, що збільшує темпи надходження аутоантитіл, а також цитолитических і цитотоксичних лімфоцитів [27].

    висновок

    Аналіз отриманих кореляційних залежностей свідчить про те, що в синовіальній рідині, так само, як і в сироватці крові хворих артритами, показате-

    Чи флуоресценції тісно пов'язані з їх протеолітичної активністю. Інтенсивність власної флуоресценції сироватки крові і синовіальної рідини в максимумі спектру у всіх групах хворих корелювала з інтенсивністю протеолізу, що виражалося в позитивній кореляційної зв'язку з ОПА або АПИ.

    Інтенсивність флуоресценції продуктів ферментативної реакції взаємодії і сироватки крові і синовіальної рідини з САЧ (I 338) мала в основному негативну кореляційний зв'язок з інтенсивністю протеолізу і змістом основних інгібіторів.

    Встановлена ​​in vivo в КГ в сироватці крові, у хворих РА і ПА в синовіальній рідині кореляційний взаємозв'язок між інтенсивністю флуоресценції продуктів реакції гідролізу САЧ ензимами сироватки крові і синовіальної рідини (I 338) і білок-розщеплює активністю (AA280) носила такий же характер, як і для модельної системи розщеплення САЧ трипсином, встановлена ​​нами раніше. При РеА подібної залежності виявлено не було.

    Кореляційні зв'язки між сироваткою крові та синовіальної рідиною по аналогічним показникам виявили сильну позитивну кореляцію в групах хворих Ра і РеА за показником ОПА, а також сильну позитивну кореляційний зв'язок в групі ПА за змістом АПИ.

    Виявлені зміни інтенсивності показників флуоресценції і протеолі-ної активності в сироватці крові та синовіальній рідині і різні типи кор-

    реляції між ними свідчать про вперше виявленого взаємозв'язку власної флуоресценції, флуоресценції продуктів ферментативної реакції з активністю про- теолитическими ферментів і їх інгібіторів.

    література

    1. Черницький, Е. А. Спектральний люмінесцентний

    аналіз в медицині / Е. А. Черницький, Е. І. Слобожанин. - Мінськ: Наука і техніка, 1989. - 141 с.

    2. Використання флуоресцентних зондів в досліджень-

    ванні компонентів синовіальної рідини при патології суглобів / Є. І. Слобожанин [и др.] // Вага. Нац. Акад. навук Беларусі. Сер. мед. навук. - 2006. -№ 4. - С. 10-14.

    3. Козлова, Н. М. Дослідження синовіальної рідини

    за допомогою флуоресцентних зондів / Н. М. Козлова [и др.] // IV з'їзду фотобіологія Росії: зб. тез. доп. на IV з'їзді фотобіологія Росії, 26-30 сент. 2005. р Саратов. - С. 76-78.

    4. Спектрально-флуоресцентне дослідження синові-

    ального випоту в діагностиці хронічних захворювань суглобів / Є. І. Слобожанин [и др.] // Ревматологія. - 1990. - №1. - С.32-34.

    5. Зубовская, Е. Т. Синдром ендогенної інтоксикації. /

    Е.Т. Зубовская, В. Г Колб // Охорона здоров'я Беларусі.- 1994.- №9.- С. 60-65.

    6. Зайденберг, М. А. Зміна флуоресценції триптих-

    фана в сироватці крові як можливий показник розвитку генералізації гнійної інфекції / М. А. Зайденберг, Р. П. Терехова // Біохімічні проблеми хірургії: зб. наук. тр. - М., 1991. - С. 47-61.

    7. Корякіна, Е. В. Особливості патогенетичних хутра-

    низмов ендогенної інтоксикації у хворих на ревматоїдний артрит / Є. В. Корякіна, С. В. Бєлова // Науково-практична ревматологія. - 2001. - № 1.

    - С. 1-7.

    8. Руденко, В. Г. Протеолітичні ферменти і їх Інги-

    бітори при артритах / В. Г. Руденко, Ю. В. Руденко // Ревматологія. - 1990. - № 4. - С. 42-50.

    9. Трофименко, Н. А. Особливості запальної ре-

    акції при колагенозах. / Н. А. Трофименко [и др.] // Бюлетень сибірської медіціни.- 2004.

    - №4. - С. 21- 25.

    10. а-2-макроглобулин, його комплекси з і деякі

    фактори гуморального імунітету при ревматоїдному артриті / В. Н. Зоріна [и др.] // Науково-практична ревматологія. - 2006. - №1. - С. 22-27.

    11. Комплекси альфа-2-макроглобуліну з антитілами клас-

    са! ^, плазміном і їх взаємозв'язок з іншими факторами гуморального імунітету при розвитку ревматоїдного артриту / В. Н. Зоріна [и др.] // Медична імунологія. - 2005. - Т. 7, № 5-6. - С. 557-562.

    12. Іванова, С. В. Власна флуоресценція челове-

    чеського сироватковогоальбуміну і продуктів його протеолітичного розщеплення / С. В. Іванова,

    Л. Н. Кірпіченок // Вести НАН Білорусі. Сер біол. наук. - 2009. - №4. - С. 82-88.

    13. Бурштейн, Е. А. Люмінесценція ароматичних амінокислот і білків в розчинах при порушенні в короткохвильової ультрафіолетової області. / Е. А. Бурштейн // Біофізика. - 1961. - Т. 6, В.6. -З. 753-763.

    14. Дослідження конформаційних переходів в уреа-

    зе / Е. А. Черницький [и др.] // Біофізика. - 1968. -Т. 13, В.4. - С. 581-586.

    15. Дюбко, Т. С. Про деякі аспекти застосування Флу-

    оресцентного аналізу в кріобіології. 1. Власна флуоресценція білків / Т. С. Дюбко // Вісник Харків. нац. ун-ту. Сер. біологія. - 2006. - В. 3. -№ 729. - С. 221-231.

    16. Черницький, Е. А. Люмінесценція і структурна лабільність білків в розчині і клітці / Е. А. Черницький. - Мінськ: Наука і техніка, 1972. - 258 с.

    17. Лакович, Дж. Основи флуоресцентної спектроско-

    ПІІ / Дж. Лакович. - М .: Світ, 1986. - 496 с.

    18. Левшин, Л. В. Оптичні методи дослідження молекулярних систем / Л.В. Левшин. ч.1 .: Молекулярна спектроскопія / Л. В. Левшин, А. М. Салец-кий - М .: Изд-во МГУ, 1994. - 158 с.

    19. Erlanger, D.F. The preparation and properties of two new chromogenic substrates of trypsin / D.F. Erlanger, N. Kokowsky // Arch. Biochem. Biophys. - 1961. -Vol. 95, N 2. - P. 271-278.

    20. Назаренко, Г. І. Клінічна оцінка результатів лабораторних досліджень. / А. А. Кишкун, Г. І. Назаренко - М .: Медицина, 2000.- 542 с.

    21. Хватів, В .Б. Прискорений метод визначення основ-

    них інгібіторів протеїназ в плазмі крові людини: метод. рекомендації / В. Б. Хватів, Т. А. Бєлова; МОЗ РРФСР. - М., 1981. - 16 С.

    22. Олексієнко, Л. П. Сучасні методи в біохімії

    / Л. П. Олексієнко - М., 1968.- С. 115-130.

    23. Авіва, П. Наочна медична статистика: пров. з

    англ. / П. Авіва, К. Себін; під ред. В. П. Леонова. -2-е изд. - М .: ГЕОТАР-Медіа, 2009. - 168 с.

    24. Реброва, О. Ю. Статистичний аналіз медичних

    даних. Застосування пакета прикладних програм Statistica / О. Ю. Реброва. - М .: Медіасфера, 2003.

    - 312 з.

    25. Іванова, С. В. Спектрально-флуоресцентний аналіз

    і протеолітична активність сироватки крові і синовіальної рідини при артритах. / С. В. Іванова [и др.] // Журн. Гродно. держ. мед. ун-ту. - 2009. -№ 4. - С. 73-77.

    26. Іванова, С. В. Порівняльний аналіз власної флуоресценції і протеолітичної активності сироватки крові та синовіальної рідини при артритах / С. В. Іванова // Укр. ВГМУ - 2009. -Т. 8, № 4. - С.100-105.

    27. Молекулярні механізми иммунопатогенеза і терапії при ревматоїдному артриті / Н. А. Зорін [и др.] // Тер. архів. - 2005. - №12. - С. 88-91.

    Надійшла 14.07.2010 р Прийнята до друку 02.09.2010 р.


    Ключові слова: флуоресценції / протеолітичнаактивність / СИРОВАТКА КРОВІ / синовіальна рідина

    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити