ефективність трансформації картоплі залежить від генотипу рослини і штаму агробактерії. Генотипи з високою регенераційної здатністю володіють високою здатністю до трансформації. Показано, що трансгеноз гена Bt підвищує стійкість картоплі до колорадського жука, а трансгеноз гена ipt не впливає на стійкість.

Анотація наукової статті по агробіотехнології, автор наукової роботи - Богомаз Д. І.


Efficiency of potato transformation depends on plant genotype and bacterial strain. Genotypes with high regeneration ability have high transformation ability. It is shown, that transgenosis of Bt gene increases potato resistance to collorado potato beetle, transgenosis of ipt gene does not influence on resistance.


Область наук:
  • Агробіотехнології
  • Рік видавництва: 2005
    Журнал: екологічна генетика

    Наукова стаття на тему 'Analysis of interaction of plant genotype and strain Agrobacterium tumefaciens in breeding of potato resistance to Colorado potato beetle'

    Текст наукової роботи на тему «Analysis of interaction of plant genotype and strain Agrobacterium tumefaciens in breeding of potato resistance to Colorado potato beetle»

    ?ЕКОЛОГО-ГЕНЕТИЧНІ МОДЕЛІ

    Д.І. Богомаз

    Санкт-Петербурзький

    державний

    університет

    Ефективність трансформації картоплі залежить від генотипу рослини і штаму агробактерії. Генотипи з високою регенераційної здатністю володіють високою здатністю до трансформації. Показано, що трансгеноз гена Bt підвищує стійкість картоплі до колорадського жука, а трансгеноз гена ipt не впливає на стійкість.

    Ф Ключові слова: агро-трансформація; картопля; стійкість.

    ВИВЧЕННЯ взаємодії генотипу РОСЛИНИ І ШТАМУ AGROBACTERIUM TUMEFACIENS ПРИ ОТРИМАННЯ ФОРМ КАРТОПЛІ,

    Стійкої до колорадського жука

    ВСТУП

    Розробка ефективних методів регенерації, вивчення процесів морфогенезу in vitro особливо необхідно для найважливіших сільськогосподарських культур. Це обумовлено тим, що дані процеси лежать в основі практично всіх сучасних біотехнологічних методів - будь то клональное мікророзмноження, оздоровлення посадкового матеріалу, клітинна селекція або трансформація. Раніше в літературі багаторазово обговорювалося питання про залежність процесів регенерації in vitro від генотипу. Показано також, що і інтенсивність трансформації визначається генотипом рослини і залежить від штаму бактерії, з допомогою якого здійснено цей процес. Однак роботи, присвячені вивченню взаємозв'язку явищ трансформація-генотип рослини-штам бактерії, були виконані в основному з використанням різноманітних штамів агробактерій дикого типу [1, 3]. В даний час, коли в світовій практиці стоїть проблема отримання трансгенних рослин, стійких до абіотичних і біотичних факторів середовища, все ще залишаються невирішеними питання про роль сорту і комерційних штамів у всьому їх різноманітті, в ефективності трансформації. Добре відомо, що в результаті трансформації навіть в межах однієї пари сорт-штам можна отримати широке коло мінливості, як результат випадкового вбудовування Т-ДНК в геном рослини. Тому для отримання трансгенного рослини із заданими властивостями необхідно мати велике число трансгенних рослин, серед яких можливо було б провести спрямований відбір. Все вищесказане вказує на необхідність проведення досліджень, спрямованих на виявлення чинників, що визначають ефективність трансформації, до яких в першу чергу слід віднести підбір генотипу рослини, штаму бактерії (вектора), а також умов і конкретних методів експерименту, таких як живильне середовище, тип експлантов. У наших попередніх роботах була вивчена внутрішньовидова мінливість сортів картоплі по регенераційної здатності та вплив на цей показник умов культивування [4].

    Це дослідження присвячене вивченню взаємодії генотипу рослини і штаму бактерії при отриманні рослин, стійких до колорадського жука за допомогою трансформації геном Bt токсину (Bacillus thuringiensis) [5] і геном ipt (Agrobacterium tumefaciens) [6]. Показана залежність між інтенсивністю трансформації і штамом агробактерії (вектором) використаним для трансформації.

    У конкретні завдання дослідження входило:

    • вивчення здатності до трансформації у генотипів з різною регенераційної здатністю;

    • отримання колекція трансгенних рослин, що містять бактеріальний ген Bt з Bacillus thuringiensis, ген з Agrobacterium tumefaciens-ipt, що кодує ключовий фермент біосинтезу цитокінінів;

    • вивчення морфологічних змін у трансгенних рослин в порівнянні з вихідними формами;

    • дослідження рівня польової стійкості до колорадського жука трансгенних по гену Bt і гену ipt рослин картоплі.

    МАТЕРІАЛ І МЕТОДИ

    В роботі використані сорти картоплі Solanum tuberosum, рекомендовані до обробітку в Північно-Західному регіоні - Невський, Єлизавета, Чародій, Санте, Луговський, Різдвяний (матеріал люб'язно наданий Північно-Західним НІІСХ). В роботі також використовували рослини тютюну (Nicotiana tabacum) в якості негативного контролю при проведенні ПЛР.

    У роботі використовували штами Agrobacterium tumefaciens, характеристики яких представлені в табл. 1. Штами люб'язно надані проф. Онджеем M. (Institute of Molecular Biology, Czech Republic), проф. Шеллом Д. (Max Plank Institute, Germany) і проф. Шемякін M. (Інститут сільськогосподарської біотехнології, Mос-ква).

    Для отримання асептичних експлантов in vitro використовували бульби. В умовах ламінарного боксу поверхню бульби обробляли 70% -м спиртом протягом 5 хвилин, потім стерилізували концентрованої перекисом водню

    Таблиця 1

    Характеристики штамів A. tumefaciens, використаних в роботі

    Назва штаму Гени стійкості кселектівним агентам Стерпні цільові трансгени Джерело отримання

    pGV 385G Kmr npt II - Онджей M.

    pGV 385G Tr4 npt II Ipt Онджей M.

    pGV 385G / 941 Kmr npt II - Шелл Д.

    pGV 385G / 941tf npt II Bt Шемякін М.

    A4 tf Rijr npt II Bt Шемякін М.

    20 хвилин або 15% -м розчином комерційного препарату «Доместос» 30 хвилин і промивали стерильною дистильованою водою. Далі здійснювали діссекцію бульби на диски діаметром 1,5 см і товщиною 5 мм.

    Агробактеріальної трансформацію картоплі проводили з використанням бульбових дисків в якості експлантів. Бактерії розмножували наступним чином: в 20 мл середовища для бактерій LB (Мані-Атіс) з антибіотиками (рифампіцину 50 мкг / мл, канаміцину 50 мкг / мл), додавали 1,5-2 мікробіологічні петлі біомаси агробактерій (106 бактерій) і інкубували на гойдалці з круговим обертанням частотою 200 об / хв і амплітудою 40 мм протягом 16 годин при температурі 24 ° с. Інокуляцію здійснювали на 3-4 день культивування експлантів нерозведеної суспензією агробактерій. Кокультівацію з бактерією проводили протягом доби на живильному середовищі МС [7] без гормонів (в разі використання штамів з геном ipt) або МС з 3 мг / л фітогормону бензіламінопу-рин (БАП) для регенерації пагонів (в разі інших штамів); далі експланти поміщали на ту ж середу з канаміцином в концентрації 100 мг / л і кла-фораном для пригнічення росту агробактерій в концентрації 500 мг / л. Для контролю використовували не-інокульовані експланти. Через кожні 7 днів експланти переносили на свіжу середу з антибіотиками, зменшуючи концентрацію клафорана до 3 пасажу до 100 мг / л. Регенерувати пагони відокремлювали і поміщали на середу МС з канаміцином в концентрації до 200 мг / л. Стійкі до Канамі-цину пагони живцювати і поміщали на середу МСО.

    Частина вегетативного потомства рослин-реге-нерантов використовували для виділення ДНК [8]. Для доказу їх трансгенної природи використовували метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Іншу частину вегетативного потомства підтримували в пробірках і далі (в разі позитивного результату ПЛР) переводили в польові умови.

    Для проведення ПЛР використовували праймери до гену ^ Ш, який визначає стійкість трансгенних тканин до канаміцину:

    ^ АтаалалаастАттсаастлталс;

    ^ слсслталтАттсааслласлаас,

    синтезовані компанією Синтол (Росія).

    Обсяг реакційної суміші для ПЛР становив 50 мкл. До її складу входили 300 нг матричної ДНК, 2,5 і Taq полімерази (БПекз М), буфер, запропонований фірмою-виробником ферменту, 200 мкМ кожного битро і 250 ПКМ кожного праймера. ПЛР проводили за програ-

    ме: 1 цикл - 5 хв 93 ° C, 35 циклів - 5 сек 93 ° C, 30 сек 50 ° C, 45 сек 72 ° C, 1 цикл - 5 хв 72 ° C.

    Електрофорез проводили в 1% -м агарозному гелі з буфером ТВЕ або тае. В якості маркера молекулярних ваг використовували 100 bp ladder (Сиб-Ензим, Росія).

    Оцінку стійкості отриманих форм картоплі до колорадського картопляного жука проводили на базі Всеросійського Інституту біологічного захисту рослин (м Краснодар), згідно з «Методичними рекомендаціями з вивчення та оцінки форм картоплі на стійкість до колорадського жука» [9].

    Статистичну обробку даних проводили відповідно до рекомендацій [10]. Розраховували відсоток експлантов з каллусов і пагонами in vitro, а також відсоток уражених колорадським жуком тканин рослин in vivo, і їх довірчі інтервали. У роботі використовували критерій% 2, як критерій однорідності для перевірки згоди експериментальних даних між собою.

    Раніше в нашій лабораторії була охарактеризована регенераційні здатність бульбових експлантов різних сортів картоплі. Було показано, що сорт Невський характеризується найбільшою регенераційної здатністю, сорт Єлизавета - помірної регенераційної здатністю; для сортів Луговський, Різдвяний, Санте, Чародій характерна низька регенераційні здатність [4].

    В експериментах по трансформації ми використовували сорти картоплі як з високою, так і з низькою регенераційної здатністю. Грунтуючись на літературних даних [11], ми припускали, що у сортів з мінімальною здатністю до регенерації за допомогою трансформації геном ipt вдасться максимально підвищити цей показник. Крім того, згідно з літературними даними, форми з підвищеним рівнем цітокі-Нінов мають підвищену стійкість до біотичних і абіотичних факторів навколишнього середовища [12]. Тому в експериментах по трансформації ми використовували штам з геном ipt, за допомогою якого в трансгенних рослинах можна підвищити рівень цитокінінів. При трансформації штамом з геном ipt регенерація і відбір трансформантов проводилися на середовищі MS0 без додавання гормонів. Як селективного агента для відбору трансгенних рослин в середовища для регенерації додавали канаміцин, а для пригнічення росту бактерій - клафоран. Контрольні експланти поміщали на ті ж середовища, але без обробки їх суспензією агробактерій.

    РЕЗУЛЬТАТИ І ОБГОВОРЕННЯ Отримання трансгенних рослин картоплі з генами Bt і ipt

    Регенерація картоплі в контролі була практично повністю пригнічена через присутність канаміцину в живильному середовищі. У різних варіантах досліду регенерація протікала з різною інтенсивністю. В умовах експерименту на екс-Плантах всіх сортів при трансформації використаними штамами спостерігали високий відсоток каллусообразованія, який коливався в середньому від 40 до 90%. Найбільш важливим у цих дослідах є здатність до регенерації пагонів. Залежно від штаму, яким була здійснена трансформація, сорти значно відрізнялися за регенераційної здатності. Максимальної регенераційної здатністю характеризувався сорт Невський (рис. 1). Відсоток побегообразования, наприклад, при трансформації штамом з геном, що визначає стійкість до канаміцину, досягав 100. Відносно високий відсоток побегообразования також спостерігався у сортів Єлизавета і Різдвяний (див. Рис. 1). Експланти сортів Санта і Луговський формували лише поодинокі пагони при трансформації.

    Таким чином, раніше проведений нами відбір генотипів по регенераційної здатності є важливим етапом при підборі сортів для трансформації, особливо якщо метою експериментів є отримання максимального числа трансформованих рослин. У літературі неодноразово зазначалося, що рослинні клітини, компетентні до регенерації, виявляються компетентними і для трансформації [13].

    Отримані в експериментах по трансформації пагони були вкорінені на середовищі МСО. В ході вкорінення і перенесення рослин в умови теплиці і поля нам не вдалося зберегти всі трансгенні рослини. Однак ми отримали колекцію рослин, що містять різні бактеріальні гени (табл. 2). Від 15 трансгенних рослин отримано бульбове потомство.

    Для доказу трансгенної природи отриманих рослин, крім їх попереднього відбору на селективних середовищах, проведена ПЛР з праймерами до гену ^ Ш; цифрами позначені досліджені трансгенні рослини (рис. 2). В ході реакції виявлено ПЛР фрагмент, відповідний такому в позитивному контролі (близько 600 пн). У негативному контролі фрагмент не синтезував. Даний експеримент підтверджує трансгенну природу досліджених зразків.

    1009080 и 706 050 Н 403020-ЮН 0-

    У

    Ж

    ї

    Невський

    /

    штами

    ї

    ї

    ?

    100-

    90-

    80-

    70-

    60-

    50-

    40-

    30-

    20-

    10-

    0--

    jf

    I

    f

    Різдвяний

    /

    &

    ь

    /

    &

    штами

    100 Н

    80

    60-

    40

    20-

    t

    Я 1

    IL

    JP Г-Р # <? jf

    Єлизавета

    штами

    <#

    '

    %

    100-1

    90 -

    80-

    70-

    60-

    50-

    40-

    зо-

    20-

    10-

    0-

    &

    <Г & /

    *

    f

    штами

    Санте

    Рис.1. Відсоток бульбових експлантов сортів Невський, Різдвяний, Єлизавета, Санте, що утворюють каллусов і пагони при трансформації штамами Agrobacterium tumefaciens:

    ? Експ. з калл. - експланти з каллусов; ? експ. з поб. - експланти з пагонами.

    Таким чином, в ході експериментів виявлено мінливість серед сортів картоплі за здатністю до трансформації. Крім того, показана залежність ефективності трансформації від штаму бактерії (див. Рис.1). В експериментах, проведених в нашій лабораторії, раніше вже було показано, що характер і інтенсивність трансформації залежать від штаму агробактерії [13]. До такого ж висновку прийшли і інші дослідники [14]. Однак в ранніх експериментах були використані агробактерії-альні штами з плазмідами дикого типу. У наших експериментах використані штами, що несуть

    плазміди з різними бактеріальними генами. Проте результати повторилися - інтенсивність трансформації визначається не тільки генотипом рослини, а й штамом бактерії.

    Аналіз трансгенних ліній картоплі з генами Bt і ipt на стійкість до колорадського картопляного жука

    Лінії картоплі, трансгенні яких була доведена з використанням селективної середовища і методом ПЛР, були переведені в умови in vivo.

    Таблиця 2

    Трансгенні рослини картоплі, отримані на основі агробактеріальної трансформації

    Сорт Трансгени Кількість ліній

    Невський NptII 4

    Bt 2

    Ipt 2

    Чародій Bt 1

    Ipt 3

    Єлизавета Nptll 1

    Bt 2

    З бульб на дослідному полі Всеросійського НДІ біологічного захисту рослин (м Краснодар), були вирощені рослини картоплі, які аналізували на стійкість до колорадського жука в такі строки обліку: 31.05; 10.06; 17.06; 24.06; 01.07; 09.07; 16.07. В якості контролю використовували вихідні сорти.

    На контрольних рослинах личинки і дорослі особини жука з'являлися до стадії бутонізації та починали пошкоджувати тканини рослини. Ступінь пошкодження збільшувалася протягом вегетації рослин, і до кінця цвітіння рослини ушкоджувалися повністю. За ступенем стійкості до колорадського жука розрізнялися як трансгенні рослини, так і вихідні сорти. Наприклад, контрольні рослини сорту Невський характеризувалися більшою в порівнянні з рослинами інших сортів стійкістю, проте до останніх термінах обліку рослини сорту Невський також виявилися ураженими. Слід зазначити, що згідно з біології розвитку жука, на території Ленінградської області, яка відноситься до

    четвертої (найбільш північній) зоні проживання колорадського жука, масовий вихід жука з грунту зміщений в середньому на півтора місяці щодо територій, на яких розташований дослідний полігон (перша кліматична зона розселення). Тому на території Ленінградської області пік агресивності колорадського жука доводиться на більш пізні терміни. Виходячи з того, що на території Краснодарського краю перші атаки колорадського жука рослини сорту Невський витримують, в умовах Ленінградської області можна очікувати досить високої стійкості цього сорту. Таким чином, сорт Невський можна визнати відносно стійким до колорадського жука в агрокліматичних умовах Ленінградської області, що підтверджується даними [15, 16].

    Рослини трансгенні тільки по одному селективного гену прі II, який визначає стійкість до канаміцину, були проаналізовані в тих же умовах на стійкість до колорадського жука (рис. 3). У порівнянні з контролем трансгенні рослини з геном Ірш починали дивуватися значно раніше, а одне з них вже на стадії бутонізації. У момент цвітіння одна лінія була вражена повністю.

    Трансгенні рослини з геном Еї, отримані на основі сорту Невський, характеризувалися підвищеною стійкістю до колорадського жука (див. Рис. 3). Так, рослини однієї з ліній показали стійкість, що перевершує рівень стійкості контрольних форм, статистично достовірно за всіма строками обліку. Навіть в умовах Краснодарського краю поразки понад 30% було виявлено тільки в самий останній термін обліку. Таким чином, виявлену трансгенну лінію Невський-Еї1 можна вважати стійкою для умов Ленінградської області.

    MW 1;

    І ЖЯ

    І фшш + »* & | Am | 1

    ЮОЬр р.с. п.с. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

    ladcr

    Мал. 2. Результат ПЛР на матриці ДНК трансгенних рослин картоплі з праймерами до гену Ірш. (З.С. - позитивний контроль, і.с. - негативний контроль, 1 - 15 - трансформовані рослини)

    % ураження

    % ураження

    % ураження

    терміни обліку

    Мал. 3. Динаміка ураження колорадським жуком трансгенних рослин на основі сорту Невський, отриманих при трансформації обеззаруженним вектором (зверху) і векторами, що містять генЕї (в центрі) і ген ірї (знизу)

    Стійкість трансгенних рослин сорту Невський з геном 1р / була помітно нижче, ніж в контролі (див. Рис. 3).

    Контрольні рослини сорту Єлизавета характеризувалися порівняно низькою стійкістю до колорадського картопляного жука. Рослини лінії, трансформовані обеззаружен-

    вим вектором, володіли, як і вихідний сорт, низькою стійкістю до патогену. Трансгенні рослини з геном В /, отримані на основі цього сорту, як і в випадку В / рослин сорту Невський, характеризувалися порівняно високою стійкістю до колорадського жука (рис. 4).

    Для сорту Чародій відзначена та ж тенденція: рослини з геном В / були порівняно стійкими до патогену, трансгенні рослини з геном 1р / були помітно більш чутливими до колорадського жука (рис. 5).

    В цілому, трансгенні рослини всіх проаналізованих сортів з геном В /, характеризувалися підвищеною стійкістю до колорадського жука: так, багато ліній (потомство одиничних трансгенних рослин) показали стійкість, що перевершує рівень стійкості контрольних форм статистично достовірно за всіма строками обліку. Крім того, серед стійких рослин виявилося і одну рослину, трансформоване «обеззаруженним штамом».

    Група ліній, представлена ​​трансгенними рослинами з геном синтезу цитокинина гр /, характеризувалася низькою стійкістю до колорадського жука. Таким чином, наші результати не підтверджують літературні дані [12] про те, що підвищення рівня цитокинина в рослині тягне за собою підвищення стійкості рослини до комах. Можливо, в умовах, досліджуваних нами, надлишковий синтез цитокинина і стимульовані їм ефекти приводили до підвищеного навантаження на метаболічний апарат рослини і відволікання біохімічних ресурсів останнього від реакцій, спрямованих на захист

    % ураження

    терміни обліку

    Мал. 4. Динаміка ураження колорадським жуком трансгенних рослин на основі сорту Єлизавета

    % ураження

    Мал. 5. Динаміка ураження колорадським жуком трансгенних рослин картоплі на основі сорту Чародій

    рослини. Фенотипічно трансформовані рослини не відрізнялися від рослин вихідного сорту.

    Отже, в роботі виявлено мінливість серед сортів картоплі за здатністю до трансформації. Показано, що сорти з максимальною регенераційної здатністю володіють і максимальною здатністю до трансформації. Крім того, показана залежність трансформації від штаму бактерії.

    Отримано колекція трансгенних рослин. На основі трьох сортів були отримані трансгенні лінії рослин, достовірно різняться по стійкості до патогену. П'ять трансгенних ліній проявили себе як порівняно стійкі. Серед них були лінії, трансгенні по гену Bt, і лінія, трансформована обеззаружен-ним вектором.

    ВИСНОВКИ

    1. Показана залежність між інтенсивністю трансформації і штамом агробактерії (вектором), використаним для трансформації.

    2. Підтверджено гіпотезу про те, що генотипи з високою регенераційної здатністю володіють високою здатністю до трансформації.

    3. Отримано колекція трансгенних рослин, що містять бактеріальний ген Bt з Bacillus thuringiensis, ген з Agrobacterium tumefaciens - ipt, що кодує ключовий фермент біосинтезу цитокінінів - ізопентенілфос-

    фотрансферазу і ген npt II, продукт якого надає стійкість до антибіотика канаміцину. Серед трансгенних рослин не виявлено морфологічних змін у порівнянні з вихідними сортовими формами.

    4. Підтверджено, що заходи по транс-генозу гена Bt підвищують рівень польової стійкості картоплі до колорадського жука незалежно від рівня вихідної стійкості сорту.

    5. Показано, що трансгеноз гена ipt, що кодує ключовий фермент біосинтезу цитокінів-нів - ізопентенілфосфотрансферазу, не приводить до підвищення польової стійкості вихідних сортів до колорадського жука.

    Робота здійснена за фінансової підтримки фонду CRDF і Міністерства Освіти РФ, грант ST-012-0.

    література

    1. Horsch R.B., Klee H.J., Stachel S., Winans S.C., Nester E.W., Rogers S.G., Fraley R.T. Analysis of Agrobacterium tumefaciens virulence mutants in leaf discs. // Proc. Natl. Acad. Set. - 1986. - Vol. 83, N 3. - P 2571-2575.

    2. Close T.J., Rogowsky P.M., Kado C.I., WinansS.C., Yanofsky M.F., NesterE.W. Dual control of Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid virulence genes.// J. Bacteriol. - 1987. - Vol. 169, N 11.- P 5113-5118.

    3. Jin S., Komari Т., Gordon M.P., Nester E.W. Genes responsible for the supervirulence phenotype of Agrobacterium tumefaciens A281 // J. Bacteriol. - 1987. - Vol. 169, N 10. - P 4417-4425.

    4. Богомаз Д.І. Характеристика регенераційної здатності сортів картоплі, перспективних і рекомендованих для обробітку на Північно-Заході Росії // Сб .: Біотехнологія - відродження сільського господарства в Росії в XXI столітті. - 2001. - С. 14-17.

    5. Otten L, Canaday J., Gerard J.C., Fournier P., Crouzet P., Paulus F. Evolution of agrobacteria and their Ti plasmids - a review // Mol. Plant-Microbe Interact. - 1992. - Vol. 5, N 4. - P 279-287.

    6. Bosch D., Schipper B., van der Kleij H., de Maagd R.A., Stiekema W.J. Recombinant Bacillus thuringiensis crystal proteins with new properties: possibilities for resistance management // Bio. Technology. - 1994. - Vol. 12. - P 915-918.

    7. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures // Plant Phisiol. - 1962 - Vol. 15, P 473-97.

    8. Maniatis T., Fritsch F.F., Sambrook J. Molecular cloning. A Laboratory Manual. - Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1982 - 479 p.

    9. Шапіро І.Д., Вилкова Н.А., Фасулаті С.Р., Іващенка Л.С. Методичні рекомендації з вивчення та оцінки форм картоплі на стійкість до колорадського жука. - М., 1993. 48 c.

    10. Лакіна Г.Ф. Біометрія. - М .: Вища школа, 1990. - 352 с.

    11. Ondrey M., Macas J., Kostrica P. Potato transgenosis by T-DNA

    morphoregulatory genes // Rostlina vyroba. - 1993. -

    39 (11). - P 1065-1074.

    12. Smigocki A., Neal J.W. Jr., McCanna I., Douglass L. Cytokinin-mediated insect resistance in Nicotiana plants transformed with the ipt gene // Plant Mol. Biol. - 1993. - Vol. 2. - P 325-335.

    13. Лутова Л.А., Павлова З.Б., Іванова М.М. Агробактеріальної трансформація як спосіб зміни гормонального метаболізму у вищих рослин // Генетика. - 1998. - Т. 34, № 2. - С. 165-182.

    14. Yanofsky M., Montoya A., Knauf V., Lowe В., Gordon M., Nester E. Limited-host-range plasmid of Agrobacterium tumefaciens: molecular and genetic analyses of transferred DNA // J. Bacteriol. - 1985. - Vol. 163, N 1. - P 341-348.

    15. Злотников М.Д. Можливий ареал поширення і терміни розвитку колорадського жука в Європейській частині СРСР // Тр. ВІЗР. - 1967. - Т. 27. - С. 68-74.

    16. Сауліч А.Х. Сезонне розвиток комах і можливість їх розселення // Вид-во Санкт-Петербурзького університету, 1999. - С. 117-121.

    Analysis of interaction of plant genotype and strain Agrobacterium tumefaciens in breeding of potato resistance to Colorado potato beetle

    Bogomaz D.I.

    Department of Genetics and Breeding, St.-Petersburg State University

    SUMMARY: Efficiency of potato transformation depends on plant genotype and bacterial strain. Genotypes with high regeneration ability have high transformation ability. It is shown, that transgenosis of Bt gene increases potato resistance to collorado potato beetle, transgenosis of ipt gene does not influence on resistance.

    ^ 8? KEY WORDS: potato; transformation; resistance.


    Ключові слова: АГРО-ТРАНСФОРМАЦІЯ / КАРТОПЛЯ / СТІЙКІСТЬ / POTATO / TRANSFORMATION / RESISTANCE

    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити