Резюме. Проведено оцінку характеру розподілу алельних варіантів генів цитокінів у 184 пацієнтів з повільними вірусними інфекціями (97 пацієнтів з хронічною герпетичною інфекцією і 87 ВІЛ-інфікованих пацієнтів). З використанням сучасних иммуногенетических методів було встановлено, що ступінь ризику рецидивного перебігу та несприятливого результату інфекції позитивно асоційована з генотипом АА промоторної регіону і генотипом АА промоторної регіону + 874A / T гена IFNG. Імуногенетичними фактором, що володіє протективного ефектом відносно повільних вірусних інфекцій, є аллель G ділянки G-308А гена

Анотація наукової статті з фундаментальної медицини, автор наукової роботи - Наследнікова І. О., Чернов А. С., Решетніков В. І., Уразова О. І., Новицький В. В.


TNFA, а також аллель Т і генотип ТТ промоторної регіону + 874A / T гена IFNG.Abstract. A distribution mode for allelic variants of cytokine genes was evaluated in 184 patients with slow viral infections, including 97 patients with chronic herpetic infection and 87 HIV-infected patients. Using modern methods of immunogenetics, we have found that relative risks of recurrent course and poor outcome of infection are positively associated with AA promoter region genotype and AA promoter genotype of +874 A / T polymorphism in the IFNG gene. Immunogenetic factors associated with protective effect in slow virus infections, include G allele of TNFA gene (G-308A SNP), and T allele / TT genotype of promoter region in the IFNG gene (+874 A / T SNP).


Область наук:
  • фундаментальна медицина
  • Рік видавництва: 2011
    Журнал: медична імунологія

    Наукова стаття на тему 'Аналіз поліморфних варіантів генів цитокінів у пацієнтів з ВІЛ-інфекцією'

    Текст наукової роботи на тему «Аналіз поліморфних варіантів генів цитокінів у пацієнтів з ВІЛ-інфекцією»

    ?Медична імунологія 2011, Т. 13, № 1, стор. 79-82 © 2011, СПб РВ РААКІ

    короткі повідомлення

    АНАЛІЗ поліморфних варіантів генів ЦИТОКІНІВ У ПАЦІЄНТІВ З ВІЛ-інфекцією

    Сухаленцева Н.А., Наследнікова І.О., Чернов А.С., Решетніков В.І., Уразова О.І., Новицький В.В., Урозаева М.В., Чернова О.М., Нікуліна Е .Л.,

    Воронкова О.В.

    ГОУ ВПО «Сибірський державний медичний університет Федерального агентства з охорони здоров'я і соціального розвитку», Томськ

    ГУЗ «Томський обласний центр профілактики та боротьби зі СНІД та інші інфекційні захворювання» Департаменту охорони здоров'я Адміністрації Томської області, Томськ

    Резюме. Проведено оцінку характеру розподілу алельних варіантів генів цитокінів у 184 пацієнтів з повільними вірусними інфекціями (97 пацієнтів з хронічною герпетичною інфекцією і 87 ВІЛ-інфікованих пацієнтів). З використанням сучасних иммуногенетических методів було встановлено, що ступінь ризику рецидивного перебігу та несприятливого результату інфекції позитивно асоційована з генотипом АА промоторної регіону і генотипом АА промоторної регіону + 874A / T гена IFNG. Імуногенетичними фактором, що володіє протективного ефектом відносно повільних вірусних інфекцій, є аллель G ділянки G-308А гена TNFA, а також аллель Т і генотип ТТ промоторної регіону + 874A / T гена IFNG.

    Ключові слова: ВІЛ-інфекція, поліморфізм генів цитокінів, інтерлейкін-2, інтерлейкін-4

    Sukhalentseva N.A., Naslednikova I.O., Chernov A.S., Reshetnikov V.I., Urazova O.I., Novitsky V.V., Urozaeva M.V., Chernova E.N., Nikulina E.L., Voronkova O.V.

    ANALYSIS OF POLYMORPHIC VARIANTS OF CYTOKINE GENES IN PATIENTS WITH HIV INFECTION Abstract. A distribution mode for allelic variants of cytokine genes was evaluated in 184 patients with slow viral infections, including 97 patients with chronic herpetic infection and 87 HIV-infected patients. Using modern methods of immunogenetics, we have found that relative risks of recurrent course and poor outcome of infection are positively associated with AA promoter region genotype and AA promoter genotype of +874 A / T polymorphism in the IFNG gene. Immunogenetic factors associated with protective effect in slow virus infections, include G allele of TNFA gene (G-308A SNP), and T allele / TT genotype of promoter region in the IFNG gene (+874 A / T SNP). (Med. Immunol., 2011, vol. 13, N1, pp 79-82)

    Keywords: HIV infection, cytokine gene polymorphism, interleukin-2, interleukin-4

    Вступ

    У зв'язку з високою захворюваністю, широким поширенням серед працездатного населення, недостатньою ефективністю сучасних методів діагностики, профілактичні-

    Адреса для листування:

    Наследнікова Ірина Олегівна 634057, Томськ, вул. К. Ільмера 8-96.

    Тел .: (3822) 62-14-02.

    E-mail: ira Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    ки і терапії, проблема ВІЛ-інфекції набуває все більшої актуальності в сучасній медицині [6]. По ряду особливостей розвитку ВІЛ-інфекції, зміни кількісних і функціональних показників імунної системи розрізняють повільно прогресуючий (вміст CD4 вище 400 х 106 / л протягом 6 років і більше) і швидко прогресуючий (вміст CD4 менше 200 х 106 / л протягом 5 років ) варіанти перебігу [5]. Дослідження останніх років доводять, що сприйнятливість до инфек-

    79

    Сухаленцева Н.А. та ін.

    медична Імунологія

    ційних агентам є генетично детермінованої: схильність захворювання

    залежить від певних алельних варіантів генів, які формують несприятливий спадковий фон [1, 7]. Пошук маркерів сприйнятливості до ВІЛ-інфекції серед алелей генів цитокінів - новий, перспективний розділ досліджень. У зв'язку з цим мета цього дослідження - ідентифікувати иммуногенетические маркери ВІЛ-інфекції на підставі аналізу аллельного поліморфізму генів цитокінів.

    матеріали та методи

    У програму дослідження увійшли 87 пацієнтів (53 чоловіки і 34 жінки у віці від 18 до 50 років) з ВІЛ-інфекцією. Верифікація діагнозу проводилась на підставі лабораторних досліджень: виявлення специфічних антитіл до сумарних вірусоспецифічні антигенів ВІЛ за допомогою твердофазного имму-ноферметного аналізу (ІФА), з наступним підтвердженням наявності антитіл до антигенів ВІЛ (p24, p31, p55, p64, p120) в імуноблоті «Western Blot ». Контрольну групу склали 93 практично здорових донора з аналогічними характеристиками за статтю та віком. В ході серологічного аналізу сироватки крові підтверджувалося відсутність специфічних антитіл до сумарних вірусоспецифічні антигенів ВІЛ. Досліджували стабілізовану венозну кров, узяту вранці до прийому їжі.

    Виділення ДНК з периферичної крові проводили сорбентних методом згідно з інструкцією, що додається до комерційного набору «ДНК-сорб-В» ( «ІнтерЛабсервіс», Росія). Дослідження поліморфних ділянок генів цитокінів проводили з використанням аллель-специфічної полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Були досліджені два поліморфних варіанти двох цитокінів: T-330G інтерлейкіну (IL) 2, C-590T IL-4, локалізованих в промоторних ділянках відповідних генів. Ампліфікацію здійснювали згідно з інструкцією, що додається до комерційного набору «АмпліСенс-200-1» ( «ІнтерЛабсервіс», Росія), в пробірках типу «Еппендорф» шляхом ПЛР, використовуючи структуру праймерів і параметри температурних циклів, описаних в літературі при використанні ампліфікатора «Терцик МС2 »(« ДНК-технологія », Росія).

    Після проведення ПЛР 8 мкл ампліфіка-та поділяли в 2% агарозному гелі, що містить 0,5 мг / мл етідіумброміду, при напрузі 150 B протягом декількох хвилин для піду-

    щей візуалізації в ультрафіолетовому світлі, що підтверджує наявність продукту ампліфікації. В якості маркера розміру ДНК використовували плазміду pUC19, розщеплену рестрікта-зой MspI ( «Сібензім», Росія).

    Для аналізу асоціації маркерів досліджуваних генів з вірусною інфекцією порівнювали частоти алелей і генотипів в групах хворих і здорових індивідів, використовуючи критерій х2 з поправкою Єйтса на безперервність. Про асоціації різних генотипів та алелей з захворюванням судили по величині відношення шансів (odds ratio (OR)) з розрахунком для нього 95% довірчого інтервалу (CI), який показує, у скільки разів вище для індивіда з певним генотипом ймовірність прогресування і несприятливого результату інфекції . При OR = 1 судили про відсутність зв'язку між порівнюваними факторами, при OR < 1 - про негативну зв'язку і при OR > 1 - про позитивну зв'язку ознак.

    Результати та обговорення

    Відомо, що спадкова схильність до інфекційних захворювань обумовлена, з одного боку, відносно рідкісними генетичними дефектами, що приводять до імунодефіцитів, з іншого боку - поєднаннями у індивіда «нормальних» алелей генів, окремо мають слабкий ефект, але в сукупності призводять до формування особливостей імунітету , що привертають до розвитку інфекційного процесу [7].

    Як показали результати проведеного імуногенетичної дослідження, розподіл алелей і генотипів досліджених поліморфних ділянок генів цитокінів серед ВІЛ-інфікованих хворих і здорових донорів статистично значимо відрізнялося. Аналіз аллельного поліморфізму T-330G промоторної ділянки гена IL-2 дозволив встановити, що серед здорових донорів переважав генотип TT (59%), гетерозиготний варіант TG виявлявся в 34% випадків, GG - у 7% (табл. 1). Серед пацієнтів з ВІЛ-інфекцією гетерозиготний генотип TG зустрічався в 53% випадків, гомозиготний варіант GG - 6%, а ТТ - 40%. Ступінь ризику прогресування, рецидивного перебігу та несприятливого ВІЛ-інфекції була позитивно асоційована з аллелем G (OR = 1,56) промоторної регіону T-330G гена IL-2. Аллель Т (OR = 0,64) і гомозиготний генотип ТТ (OR = 0,47) поліморфізму T-330G гена IL-2 обумовлювали протективний ефект щодо швидкого прогресування ВІЛ-

    80

    2011, Т. 13, № 1

    Поліморфізм генів цитокінів при ВІЛ-інфекції

    ТАБЛИЦЯ 1. розподіл генотипів І аллель поліморфізму T-330G ГЕНА IL-2 СЕРЕД ЗДОРОВИХ

    донорів і пацієнтів з ВІЛ-інфекцією

    Реєстрований показник Здорові донори, (%, абс.) Пацієнти з ВІЛ-інфекцією, (%, абс.) X2 OR (95% CI)

    TT 59 (55) 40 (35) 4,88 р < 0,05 0,47 (0,26-0,86)

    TG 34 (32) 53 (47) 3,72 р < 0,05 2,24 (1,24-4,13)

    GG 7 (6) 6 (5) 0,08 p > 0,05 0,85 (0,24-2,94)

    T 76 (142) 67 (117) 1,99 0,64 (0,33-1,25)

    G 24 (44) 33 (57) р < 0,05 1,56 (0,8-3,04)

    Примітка. Тут і в таблиці 2: р - рівень статистичної значущості відмінностей порівняно зі значеннями здорових донорів; х2 - стандартний критерій Пірсона; OR - критерій ставлення шансів з 95% довірчим інтервалом.

    інфекції (табл. 1). Відомо, що Т-лімфоцити з генотипом TT по поліморфізму ^ 330G гена IL-2 в умовах in vitro здатні до підвищеної продукції IL-2 [3]. Багато вчених вказують на зниження продукції IL-2 при прогресуванні повільних вірусних інфекцій, що викликає зміщення балансу на користь Th2 і є частиною стратегії виживання вірусу [3, 4, 8].

    В ході подальшого імуногенетичної дослідження розподілу алелей і генотипів поліморфізму C-590T гена IL-4 серед здорових осіб було виявлено переважання гетерозиготного генотипу CT (70%) над гомозиготними варіантами CC (26%) і ТТ (4%) (табл. 2). Серед пацієнтів з ВІЛ-інфекцією генотип СТ промоторної регіону C-590T гена IL-4 зустрічався у 37% обстежених, варіант ТТ - у 6%, переважаючим виявився гомозиготний генотип СС (57%). Зареєстроване у пацієнтів з ВІЛ-інфекцією збільшення частоти генотипу СС промоторної

    регіону C-590T гена IL-4, в порівнянні з аналогічними параметрами у здорових осіб, вказувало на його позитивну асоціацію (OR = 3,77) з ризиком швидкого прогресування захворювання (табл. 2). В даний час доведено, що поліморфізм С-590Т в промоторних регіоні визначає рівень продукції IL-4, промотор з заміною -590Т є більш активним, менш міцно зв'язується з транскрипційними факторами, а ген IL-4 частіше піддається транскрипції. В кінцевому підсумку гуморальну імунну відповідь стає переважаючим в реалізації специфічної реакції на антиген [2]. Протизапальний IL-4, будучи продуктом CD4 + Т-лімфоцитів з фенотипом Th2, виступає в якості антагоніста Т-активують цитокінів, сприяючи тим самим поляризації імунної відповіді в напрямку гуморального типу реагування [2, 4, 7].

    таблиця 2. розподіл генотипів І аллель поліморфізму C-590T гена IL-4 серед здорових донорів і пацієнтів з ВІЛ-інфекцією

    Реєстрований показник Здорові донори, (%, абс.) Пацієнти з ВІЛ-інфекцією, (%, абс.) X2 OR (95% CI)

    CC 26 (24) 57 (50) 5,84 р < 0,05 3,77 (1,99-7,18)

    СТ 70 (66) 37 (32) 4,96 р < 0,05 0,25 (0,13-0,47)

    ТТ 4 (3) 6 (5) 0,42 p > 0,05 1,53 (0,37-6,71)

    З 61 (114) 76 (132) 5,21 2,02 (1,05-3,90)

    Т 39 (72) 24 (42) p > 0,05 0,49 (0,26-0,95)

    81

    Сухаленцева Н.А. та ін.

    медична Імунологія

    Наявність індивідів, схильних до і несхильних розвитку певного захворювання, є основою формування феномену резистентності / схильності до швидкого прогресування ВІЛ-інфекції при контакті індивіда з її збудником, важливу роль в якому грають генетичні фактори. Генетична детермінованість функціонування імунної системи і окремих її ланок у відповідь на вірусні антигени визначається аллельними варіантами генів цитокінів.

    Таким чином, нами показано, що розподіл алельних варіантів генів цитокінів серед пацієнтів з ВІЛ-інфекцією характеризується домінуванням генотипу TG поліморфізму T-330G гена IL-2 і генотипу СС поліморфного ділянки C-590T гена IL-4. Імуногенетичними фактором, що володіє протік-нормативним ефектом щодо схильності до прогредієнтності течією ВІЛ-інфекції, є аллель Т і гомозиготний генотип ТТ поліморфізму T-330G гена IL-2. Ступінь ризику швидкого прогресування і несприятливого результату ВІЛ-інфекції позитивно асоційована з аллелем G промоторної регіону T-330G ген IL-2, а також з гомозиготною генотипом СС промоторної регіону C-590T гена IL-4.

    Дослідження виконано в рамках Федеральної цільової програми «Наукові та науково-педагогічних кадри інноваційної Росії на 2009-2013 роки», а також за фінансової підтримки Ради за грантами Президента Російської Федерації для державної підтримки провідних наукових шкіл Російської Федерації та молодих російських учених.

    Список літератури

    1. Альтернативний сплайсинг в формуванні структури системи цитокінів // Система цитокінів: Теоретичні та клінічні аспекти / Під. ред. В.А. Козлова, С.В. Сеннікова. - Новосибірськ: Наука, 2004. - С. 7-23.

    2. Коньонков В.І., Смольнікова М.В. Поліморфізм промоторних регіонів генів IL4 і 10 і фактора некрозу пухлин а у ВІЛ-інфікованих // Бюлетень експериментальної біології і медицини. - 2002. - № 4. - С.449-451.

    3. Соколова Ю.В., Сізякіна Л.П. Особливості секреції цитокінів та їх рецепції в динаміці ВІЛ-інфекції // Імунологія. - 2007. - № 6. - С. 324-327.

    4. Shrestha S., Strathdee S.A., Galai N. Behavioral Risk Exposure and Host Genetics of Susceptibility to HIV-1 Infection // The Journal of Infectious Diseases. - 2006. - N 193. - Р. 16-26.

    5. Blackwell J.M. Genetics and genomics of infections disease susceptibility // Trends in Mol. Med. - 2001. - Vol. 7, N 11. - P. 521-526.

    6. Fauci A.S. HIV and AIDS: 20 years ofscience // Nature Medicine. - 2003. - Vol. 9. - P. 839-843.

    7. Ollier WE. Cytokine genes and disease susceptibility // Cytokine. - 2004. - Vol. 4-5. -P. 174-178.

    8. Mogensen T.H., Paludan S.R. Molecular Pathways in Virus-Indused Cytokine Production // Microbiol. and Biol. Rev. - 2001. - ЛИ. 65, N 1. Р. 131-150.

    надійшла до редакції 31.05.2010 відправлена ​​на доопрацювання 16.06.2010 прийнята до друку 23.06.2010

    82


    Ключові слова: ВІЧ ІНФЕКЦІЯ / Поліморфізм генів ЦИТОКІНІВ / Інтерлейкін-2 / Інтерлейкін-4 / HIV INFECTION / CYTOKINE GENE POLYMORPHISM / INTERLEUKIN-2 / INTERLEUKIN-4

    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити