На сьогоднішній день не існує ефективних способів лікування фіброзу печінки і єдиним виходом є пересадка донорського органу. Дослідження молекулярно-клітинних механізмів розвитку фіброзу в печінці може сприяти виявленню нових способів уповільнення, а, можливо, і розворот процесів фиброгенеза в печінці. Довгий час клітини Іто незаслужено вважалися основними винуватицями розвитку фіброзу печінки, так як розглядалися як головні попередниці миофибробластов, які здійснюють синтез соединительнотканного позаклітинного матриксу. У даній роботі методом експлантаціі була виділена культура мезенхімальних клітин, що оточують жовчні протоки. Показано, що отримані клітини є портальними фибробластами, і, як і клітини Іто, в умовах пошкодження печінки здатні in vitro диференціюватися в міофібробласти, експресують а-гладком'язових актин. При тривалому культивуванні показана можливість «переходу» портальних миофибробластов в фибро-бласти і навпаки на пізніх пасажах. Таким чином, можна зробити висновок про потенційну можливість звернення назад процесів фиброгенеза в печінці.

Анотація наукової статті з біотехнологій в медицині, автор наукової роботи - Міяновіч О., Катина М. Н., Різванов А. А., Киясов А. П.


Characterization of rat myofibroblasts isolated from liver portal tracts using explantation technique

Today there is no effective approach to treat liver fibrosis and the only way is transplantation of donors 'liver. Investigation of molecular-cellular mechanisms of liver fibrosis can help to discover new ways of slowing down or even reverse the process of fibrogenesis in liver. For a long time hepatic stellate cells were undeservingly blamed for being the major causer of liver fibrosis, because they were considered as the main source of myofibroblasts, that synthesize connective tissue extracellular matrix. In this particular work explantation approach was used to isolate cell culture from portal tracts. It was shown that received cells are portal fibroblasts, and, just as hepatic stellate cells, in case of liver alteration can differentiate in myofibroblasts, that express а-smooth muscle actin. During long-term cultivation it was shown that portal myofibroblasts can differentiate into fibroblasts and back on late passages. So, we can conclude, that there is a potency to reverse the process of fibrogenesis in liver.


Область наук:

  • Біотехнології в медицині

  • Рік видавництва: 2013


    Журнал: Гени і клітини


    Наукова стаття на тему 'Аналіз миофибробластов щури, отриманих з структур портальних трактів печінки методом експлантаціі'

    Текст наукової роботи на тему «Аналіз миофибробластов щури, отриманих з структур портальних трактів печінки методом експлантаціі»

    ?Збірник праць Інституту Фундаментальною медицини і біології Казанського (Приволзького)

    федерального університету

    119

    Аналіз миофибробластов щури,

    отриманих з структур портальних трактів печінки

    методом експлантаціі

    О. Міяновіч, М.Н. Катина, А.А. Різванов, А.П. Киясов Казанський (Приволзький) федеральний університет, Казань

    Characterization of rat myofibroblasts isolated from liver portal tracts using explantation technique

    О. Miyanovich, M.N. Katina, A.A. Rizvanov, AP. Kiyasov Kazan Federal University, Kazan

    На сьогоднішній день не існує ефективних способів лікування фіброзу печінки і єдиним виходом є пересадка донорського органу. Дослідження молекулярно-клітинних механізмів розвитку фіброзу в печінці може сприяти виявленню нових способів уповільнення, а, можливо, і розворот процесів фиброгенеза в печінці. Тривалий час клітини Іто незаслужено вважалися основними винуватицями розвитку фіброзу печінки, так як розглядалися як головні попередниці миофибробластов, які здійснюють синтез соединительнотканного позаклітинного матриксу. У даній роботі методом експлантаціі була виділена культура мезенхімальних клітин, що оточують жовчні протоки. Показано, що отримані клітини є портальними фибробластами, і, як і клітини Іто, в умовах пошкодження печінки здатні in vitro диференціюватися в міофібробласти, які експресують а-гладком'язових актин. При тривалому культивуванні показана можливість «переходу» портальних миофибробластов в фібробласти і навпаки на пізніх пасажах. Таким чином, можна зробити висновок про потенційну можливість звернення назад процесів фиброгенеза в печінці.

    Ключові слова: фіброз печінки, портальні фібробласти, міофібробласти, клітини Іто.

    Фіброз печінки - це утворення локальних або дифузних вогнищ сполучної тканини в печінці. Фіброз розвивається в результаті таких широко поширених хронічних захворювань печінки, як вірусні гепатити, алкогольна хвороба печінки, портальна гіпертензія різної етіології, вроджені і аутоімунні захворювання печінки. Розташування фіброзних септ багато в чому залежить від виду пошкодження печінки: вони можуть бути порто-портальними в разі хронічного біліарного пошкодження, порто-центральними при хронічному вірусному гепатиті. При деяких інших патологічних станах утворюються і центро-центральні септи [1].

    На сьогоднішній день єдиним ефективним способом лікування фіброзу і цирозу печінки є пересадка донорського органу. Дослідження молекулярно-клітинних механізмів розвитку фіброзу в печінці і походження профіброгенних клітин може сприяти виявленню нових патогенетично обґрунтованих способів уповільнення, а, можливо, і розворот процесів фиброгенеза в печінці.

    Джерелом позаклітинного матриксу та сполучної тканини в печінці є міофібробла-

    e-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

    Today there is no effective approach to treat liver fibrosis and the only way is transplantation of donors 'liver. Investigation of molecular-cellular mechanisms of liver fibrosis can help to discover new ways of slowing down or even reverse the process of fibrogenesis in liver. For a long time hepatic stellate cells were undeservingly blamed for being the major causer of liver fibrosis, because they were considered as the main source of myofibroblasts, that synthesize connective tissue extracellular matrix. In this particular work explantation approach was used to isolate cell culture from portal tracts. It was shown that received cells are portal fibroblasts, and, just as hepatic stellate cells, in case of liver alteration can differentiate in myofibroblasts, that express а-smooth muscle actin. During long-term cultivation it was shown that portal myofibroblasts can differentiate into fibroblasts and back on late passages. So, we can conclude, that there is a potency to reverse the process of fibrogenesis in liver.

    Key words: liver fibrosis, portal fibroblasts, myofibroblasts, hepatic stellate cells.

    сти, які експресують а-гладком'язових актин (а-SMA). Міофібробласти є швидко проліферуючими клітинами, здатними до скорочення і підсилюють процеси фиброгенеза за рахунок свого багатогранного фенотипічного відповіді на травму [2]. На даний момент до кінця не з'ясовані джерела походження цих клітин. Протягом останніх 20 років вважалося, що клітини Іто є джерелом більшості з них. Однак зараз стало ясним, що міофібробласти здатні утворюватися і з інших типів клітин печінки [3]. Передбачувані джерела миофибробластов печінки представлені резидентами печінки (клітини Іто і портальні фібробласти), мультипотентними мезенхимной стромальних клітинами кісткового мозку і клітинами, що утворюються в результаті епітеліально-мезенхімального переходу (АФП + прогеніторні клітини, з яких відбуваються гепатоцити і холангіоцитів) [4].

    Згідно з літературними джерелами, міофібробласти переважно відбуваються з клітин Іто і портальних фібробластів шляхом активації і трансдіфференціровка [5, 6]. В останні роки особлива увага приділяється портальних фібробластам - клітинам, оточуючим структури портального

    Клітинна трансплантологія і тканинна інженерія Том VIII, № 3, 2013

    120

    Збірник праць Інституту Фундаментальною медицини і біології Казанського (Приволзького)

    федерального університету

    тракту (портальна вена і артерія з їх стінками, що містять клітини гладеньких м'язів, і жовчний протік з його базальноїмембраною) і перебуває в безпосередньому контакті з першим шаром гепа-тоцітов і непаренхімних клітин [7].

    Іншими потенційно фіброгенного клітинами можуть бути клітини другого шару, розташовані навколо центральних вен, а також клітини гладеньких м'язів судин (печінкової артерії і портальної вени) і клітини кістковомозкового походження [8-10].

    Були висунуті дві основні гіпотези. Перша з них говорить про те, що, можливо, портальні фібробласти, так само як і гладеньких м'язів, відбуваються з дуктальной пластинки в процесі ембріогенезу. За іншою версією, клітини Іто і портальні фібробласти можуть відбуватися з якогось загального джерела в процесі раннього ембріогенезу. Існує думка, що під час зростання ембріональної печінки мезотелий, що складається з мезотеліоцітов і субмезотеліальних клітин, мігрує з поверхні печінки всередину органу і дає початок клітинам Іто і пе-ріваскулярним мезенхімальних клітин, включаючи портальні фібробласти, клітини гладеньких м'язів, що оточують портальну вену і фібробласти, розташовані навколо центральної вени.

    Портальні фібробласти як окремий тип клітин були вперше описані ще в 1961 р, коли Carruthers з співавт. досліджували за допомогою світлової та електронної мікроскопії портальні тракти щурів після перев'язки жовчної протоки. Дослідники виявили проліферацію фібробластів навколо знову сформованих жовчних проток, і повідомили, що фібробласти уражених портальних трактів мали довгі відростки і часто були оточені фибриллами, в тому числі і еластичними волокнами.

    Портальні фібробласти гетерогенні і їм давали різні назви, що ускладнювало їх дослідження. Портальні фібробласти були багаторазово ідентифіковані і віддиференціювати від клітин Іто на підставі експресії різних маркерів, але ці дослідження не узгоджені і не одноманітно для різних дослідницьких груп. Міофібробласти також давали різні назви по відношенню їх до портальних трактах. При дослідженні цирозу печінки у людей і в моделях на щурах D. Cassiman з співавт. (2002) виділяли три популяції миофибробластов: міофібробласти, однозначно що відбуваються з клітин Іто, портальні / септальних міофібробласти, імовірно що відбуваються з портальних фібробластів, і прикордонні міофібробласти, з проміжним фенотипом і незрозумілим походженням [10].

    Міофібробласти жовчних проток здатні заміщати певну субпопуляцію мезенхімних клітин портальних трактів, так само як і гладеньких м'язів стінок гілок портальних вени і артерій. Було зроблено припущення, що ми-офібробласти жовчних проток здатні пролиферировать і трансдіфференціроваться у відповідь на перев'язку жовчної протоки, що викликає перідук-тальний і перипортальний (так званий, «біліарний»), фіброз. Передбачалося, що при шість-Сомоза гладеньких м'язів стінок портальних вен пролиферируют і трансдіфференціруются в матрикс-продукують міофібробласти, викликаючи портальний фіброз. Активуються, в основному, по-

    врежденіем печінки, портальні фібробласти починають пролиферировать (хоча і набагато повільніше, ніж клітини Іто) і продукувати колаген I типу навколо портальних трактів [11].

    Що стосується антигенних властивостей клітин, здатних трансдіфференціроваться в міофібробласти, то резидентні мезенхімальні клітини печінки, представлені клітинами Іто, характеризуються експресією десмина і GFAP (гліофібріллярний кислий білок), а також відсутністю гемопоетичних маркерів (CD45, CD34) і Thy-1 (глікофосфа-тіділінозітол -зв'язано глікопротеїн на зовнішній мембрані клітин, який раніше був виявлений в фібробластах деяких органів, CD90). Головним маркером утворюються миофибробластов є наявність в їх цитоплазмі a-SMA. Міофібробласти, одержувані в результаті епітеліальномезенхімальной трансформації, характеризуються відсутністю експресії CD45 і продукцією маркерів гепатоцитів (альбумін, Alb) і холангіоцитів (цитокератин, CK19). Клітини, що утворюються з циркулюючих клітин кісткового мозку, представлені CD45 + / ColІ + -фіброцітамі [12]. Портальні фібробласти відрізняються від клітин Іто тим, що вони можуть експресувати еластин і Thy-1, не накопичують ретиноїди, що не експресують десмин, CD146 і нейтральні маркери (GFAP) [13].

    Більшість існуючих досліджень, присвячених фіброзу печінки, проводилися на клітинах Іто і саме вони тривалий час незаслужено вважалися основними «винуватицями фіброзу» печінки.

    Наше дослідження було націлене на ідентифікацію інших видів клітин печінки, здатних диференціюватися в фібробластичних напрямку і, отже, залучених в процеси фіброзу.

    Матеріал і методи

    Жовчні протоки виділяли з печінки здорових чотириденний новонароджених щурів (Rattus norvegicus, лінія Wistar, Розплідник лабораторних тварин «Пущино»). Зміст і використання лабораторних тварин відповідало правилам, прийнятим в КФУ, рекомендацій Локального етичного комітету і національним законам [14]. Експеримент був проведений на 187 щурах. Тварини були вбиті декапітація. Під бінокулярним мікроскопом Stemi DV4 Carl Zeiss (Німеччина) створювали операційний доступ (серединний і поперечні розрізи передньої черевної стінки) і далі, не витягуючи печінку, виділяли жовчний протік. Виділений жовчний протік механічно очищали від паренхіми печінки під мікроскопом за допомогою стерильних інструментів. Виділений жовчний протік поміщали цілком в окрему лунку 6-ямкового планшета в живильне середовище DMEM з додаванням 10% FBS, 200 mM L-глутаміну і антибіотика. В інших експериментах жовчні протоки, подрібнені на фрагменти розміром близько 3 мм 3, поміщали в 24-ямкові планшети. При додаванні живильного середовища стежили за тим, щоб зразок жовчної протоки був наполовину занурений в живильне середовище, а на іншу половину залишався на поверхні для поліпшення адгезії фрагмента тканини до культуральному пластику за рахунок сил поверхневого натягу, а також для того, щоб дати можливість всім клітинам , що володіє властивостями

    Клітинна трансплантологія і тканинна інженерія Том VIII, № 3, 2013

    Збірник праць Інституту Фундаментальною медицини і біології Казанського (Приволзького)

    федерального університету

    121

    адгезії, мігрувати (експлантіроваться) з фрагмента на культуральний пластик і почати активний розподіл [15]. У 6 і 24-ямковий планшетах на 3 діб. прибирали фрагменти тканин і заливали їх за стандартною методикою в парафін або середу для заморозки тканин NEG 50 (ThermoScientific). Вміщені в NEG 50 зразки відразу заморожували при -800C і використовували для виготовлення тонких зрізів (5 мкм) на мікротому-криостате НМ560 Cryo-Star (Carl Zeiss, Німеччина). У решти чашках міняли середу на свіжу. Наступні заміни живильного середовища проводили кожен другий день. У 24-ямковий планшетах проводили іммуноцітохіміческіе реакції культур клітин з антитілами, зазначеними в таблиці, на 3, 5, 7, 12 діб. Для візуалізації результатів використовували систему Novolink (Novocastra, Великобританія) з колориметричним субстратом аміноетілкарбазол (АЕК). Ядра фарбували гематоксиліном за стандартною методикою. Аналіз препаратів проводили на мікроскопі AxioOberver.Z1 (Carl Zeiss, Німеччина). У 6-ямковий планшетах на 3, 5, 7 і 12 діб. клітини ціалізуватися для отримання зразків загального білка для подальшого аналізу експресії білків за допомогою вестерн блот. Візуалізацію імунного преципітату проводили за допомогою набору для хемілюмі-

    несцентной детекції білка Amersham ™ ECL ™ Prime Western Blotting Detection Reagent (GE Healthcare Bio-Sciences AB). Детекцию люмінесценції проводили на приладі ChemiDoc ™ XRS + System (Bio-Rad, Сінгапур). Частина клітин в 6-лункових планшетах після видалення фрагмента тканини (3 сут.) Продовжували культивувати (пасаж 0) і на 7 добу. клітини пасеровану і розсівали в 25 cm2 чашки на стандартну живильне середовище. Кожен другий день проводили заміну живильного середовища на свіжу. При досягненні 80% конфлуентності моношару клітини пасеровану. Клітини кожного пасажу розсівали в 24-лучно-ні планшети і проводили іммуноцітохіміческіе реакції з антитілами, зазначеними в таблиці, на 3, 5, 7 і 12 діб. Клітини нульового пасажу (первинну культуру) на 7 добу. також збирали для вивчення методом проточної цитофлуориметрії. Для виявлення внутрішньоклітинних антигенів клітини фіксували в комерційному реактиве CellFix (Becton Dickenson) на основі формальдегіду 30 хв при 4 ° С, пермобі-ціалізуватися мембрану 0,1% розчином Tween-20 в PBS протягом 10 хв. Для фарбування мембранних антигенів пермобілізацію мембрани не проводили, а фіксація клітин здійснювалася після всієї процедури забарвлення (постфіксація). Результати аналізували на проточному цитофлуориметрії Guava

    Антитіла, використані в роботі

    Антиген Фірма-виробник (номер каталогу), розведення

    Десмін - білок проміжних філаментів цитоскелета м'язових клітин, маркер зірчастих клітин печінки Santa Cruz (SC14026), 1: 100, Dako (M076001), 1:30

    a-SMA - a-гладком'язових актин, маркер миофибробластов, гладком'язових клітин Santa Cruz (SC130616), 1: 100, Dako (M0851), 1:50

    Цитокератин 18 - білок проміжних філаментів цитоскелета епітеліальних клітин (гепатоцити, холангіоцитів) Dako (M7010), 1:20

    Цитокератин 19 - білок проміжних філаментів цитоскелета епітеліальних клітин (холангіоцитів, гепатобластому, овальні клітини) Dako (M0888), 1:20

    р-актин - бере участь в клітинної рухливості, підтримці структури і цілісності Sigma Aldrich (Mab-A2228), 1: 2000

    Thy-1 (CD90) - поверхневий білок, вважається маркером стовбурових клітин Abcam (ab225), ICC 1: 200

    easyCyte 8HT (Millipore).

    Результати та обговорення

    Наше дослідження було присвячено Міофи-бробластам портальних трактів, що утворюється з портальних фібробластів при альтерації печінки. У здорової печінки портальні фібробласти з точки зору морфології і антигенної структури ідентичні іншим фібробластам. Це веретеновідние клітини мезенхімального походження, присутні в портальних трактах. У нормальних умовах вони беруть участь в фізіологічному обміні компонентів позаклітинного матриксу і не експресують a-SMA [13]. Походження портальних фібробластів, як і клітин Іто, як і раніше до кінця не визначено і викликає багато дискусій. Вважається, що портальні фібробласти, точно так же, як це було показано для клітин Іто, в умовах хронічного пошкодження печінки здатні

    диференціюватися в міофібробласти, які експресують a-SMA, і це може бути відтворене in vitro при культивуванні портальних фібробластів на культуральном пластиці або склі [5].

    У даній роботі описано отримання портальних миофибробластов з портальних фібробластів, які, в свою чергу, були отримані методом експлантаціі з структур жовчних проток. Інші автори описують інші методи отримання культури портальних миофибробластов, засновані переважно на ферментативної очищення структур жовчної протоки від фрагментів паренхіми печінки [16]. Об'єктом більшості дослідників традиційно є гепатоцит, однак зараз стає ясно, що інші клітини негепатоцітарного ряду грають величезну роль у функції печінки в нормі і при патології. В останні роки зріс інтерес до розуміння ембріонального походження цих

    Клітинна трансплантологія і тканинна інженерія Том VIII, № 3, 2013

    122

    Збірник праць Інституту Фундаментальною медицини і біології Казанського (Приволзького)

    федерального університету

    клітин і механізмів їх розвитку [17]. Саме тому для даного дослідження використовувалися молоді тварини (щури у віці 4 сут.), Що пов'язано з тим, що ембріональний розвиток печінки у цих тварин триває до 2 тижнів. після народження.

    Ми показали, що in vitro при пошкодженні (в даному конкретному випадку - при механічному пошкодженні в процесі виділення протоки) активуються портальні фібробласти і інші фібробласти, отримані нами в культурі, що утворилися з різних попередників, які також могли зберігатися в фрагменті тканини навколо жовчної протоки. Активовані фібробласти здатні до утворення миофибробластов до 3 діб. культивування. Методом проточної цитометрії було показано, що в популяції клітин, виділених нами з жовчних проток, зустрічалося лише трохи дес-мин-позитивних клітин (7%), що свідчить про те, що жовчний протік був ретельно очищений від паренхіми печінки і міофібробласти, що утворюються з клітин Іто (МФ-Іто), які не потрапили в культуру (рис. 1Б). Про це ж свідчить і іммуноцітохіміческіе дослідження на десмин культур клітин нульового, першого і другого пасажів, де тільки поодинокі клітини були МФ-Іто (рис. 2).

    Після фарбування на Thy-1 клітин, що отримуються з експлантів жовчної протоки, отримували дві морфологічно різні популяції клітин - кубовидний і веретеновідние клітини (рис. 2Д) [18]. Методом проточної цитометрії було показано, що близько 40% клітин первинної культури, отриманої методом експлантаціі з фрагмента жовчної протоки, були Thy-1-позитивними. У ряді досліджень Thy-1 описується як маркер клітин жовчних проток і печінкових прогеніторних клітин, в той час як інші дослідники вважають, що популяція Thy-1 позитивних клітин гетерогенна. також

    були повідомлення про експресії маркерів мезенхімальних клітин, таких як a-SMA і десмин, в групі Thy-1-позитивних клітин. Дослідження популяції клітин, виділених з тканин жовчних проток, підтвердило, що портальні міофібрил-бласти є Thy-1-позитивними клітинами, в той час як гепатоцити, клітини Іто і печінкові макрофаги НЕ експресували цей маркер на своїй поверхні. Таким чином, Thy-1 можна назвати основним поверхневим маркером для ідентифікації портальних миофибробластов in vivo і in vitro [19]. На 7 добу. культивування первинні культури клітин, отримані методом експлантаціі, фарбували методом іммуноцітохіміі і проводили проточну цитометрию на a-SMA. Було показано, що до цього часу вже 67% клітин експресували маркер миофибробластов - a-SMA (рис. 1А). При подальшому культивуванні (перший, другий пасаж) a-SMA НЕ експресувати, що говорить про те, що всі клітини перетворилися в фібробласти (рис. 2Ж). Цікаві результати були отримані при тривалому культивуванні клітин жовчних проток. Так, було показано, що на четвертому пасажі все клітини в культурі за морфологічними і антигенними властивостями були фибробластами. У той же час, при більш тривалому культивуванні клітини починали експресувати a-SMA, що говорить про процес їх диференціювання в міофібробласти. Отримані дані підтверджують раніше висунуту теорію про можливість диференціювання фібробластів в міофібробласти (рис. 3А, Б). Експресії цитокератину 18 і 19 не було виявлено, що дозволяє стверджувати, що отримані клітини були неепітеліального походження (рис. 2З, І). Відсутність експресії альбуміну та a-фетопротеїну було показником того, що отримані клітини не були зрілими гепатоцитами [20].

    Мал. 1. імунофенотипу первинної культури клітин, виділених з жовчної протоки: R1 - клітини, які експресують маркер; R2 - клітини, які не експресують маркер. проточна цитометрії

    Клітинна трансплантологія і тканинна інженерія Том VIII, № 3, 2013

    Збірник праць Інституту Фундаментальною медицини і біології Казанського (Приволзького)

    федерального університету

    123

    Мал. 2. Культури клітин, отриманих з жовчної протоки:

    А - первинна культура, 7 діб. культивування;

    Б, З, І - культура першого пасажу, 5 діб. культивування;

    В - культура другого пасажу, 5 діб. культивування;

    Г, Е - первинна культура, 12 діб. культивування;

    Д, Ж - культура другого пасажу, 7 діб. культивування.

    А-В - експресія десмина; Г, Д - експресія Thy-1;

    Е, Ж - експресія a-SMA; З - експресія цитокератину 19; І - експресія цитокератину 18. іммуноцітохіміческіе реакція, ядра докрашени гематоксилином.

    Ув .: А-Г, Е, Ж х10, Д х20, З, І х40

    Мал. 3. Культура клітин, отриманих з жовчної протоки:

    А - 5 пасаж, експресія a-SMA; Б - 9 пасаж, експресія Thy-1. Візуалізація ядер DAPI (синій колір]. Флуоресцентна мікроскопія

    Клітинна трансплантологія і тканинна інженерія Том VIII, № 3, 2013

    124

    Збірник праць Інституту Фундаментальною медицини і біології Казанського (Приволзького)

    федерального університету

    Виходячи з отриманих даних, можна зробити висновок про те, що використаним методом можна отримати портальні міофібробласти і досліджувати їх. При культивуванні фрагмента жовчної протоки відбувається екскреція з нього різних біологічно активних речовин, синтезованих різними типами клітин, паракрінним і аутокрінним шляхами сприяють активації клітин жовчної протоки, їх експлантаціі на культуральний пластик і диференціювання портальних фібробластів в міо-фібробласти [21]. Незрозуміло, чи існують різні стадії диференціювання / активації однієї і тієї ж клітинної популяції або ж існують клітинні типи з частково перекриваються фенотипом [22]. За літературними даними, в культурі портальних миофибробластов, так само як миофибробластов з клітин Іто, клітини здатні повертатися в початковий стан, проте залишається невідомим, чи відбувається це в більш-менш значних масштабах in vivo (наприклад, при регресі фіброзу печінки) [ 23-25]. По-перше, необхідно

    ЛІТЕРАТУРА:

    1. Ramadori G. and Saile B. Portal tract fibrogenesis in the liver. Lab. Invest. 2004; 84 (2): 153-9.

    2. Novo E., di Bonzo L.V., Cannito S. et al. Hepatic myofibroblasts: a heterogeneous population of multifunctional cells in liver fibrogenesis. Int. J. Biochem. Cell Biol. 2009 року; 41 (11): 2089-93.

    3. Bosselut N., Housset C., Marcelo P. et al. Distinct proteomic features of two fibrogenic liver cell populations: hepatic stellate cells and portal myofibroblasts. Proteomics 2010 року; 10 (5): 1017-28.

    4. Iwaisako K., Brenner D.A., Kisseleva T. What's new in liver fibrosis? The origin of myofibroblasts in liver fibrosis. J. Gastroenterol. Hepatol. 2012; 27 (Suppl 2): ​​65-8.

    5. Forbes S.J., Parola M. Liver fibrogenic cells. Best Pract Res Clin. Gastroenterol. 2011 року; 25 (2): 207-17.

    6. Novo E., Povero D., Busletta C. et al. The biphasic nature of hypoxia-induced directional migration of activated human hepatic stellate cells. J. Pathol. 2012; 226 (4): 588-97.

    7. Katalin D. Architectural and immunohistochemical characterization of small bile ducts harboring hepatic adult stem cells. In: Doctoral School of Pathology. Budapest: Semmelweis University; 2011.

    8. Ye Z., Houssein H.S., Mahato R.I. Bioconjugation of oligonucleotides for treating liver fibrosis. Oligonucleotides 2007; 17 (4): 349-404.

    9. Parola M. and Pinzani M. Hepatic wound repair. Fibrogen. Tissue Repair. 2009 року; 2 (1): 4.

    10. Cassiman D., Libbrecht L., Desmet V. et al. Hepatic stellate cell / myofibroblast subpopulations in fibrotic human and rat livers. J. Hepatol. 2002; 36 (2): 200-9.

    11. Asahina K. Hepatic stellate cell progenitor cells. J. Gastroenterol. Hepatol. 2012; 27 (Suppl 2): ​​80-4.

    12. Brenner D.A., Kisseleva T., Scholten D. et al. Origin of myofibroblasts in liver fibrosis. Fibrogenesis Tissue Repair. 2012; 5 (Suppl 1): S17.

    13. Kisseleva T., Brenner D.A. Anti-fibrogenic strategies and the regression of fibrosis. Best Pract. Res. Clin. Gastroenterol. 2011 року; 25 (2): 305-17.

    досліджувати гетерогенність популяції портальних мезенхімних клітин; по-друге, необхідно краще розібратися у відмінностях між клітинами Іто і портальними фибробластами, щоб визначити внесок кожного типу клітин в розвиток фіброзу печінки, що дозволить розробляти методи лікування фіброзу на основі впливу на клітинно-молекулярні механізми його розвитку [23].

    Подяки

    Робота виконана за фінансової підтримки грантів Російського Фонду Фундаментальних Досліджень 12-04-97088-р_поволжье_а і Президента Російської Федерації для державної підтримки молодих російських учених докторів наук МД-433.2013.4. Робота частково виконана на обладнанні Федерального центру колективного користування фізико-хімічних досліджень речовин і матеріалів (ФЦКП ФХІ) і Науково освітнього центру фармацевтики Казанського (Приволзького) федерального університету.

    14. Генин А.М., Капланський А.С. Біоетичні правила проведення досліджень на людині і тварин в авіаційній, космічній і морської медицини. Авіакосмічна і екологічна медицина 2001; 4: 14-20.

    15. Gordana Vunjak-Novakovic R.I.F. Culture of cells for tissue engineering. John Wiley & Sons, Inc .; 2006.

    16. Clouzeau-Girard H., Guyot C., Combe C. et al. Effects of

    bile acids on biliary epithelial cell proliferation and portal fibroblast activation using rat liver slices. Lab. Invest. 2006; 86 (3):

    275-85.

    17. Zhao R., Duncan S.A. Embryonic development of the liver. Hepatology 2005; 41 (5): 956-67.

    18. Kamo N., Yasuchika K., Fujii H. et al. Two populations of Thy1-positive mesenchymal cells regulate in vitro maturation of hepatic progenitor cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2007; 292 (2): G526-34.

    19. Dudas J., Mansuroglu T., Batusic D. et al. Thy-1 is an in vivo and in vitro marker of liver myofibroblasts. Cell Tissue Res. 2007; 329 (3): 503-14.

    20. Міяновіч О., Різванов А.А., Киясов А.П. Виділення і культивування миофибробластов печінки щурів методом експлантаціі. Клітинна трансплантологія і клітинна інженерія 2012; 7 (3): 112-15.

    21. Bataller R., Brenner D.A. Liver fibrosis. J. Clin. Invest. 2005; 115 (2): 209-18.

    22. Dezso K., Jelnes P., Laszlo V. et al. Thy-1 is expressed in hepatic myofibroblasts and not oval cells in stem cell-mediated liver regeneration. Am. J. Pathol. 2007; 171 (5): 1529-37.

    23. Dranoff J.A., Wells R.G. Portal fibroblasts: Underappreciated mediators of biliary fibrosis. Hepatology 2010 року; 51 (4): 1438-44.

    24. Gaca M.D., Zhou X., Issa R. et al. Basement membrane-like matrix inhibits proliferation and collagen synthesis by activated rat hepatic stellate cells: evidence for matrix-dependent deactivation of stellate cells. Matrix Biol. 2003; 22 (3): 229-39.

    25. Sohara N., Znoyko I., Levy M.T. et al. Reversal of activation of human myofibroblast-like cells by culture on a basement membrane-like substrate. J. Hepatol. 2002; 37 (2): 214-21.

    надійшла 0209.2013

    Клітинна трансплантологія і тканинна інженерія Том VIII, № 3, 2013


    Ключові слова: ФІБРОЗ ПЕЧІНКИ /ПОРТАЛЬНІ фібрами-бластів /міофібробласти /КЛІТИНИ ІТЗ /LIVER FIBROSIS /PORTAL FIBROBLASTS /MYOFIBROBLASTS /HEPATIC STELLATE CELLS

    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити