Область наук:
  • Біотехнології в медицині
  • Рік видавництва: 1998
    Журнал: Вісник РОНЦ ім. Н. Н. Блохіна РАМН
    Наукова стаття на тему 'Аналіз біофізичної теорії електрофорезу живих клітин'

    Текст наукової роботи на тему «Аналіз біофізичної теорії електрофорезу живих клітин»

    ?В ПОРЯДКУ ДИСКУСІЇ

    FOR

    DISCUSSION

    © М. В. Голованов, 1998. УДК 511.18: 577.1

    М. В. Голованов

    АНАЛІЗ БІОФІЗИЧНОЇ ТЕОРІЇ ЕЛЕКТРОФОРЕЗУ ЖИВИХ КЛІТИН

    НДІ експериментальної діагностики і терапії пухлин

    Класична теорія електрофорезу виходить з концепції: формування електричного заряду на поверхні неживої частки визначається тільки дисоціацією і адсорбцією іонів, спонтанним формуванням адсорбционного, подвійного електричного і дифузного шарів. При цьому величина подвійного електричного шару (ДЕС) залежить від якісного і кількісного складу дифузного шару (pH, іонна сила, температура і ін.)

    Ця ж концепція в даний час використовується для пояснення процесу формування поверхневого електричного заряду плазматичної мембрани клітини.

    Мета даного дослідження - критичний аналіз сучасної біофізичної теорії електрофорезу живих клітин.

    Матеріали та методи. В експерименті були використані наступні об'єкти дослідження: нормальні еритроцити і лейкоцити периферичної крові донорів, лейкозні клітини крові хворих з діагнозом хронічний лімфолейкоз, а також фізичні об'єкти - частинки кварцу, латексу, крохмалю, туші, полістиролу. Використовували вітальні барвники (метиленовий синій), алціановий синій для фарбування гликокаликса, світловий мікроскоп фірми «Ьекг» (Німеччина).

    Дослідження електрофоретичної рухливості досліджуваних об'єктів проводили в стандартній камері Абрамсона [7]. З цією метою в електродні відсіки, які мали платинові електроди і пористі перегородки, виготовлені з фільтрів Шамберлана, наливали 10% розчин №С1. На пористі перегородки з боку клітинної суспензії наливали розплавлений 2% агар, приготовлений на фізіологічному розчині (0,9% розчин 1ЧаС1), для запобігання від засмічення пір фільтрів Шамберлана частинками туші. Після застигання агару в камеру поміщали клітинну суспензію, приготовану з еритроцитів або лейкозних клітин крові людини і з'єднану з тушшю і розчином хлористого натрію в концентрації 5%. Входи в камеру закривали гумовими пробками і через 5-10 хв (після заспокоєння суспензії) на електроди подавали напругу. Відстань між електродами становила 150 мм, градієнт Е в місці дослідження електрофоретичної рухливості клітин дорівнював

    0,3 В / см. Обсяг електродних відсіків дорівнює 6,5 мл, обсяг камери, де проводилося вимірювання, 3,5 мл. Електричний опір заповненої камери з електродними відсіками становить 5000 Ом, що подається напруга від універсального джерела живлення УИП-1 дорівнювало 50 В.

    Електрофоретична рухливість досліджуваних об'єктів визначали за формулою:

    і =

    де О - діелектрична проникність, Е, - електрокінетіческій потенціал, г | - в'язкість рідини, і - електрофоретична рухливість - швидкість електрофорезу частки, Н - напруженість електричного поля.

    Камера, в якій ми проводили дослідження, відрізнялася від численних використовуваних камер тим, що висота плоского капіляра в ній дорівнювала 100 мкм, в той час як зазвичай використовується висота капіляра 600 мкм. Висота капіляра 100 мкм обумовлена ​​вивченням незвичайного об'єкта дослідження: клітина з набряклим гликокаликсом в середовищі інкубації з частинками туші (обмежена видимість об'єкта). За допомогою секундоміра і окуляр-мікрометра визначали швидкість руху клітин (часток) в прямому і зворотному горизонтальному напрямках.

    M. V. Golovanov

    ANALYSIS OF BIOPHYSICAL THEORY OF LIVING CELL ELECTROPHORESIS

    Research Institute of Experimental Diagnosis and Therapy of Tumors

    The classical theory of electrophoresis teaches that electric charge is formed on a non-living particle only due to ion dissociation and adsorption with spontaneous generation of an adsorption, a double electric and a diffuse layers. Thickness of the double electric layer (DEL) depends on qualitative and quantitative composition of the diffuse layer (pH, ionic strength, temperature, etc.)

    The same concept is currently used to explain the process of generation of surface electric charge on cell plasmatic membranes.

    The purpose of this study was to make a critical analysis of modern biophysical theory of living cell electrophoresis.

    Materials and Methods. The following objects were used in this study: normal peripheral red and white blood cells, leukemic blood cells from patients with chronic lymphatic leukemia as well as physical objects such as quartz, latex, starch, drawing ink, polystyrene; vital dyes (methylene blue), alcian blue were used to stain glycocalyx. Microscopy was performed using a Leitz (Germany) light microscope.

    Electrophoretic mobility of the subjects was studied in a standard Abramson's chamber [7]. 10% NaCl solution was poured in its electrode sections with platinum electrodes and porous partitions made of Chamberland filters. Melted 2% agar in 0.9%) saline was transferred onto the porous partitions from the side of cell suspension to protect the filter pores from ink particles. After agar setting cell suspension made of human red blood cells or leukemic cells and mixed with ink and 5%. NaCl solution was placed in the chamber. The chamber inlets were closed with rubber stoppers. At 5-10 min (after suspension settling) voltage was applied to the electrodes. The inter-electrode distance was 150 mm, gradient E in the place of cell electrophoretic mobility reading was 0.3 V / cm. The electrode section and the chamber volumes were 6.5 ml and 3.5 ml, respectively. Electric resistance of the filled chamber with electrode sections was 5,000 Ohm, voltage delivered from a UIP-1 universal power source was 50 V.

    Electrophoretic mobility of the tested object was calculated by formula:

    U = HDi, l4ia \,

    where D is the dielectric permeability; \ Is the electrokinetic potential; r) is the liquid viscosity; U is the electrophoretic mobility, particle electrophoretic velocity; H is the electric intensity.

    Unlike standard chambers with 600 mcm flat capillaries, our chamber was equipped with a 100 mcm flat capillary because the unusual tested objects, i.e. cells with swollen glycocalyx in ink-containing incubation medium, had limited visibility. Cell (particle) horizontal (direct and opposite) movement velocity was measured using a stop-watch and an ocular macrometer.

    Results and Discussion. We found experimentally that there was a clear-cut border line dividing the classical theory of electrophoresis of nonliving particles from a new biophysical theory of electrophoresis of living cells.

    According to the classical theory confirmed experimentally the DEL of a physical particle (quartz) reduces to zero (Z potential is zero) as the electrolyte solution ionic strength is increasing. As a result, the particle stops its movement in the external electric field [6].

    In contrast, living cells continue to move with increase in the electrolyte ionic strength, i.e. Z potential is not zero. This observation contra-

    Таблиця Table

    Рух зважених неживих частинок (кварц) і живих клітин (лейкоцитів) в зовнішньому електричному полі в залежності від іонної сили електроліту NaCI (Е = 100 В, pH 7,2, Т = 20 ° С, світловий мікроскоп, електрофоретична камера Абрамсона) Movement of non-living particles (quartz) and living cells (WBC) in external electric field with respect to ionic strength of electrolyte NaCI (E = 100 V, pH 7.2, T = 20 ° C, light microscope, Abramson electrophoresis chamber)

    Об'єкт Вода дистильована Іонна сила електроліту NaCI, моль / л

    0,017 0,034 0,068 0,154 0,85 1,7 2,6

    Товщина ДЕС (Angstrom) DEL thickness (Angstrom) [Debye P., Huchel E "1923] 26,0 10,2 7,1 5,0 3,2 2,1 1,9

    Живі клітини R = 5-6 мкм Living cells R = 5-6 mcm [Golovanov М., 1994] Набухання клітин Cell swelling + + + + +

    Частинки кварцу R = 1 -5 мкм Quartz particles R = 1 -5 mcm [Derjaguin В. V., Duhin S. S., 1976; Golovanov М., 1982] + + + + - - - -

    Кінець дії класичної теорії електрофорезу Classical theory of electrophoresis ends here ^ Початок дії біофізичної теорії електрофорезу Biophysical theory of electrophoresis starts here

    Object Distilled water Electrolyte NaCI ionic strength, mol / l

    «+» - рух є, «-» - руху немає. +, Movement; -, no movement.

    Результати та обговорення. Дослідним шляхом встановлено, що є чітка межа, на якій класична теорія електрофорезу неживих частинок закінчується і починається дія нової біофізичної теорії електрофорезу живих клітин.

    Відповідно до класичної теорії, підтвердженої експериментом, з підвищенням іонної сили розчину електроліту, ДЕС фізичної частки (кварцу) зменшується в розмірі і практично «схлопивается», г-потен-циал = 0. У результаті цього частка припиняє свій рух в зовнішньому електричному полі [6 ].

    У той же час живі клітини при підвищенні іонної сили електроліту продовжують свій рух, т. Е. 2-потенціал * 0. Цей факт суперечить поясненню переміщення живих клітин в зовнішньому електричному полі, виходячи тільки з фізико-хімічних процесів дисоціації і адсорбції іонів на поверхні частинки (табл. 1).

    Таке експериментальне поведінку живих і неживих об'єктів привело нас до необхідності детального аналізу будови ДЕС на поверхні клітини, аналізу процесу формування адсорбційного шару і шару протиіонів, функціонування селективного (гликокаликса) і дифузного шарів за межами плазматичної мембрани клітини, загальної концепції біофізичної теорії електрофорезу живих клітин.

    аналіз теорії

    Загальна концепція біофізичної теорії електрофорезу живих клітин [8-10] зводиться до наступних положень:

    1. ДЕС поверхні клітин є результат дії пасивних та активних процесів: іонізація молекул мембрани і перепис іонів з клітки через гликокаликс в міжклітинну середу.

    2. Шар потенциалопределяющих іонів формується на поверхні плазматичної мембрани і визначається спрямованої діяльністю клітини.

    3. Шар противоионов динамічно відповідає шару потенциалопределяющих іонів внаслідок електричної активності йоногенних груп плазматичноїмембрани і молекул гликокаликса (селективний шар).

    4. Величина електричного заряду на поверхні плазматичної мембрани визначається рівнем метаболізму, активністю молекул, що беруть участь у формуванні ДЕС живої клітини.

    5. Селективний шар - набухає гликокаликс (як депо рецепторів, молекулярних комплексів) функціонує як катіонообменнік, стабілізуючи і зберігаючи електричний заряд клітини.

    6. Міжклітинне середовище як депо вільних іонів формує дифузний шар, що визначає разом з гликокаликсом електричне взаємодія клітин.

    diets to the explanation of living cell movement in external electric field basing on the physico-chemical processes of ion dissociation and adsorption on particle surfaces (table 1).

    This experimental behavior of living and non-living objects made us analyze in detail composition of the cell surface DEL, generation of the adsorption and antiion layers, functioning of the selective (glycocalyx) and diffuse layers beyond the cell plasmatic membrane as well as the concept of biophysical theory of living cell electrophoresis in general.

    Analysis of the Theory

    The concept of the biophysical theory of living cell electrophoresis [8-10] is based on the following principles:

    1. The cell surface DEL is a result of active and passive processes, i.e. membrane molecule ionization and ion transfer from the cell through the glycocalyx to intercellular medium.

    2. A potential-determining ion layer is generated on plasmatic membrane surface and depends on cell specific activity.

    3. The antiion layer corresponds dynamically to the potential-determining ion layer due to the electric activity of plasmatic membrane and glycocalyx molecular ion-generation groups (selective layer).

    4. Magnitude of electric charge on cell membrane surface depends on degree of metabolism and activity of molecules contributing to DEL generation on the living cell.

    5. The selective layer, i.e. the swollen glycocalyx (as a depot of receptors and molecular complexes) fulfills the cation-exchange function: stabilizes and maintains the cell electric charge.

    6. Intercellular medium as a free ion depot forms a diffuse layer that together with the glycocalyx controls cell electric interactions.

    7. Changes in Z-potential mainly depend upon cell response to drugs, viruses, antigens and other substances or upon cell state, including activity, degree of differentiation or transformation (fig. 1).

    Of much importance in the biophysical theory is the purposeful process of electric charge generation by cells which depends upon cellular metabolism.

    The surface electric charge on living cells plays an important part in the organism life: it maintains the tissular and organic structure in compact, ready-to-operate state. The cellular and extracellular charges prevent dissociation of tissues or organs into individual cells as it happens in neoplastic disease, immune reactions, etc. The electric charge also provides functional interaction between cells, cell interaction with metabolites and other agents (viruses, microorganisms, etc.). The Z-potential stability can not be explained only by uncontrolled ion dissociation and adsorption on plasmatic membranes.

    В порядку дискусії

    клітка

    Cell

    плазматична

    мембрана

    Plasmatic

    membrane

    Адсорбційні шар Adsorption layer

    Подвійний електричний шар Double electric layer

    Селективний шар Selective layer

    Набряклий гл і до кал і кс Swollen glycocalyx

    Дифузний шар Diffuse layer

    міжклітинна

    середа

    Intercellular

    medium

    Мал. 1. Схема розташування адсорбционного, подвійного, селективного і дифузного шарів на поверхні живої клітини.

    Fig. 1. Diagram of the adsorption, selective and diffuse layers on living cell surface.

    7. Зміна значення Z-пoтeнціaлa в основному залежить від реакції клітини на дію ліків, вірусів, антигенів та інших речовин або її стану, включаючи активність, ступінь диференціації, трансформації (рис. I).

    Істотним фактором в біофізичної теорії є цілеспрямований процес формування кліткою електричного заряду, виходячи з відповідного рівня метаболізму клітини.

    Це пояснюється тим, що електричний заряд, розташований на поверхні живих клітин, грає важливу роль в житті організму: він тримає структуру тканин, органів у компактному, робочому стані. Клітини своїми зарядами в співтоваристві з зарядами в міжклітинному середовищі не дозволяють розвалитися тканини, органу на окремі клітини, як це відбувається при порушенні міжклітинних контактів при пухлинному процесі, імунних реакціях і ін. Електричний заряд забезпечує також функціональна взаємодія клітин між собою, з метаболітами і іншими об'єктами (вірусами, бактеріями). Стійкість величини пана потенціалу неможливо обгрунтувати тільки некерованими процесами дисоціації і адсорбції іонів на поверхні плазматичної мембрани.

    Значення постійної величини електричного заряду відповідних клітин тканини, органу, організму можна співвіднести з іншими постійними фізіологічними параметрами організму: температура тіла, pH периферичної крові.

    Аналіз будови ДЕС живих клітин

    Найважливішим поняттям в явищі електрофорезу - рух заряджених частинок під дією електричного поля - є поняття ДЕС на поверхні частинки.

    Для живої клітки ДЕС формується в результаті двох процесів: пасивного і активного.

    Пасивний процес відбувається за рахунок дисоціації йоногенних груп молекул поверхні плазматичної мембрани в розчині електроліту, активний процес - за рахунок перенесення іонів з цитоплазми

    Мал. 2. Періодична структура лейкозних клітин крові (хронічний лімфолейкоз), утворена з лейкоцитів, що мають набряклий гликокаликс близько поверхні плазматичної мембрани (світловий мікроскоп. Ув. Х 100. Фон "- туш).

    Fig. 2. Periodical structure of leukemic blood cells (chronic lymphatic leukemia) formed of leukocytes having a swollen glycocalyx near plasmatic membrane surface.

    Values ​​of constant electric charges of certain cells of a tissue or an organ may be related to other constant physiological parameters, such as body temperature, peripheral blood pH, etc.

    Analysis of Living Cell DEL Structure

    The surface DEL concept is a key notion of electrophoresis, i.e. movement of charged particles in electric field.

    The DEL on a living cell is formed as a result of an active and a passive processes.

    The passive process involves dissociation of molecular ion-generation groups on membrane surface in electrolyte solutions. The active process is ion transfer from cytoplasm through plasmic membrane and glycocalyx into intercellular medium depending on living cell metabolism.

    The DEL resulting from the passive process consists of an adsorption and an antiionic layers.

    The adsorption layer consists of charges of molecular ionogenic groups on plasmatic membranes and depends on cell metabolism, membrane molecular composition and dissociation and adsorption of mobile ions. The antiionic layer is composed of free ionic charges located in the selective layer.

    The DEL formation due to the active process is a many-step transfer of a charged particle (ion) from cytoplasm into intercellular medium through cell membranes. Here again it is cell vital activity that plays the leading role by determining functions of membrane and glycocalyx ion carriers .

    Under electrokinetic effects the layer of water moleculcs adjacent to plasmatic membrane surface remains immobile while the next layers are mobile [2,3,5].

    Analysis of Functioning of Glycocalyx Selective Layer

    Glycocalyx regulates positive to negative ionic ratio near the DEL. It plays the role of cation-exchanger [1,4,9] and actively changes dielectric

    крізь плазматичну мембрану і гликокаликс в міжклітинну середу, тобто завдяки метаболізму живої клітини.

    ДЕС в разі пасивного процесу можна представити у вигляді двох взаємодіючих шарів: адсорбционного і відповідного йому шару протиіонів.

    Адсорбційний шар представлений зарядами йоногенних груп молекул плазматичноїмембрани і визначається метаболізмом клітини, молекулярною структурою плазматичноїмембрани, а також процесами дисоціації і адсорбції рухливих іонів. Шар противоионов представлений вільними зарядами іонів, локалізованими в селективному шарі.

    У разі активного процесу формування ДЕС можна представити у вигляді багатоступінчастого перенесення зарядженої частинки (іони) з цитоплазми в міжклітинну середу через поверхню клітини. Провідна роль в цьому випадку також належить життєдіяльності клітини, яка виражається у функціях переносників іопов, що знаходяться в плазматичній мембрані і глікокаліксі.

    Шар молекул води, що безпосередньо прилягає до поверхні плазматичної мембрани, при електрокінетичних явищах залишається нерухомим, тоді як наступні шари рухливі [2, 3, 5].

    Аналіз функціонування селективного шару глікокаліксу

    Фактором, що регулює співвідношення позитивних і негативних іонів поблизу ДЕС, є гликокаликс, який виконує в клітині функцію катіонообменнік [1, 4, 9] і активно змінює такі параметри, як діелектрична проникність і в'язкість рідини у формулі (1).

    Електроліти та інші речовини надходять в клітину з міжклітинної середовища і видаляються з неї шляхом пасивного і активного транспорту: пасивний - за допомогою дифузії, а активний - за допомогою електрохімічних процесів, тобто процесів, пов'язаних з перенесенням іонів.

    Виходячи з цього, ми вважаємо, що електричний заряд на поверхні живої клітини формується таким чином.

    Іони, що несуть електричний заряд, постійно і цілеспрямовано поставляються на поверхню клітини внаслідок метаболічної процесів в клітці, коли переносник на внутрішній поверхні мембрани (або в самій мембрані) захоплює з цитоплазми від Поліаніонна катіони і переносить їх крізь мембрану на зовнішню поверхню плазматичної мембрани клітини.

    Тут за допомогою катіонообменнік (гликокаликса як депо позитивних іонів) катіони отщепляются, а до переносники приєднуються більш-менш енергетично активні катіони (іони калію або водню або інші), з якими він рухається знову до внутрішньої поверхні плазматичної мембрани клітини.

    Електричний заряд постійно і цілеспрямовано стікає з поверхні клітини внаслідок динамічного нерівноваги зарядів в міжклітинну середу за допомогою гликокаликса, а на поверхні плазматичної мембрани деякий час залишається негативний електричний заряд, який потім нейтралізується позитивним зарядом. Гликокаликс діє як донор-акцептор іонів, представляючи собою об'ємний масив електричних зарядів обох знаків (гігантські Поліаніонна типу ДПА-луроновой кислоти), в тому випадку, якщо клітина забирає необхідні їй іони з міжклітинної середовища.

    В реакції клітини на зовнішнє електричне поле набряклий в електроліті гликокаликс електрично пасивний (електрично нейтральний) і переміщається разом з кліткою як її структурний елемент, відстаючи від клітини в своєму русі.

    Вважається загальноприйнятим положення, що йоногенних групи знаходяться на поверхні клітин і можуть змінювати своє положення, кількість, структуру і це відбивається на динаміці електричного заряду.

    Постійний електричний заряд клітини формується на поверхні плазматичної мембрани, а її рецептори розташовані в глікокаліксі, виконуючи не тільки фізіологічні функції (реакції антиген - антитіло, контакт з вірусами, бактеріями), але і функції катіонообменнік.

    Зовнішній прімембранной шар - гликокаликс, динамічно змінюючи свій обсяг і як наслідок стабілізуючи кількість іонів (катіонів та аніонів) в ДЕС на поверхні плазматичної мембрани і в дифузному шарі, першим бере участь в контакті зі своїми і чужорідними клітинами, молекулами, іонами і т. Д ., тобто гликокаликс визначає не тільки імунологічні, а й біологічні процеси в самій клітці і на її поверхні (рис. 2).

    Аналіз дифузного шару

    Функціональні особливості міжклітинної середовища сприяють формуванню дисперсійного середовища за межами клітинної поверхні, тобто в межах 10 мкм відстані між клітинами. У цьому проміжку знаходяться: вода, метаболіти, елементи зруйнованих клітин, іони і ін. Саме через цей найважливіший шар і за його безпосередньої участі відбувається взаємодія клітин одна з одною, з вірусами, бактеріями і т. Д.

    Дана стаття виконана за активної участі проф. J. Bauer, Institut Max-Planck f. biochemia, Martinsried, Germany.

    permeability and liquid viscosity in formula (1).

    Electrolytes and other substances penetrate into cells from intercellular medium and are evacuated from them by active (electrochemical) and passive (diffusion) transport.

    Thus, generation of electric charge on living cell surface proceeds as follows.

    Electric charge carrier ions are pushed continuously to the cell surface due to cellular metabolic processes, i.e. a carrier on the membrane internal surface (or inside the membrane) catches cytoplasmatic cations to transfers them through the membrane onto the membrane external surface.

    Then the cations split off under the action of glycocalyx while more or less active cations (potassium or hydrogen ions) adhere to the carrier to be transported again to the membrane internal surface.

    The electric charge continuously flows down from the cell surface into the intercellular medium due to charge dynamical dysbalance, though negative charge remains for some time on membrane surface to be further neutralized by positive charge. Glycocalyx acts as an ion donor-acceptor and contains a large amount of positive and negative charges (giant polyanions such as hyaluronic acid) if the cell takes ions from intercelular medium.

    When a cell reacts to external electric field the swollen glycocalyx is electrically passive (neutral) and moves together with the cell as its structural element.

    It is commonly adopted that the ionogenic groups are located on cell surface and may change their position, quantity, structure, with the changes influencing electric charge dynamics.

    Constant electric charge is formed on cell membranes, their receptors are located in glycocalyx and fulfill both physiological (antigen-antibody reactions, interaction with viruses and bacteria) and cation-exchange functions.

    The glycocalyx (an external layer adjacent to the membrane) changes in volume and thus stabilizes the ion (cation and anion) number in the cell surface and diffuse layer DEL; it is the first element to meet self and foreign cells, molecules, ions etc. Thus, the glycocalyx plays an active part in both physiological and biological processes on the cell surface and inside the cell (fig.2).

    Analysis of the Diffuse Layer

    Intercellular medium functional peculiarities influence disperse medium beyond cell surface, i.e. within 10 mcm of intercellular distance. This space contains water, metabolites, cell destruction remnants, ions etc. This layer plays the most important role in intercellular interactions, in cell interactions with viruses, microorganisms etc.

    This study was performed with an active participation of Professor J.Bauer, Institut Max-Planck f. biochemia. Martinsried, Germany.

    ЛІТЕРА ТУРУ / REFERENCES

    1. Голованов М. В., Дерягин Б. В. // Докл. АН СРСР. - 1983. - Т. 272, № 2. - С. 479-480.

    2. Голованов М. В. // Біофізика. - 1991. - Т. 36, № 3. - С. 463- 466.

    3. Голованов М. В. // Колоїд, журі. - 1991. - Т. 53, № 3. - С. 449-452.

    4. Голованов М. В., Дерягин Б. В. // Бюл. експер. біол. - 1992. -

    Ха 8. - С. 210-211.

    5. Голованов М. В. І Біофізика. - 1995. - Т. 40, вип. 2. - С. 372-376.

    6. Духіп С. С., Дерягин Б. В. // Електрофорез. - М., 1976. - С. 332.

    7. Abramson Н. A. I /}, exp. Med. - 1928. - N 47. - Р. 677.

    8. Bauer J. (Ed.) The negative surface charge density of cells and their actual state of differentiation or activation, in Cell Electrophoresis. - Boca Raton, 1994. - P. 267-280.

    9. Golovanov М. V. Electophoresis of cells at a physiologic high ionic strenght, in Cell Electrophoresis / Ed. J. Bauer. - Boca Raton,

    1994.- P. 181-198.

    10. Golovanov М. V., Bauer J. Herald of the Cancer Research Center of AMS ofRussia. - Moskow, 1997. - Vol. 3. - P. 19-24.

    Надійшла 16.01.98 / Submitted 16.01.98


    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити