При експериментальному гематогенном іпелонефріте у щурів різко змінювалася активність маркерів клітин: Пригнічення активності НАДФ-оксидази нейтрофілів, Mg2 + АТФази еритроцитів, зниження концентрації ФДФ в лімфоцитах і підвищення вмісту МДА в тромбоцитах. Системне введення цефтриаксону тваринам з пієлонефритом достовірно знижувало активність метаболічних маркерів нейтрофілів, лімфоцитів, еритроцитів і підвищувало рівень МДА в тромбоцитах. Вступ еритроцитарної форми цефтриаксона нормалізовало порушену при пієлонефриті активність метаболічних маркерів: підвищувалася активність Mg2 + АТФази еритроцитів, НАДФНоксідази лейкоцитів, ФДФ в лімфоцитах і знижувався рівень МДА в тромбоцитах.

Анотація наукової статті з фундаментальної медицини, автор наукової роботи - братчиків О.І., Сипливий Г.В., Іпатов В.Ю., Кукуреку А.В., Яцюк В.Я.


ACTIVITY OF MARKERS OF BLOOD CELLS IN PYELONEPHRITIS AND THE INTRODUCTION OF ERYTHROCYTE FORMS CEFTRIAXONE

In experimental hematogenous ipelonefrite rats dramatically altered cell activity markers inhibition activity of NADPH oxidase of neutrophils, Mg2 + ATPase activity of red blood cells, reducing the concentration of FDF in lymphocytes and increase MDA content in platelets. Systemic administration of ceftriaxone animals with pyelonephritis significantly reduced the activity of metabolic markers of neutrophils, lymphocytes, red blood cells and increases the level of MDA in platelets. Introduction cell form of ceftriaxone in pyelonephritis normalized impaired activity of metabolic markers: increased activity of Mg2 + ATPase activity of red blood cells, white blood cells NADFNoxidase, FDF in lymphocytes and decreased the level of MDA in platelets.


Область наук:
  • фундаментальна медицина
  • Рік видавництва діє до: 2016
    Журнал: Міжнародний науково-дослідний журнал

    Наукова стаття на тему 'АКТИВНІСТЬ МАРКЕРІВ КЛІТИН КРОВІ ПРИ пієлонефрит І ВВЕДЕННЯ ЕРИТРОЦИТАРНОЇ ФОРМИ ЦЕФТРІАКСОНУ'

    Текст наукової роботи на тему «АКТИВНІСТЬ МАРКЕРІВ КЛІТИН КРОВІ ПРИ пієлонефрит І ВВЕДЕННЯ ЕРИТРОЦИТАРНОЇ ФОРМИ ЦЕФТРІАКСОНУ»

    ?DOI: 10.18454 / IRJ.2016.54.072 братчиків О.І.1, Сипливий Г.В.2, Іпатов В.Ю.3, Кукуреку А.В.4, Яцюк В.Я.5, Сіплівая Л.Е.6

    професор, доктор медичних наук, Курський державний медичний університет; 2доцент, доктор

    медичних наук, Курський державний медичний університет; 3аспірант, Курський державний медичний університет; 4кандідат фармацевтичних наук, Курський державний медичний університет;

    5профессор, доктор фармацевтичних наук, Курський державний медичний університет; 6ORCID: 00000003-0195-8950, професор, доктор біологічних наук, Курський державний медичний університет АКТИВНІСТЬ МАРКЕРІВ КЛІТИН КРОВІ ПРИ пієлонефрит І ВВЕДЕННЯ ЕРИТРОЦИТАРНОЇ ФОРМИ ЦЕФТРІАКСОНУ

    анотація

    При експериментальному гематогенном іпелонефріте у щурів різко змінювалася активність маркерів клітин: пригнічення активності НАДФ-оксидази нейтрофілів, Mg2 + - А ТФази еритроцитів, зниження концентрації ФДФ в лімфоцитах і підвищення вмісту МДА в тромбоцитах. Системне введення цефтриаксону тваринам з пієлонефритом достовірно знижувало активність метаболічних маркерів нейтрофілів, лімфоцитів, еритроцитів і підвищувало рівень МДА в тромбоцитах. Введення еритроцитарної форми цефтриаксона нормалізовало порушену при пієлонефриті активність метаболічних маркерів: підвищувалася активність Mg2 + - АТФази еритроцитів, НАДФН- оксидази лейкоцитів, ФДФ в лімфоцитах і знижувався рівень МДА в тромбоцитах.

    Ключові слова: маркери клітин, експериментальний пієлонефрит, еритроцитарна форма цефтриаксона.

    Bratchikov O.I.1, Sipliviyi G.V.2, Ipatov V.Yu.3, Kukureka A.V.4, Yatsuk V.Ya.5, Siplivaya L.E.6

    1Professor, MD, Kursk State Medical University; 2Assosiate professor, MD, Kursk State Medical University;

    3Postgraduate student, Kursk State Medical University; 4PhD in Pharmaceutics, Kursk State Medical University; 5Professor, PhD in Pharmaceutics, Kursk State Medical University; 6ORCID: 0000-0003-0195-8950, Professor,

    PhD in Biology, Kursk State Medical University ACTIVITY OF MARKERS OF BLOOD CELLS IN PYELONEPHRITIS AND THE INTRODUCTION

    OF ERYTHROCYTE FORMS CEFTRIAXONE

    Abstract

    In experimental hematogenous ipelonefrite rats dramatically altered cell activity markers inhibition activity of NADPH oxidase of neutrophils, Mg2 + - ATPase activity of red blood cells, reducing the concentration of FDF in lymphocytes and increase MDA content in platelets. Systemic administration of ceftriaxone animals with pyelonephritis significantly reduced the activity of metabolic markers of neutrophils, lymphocytes, red blood cells and increases the level of MDA in platelets. Introduction cell form of ceftriaxone in pyelonephritis normalized impaired activity of metabolic markers: increased activity of Mg2 + - ATPase activity of red blood cells, white blood cells NADFN- oxidase, FDF in lymphocytes and decreased the level of MDA in platelets.

    Keywords: markers of cells, experimental pyelonephritis, erythrocyte form of ceftriaxone.

    Пієлонефрит - одне з найпоширеніших захворювань у людини і займає друге місце після про стрих респіраторних інфекцій. Пієлонефрит є основою глибоких морфологічних і ензімопатіческіх порушень в нирках, що в свою чергу викликає системні иммунометаболическая зміни [1]. У регуляції механізмів імунологічного захисту організму при пієлонефриті беруть участь нейтрофіли, лімфоцити, еритроцити, тромбоцити. Метаболічним маркером нейтрофілів може служити активність НАДФН-оксидази, лімфоцитів - концентрація фруктози-2,6-дифосфата (ФДФ), еритроцитів -активність Mg ^ -атф -ази, тромбоцитів - вміст МДА.

    Мета роботи. З'ясувати вплив еритроцитарної форми цефтриаксона на активність маркерів клітин крові при експериментальному пієлонефриті.

    Матеріали та методи. Дослідження проведені на білих безпородних щурах масою 180 - 200 г. Всі тварини містилися в однакових умовах, на звичайному харчовому раціоні. Для отримання статистично достовірних результатів групи формувалися з 9 тварин, приблизно одного віку. Розкид в групах по вихідній масі не перевищував 10%. Всі дослідження проводили в один і той же час доби з 8.00 до 12.00 з дотриманням принципів, викладених в Конвенції по захисту хребетних тварин, що використовуються для експериментальних та інших цілей (Страсбург, Франція, 1986). Експериментальний пієлонефрит моделювали шляхом одноразового внутрішньошлункового введення ртуті дихлорида 2 мг / кг і внутрішньовенної ін'єкції попередньо відтитрувати доз добової агарної культури Staphylococcus aureus, що містять 1 * 108 мікробних тіл в 0,5 мл розчину.

    Для підтвердження розвитку необструктивного пієлонефриту проведено визначення клінічних показників (маса і температура тіла), лабораторних та гематологічних показників (кількість і співвідношення формених елементів крові, концентрації сечовини і креатиніну в крові) [2], морфологічних і ензиматичних змін в нирках.

    У роботі в якості антибактеріального препарату використовували цефтриаксон (Індія). При системному введенні цефтриаксон вводили в дозі 15 мг / кг внутрішньовенно, одноразово.

    Для включення цефтриаксона в строму еритроцитів (ЕН) використовували метод гіпоосмотіческая гемолізу, що дозволяє ввести максимально можливу кількість препаратів (еритроцитарна форма) [3, С. 19-20], [4, С. 5456]. У частині дослідів в інкубаційного середовища додавали АТФ в кількості 0,5 мл.

    Визначення цефтриаксона в біоматеріалу проводили згідно з нормативною документацією на субстанцію препарату (високоефективної рідинної хроматографією).

    Активність НАДФН-оксидази визначали спектрофотометрической методикою на спектрофотометрі СФ 2000. Використовували квадратні кювети з товщиною шару 10 мм. Обсяг проби дорівнював 3 мл. До складу проби входили №- ^ фосфатний буфер, гомогенат клітин (1 млн / мл), субстрат НАДФН (0,5 нмоль / мл). Контрольна проба не містила субстрату. Визначення проводили при кімнатній температурі. Активність ферменту оцінювали за швидкістю НАДФН-оксігеназной реакції, яка розраховується за убутку поглинання НАДФН (за рахунок його окислення) при довжині хвилі 340 нм [5, С. 14-18].

    Тромбоцити з крові виділяли за методикою, описаної Єрмолаєвої Т.А. з співавторами [6, С. 33-38]. Метаболічний маркер тромбоцитів МДА визначали за методикою Негреску Є.В. з співавторами [7, С. 36-39].

    Лімфоцити периферичної крові виділяли по Т.В. Федосеевой зі співавторами і визначали в них зміст ФДФ [8, С. 232-237].

    Показником активності еритроцитів може служити Mg2 + -ATФаза, яку визначали за методикою Рижкова Г.Ф. і Вишнякова С.І. [9].

    Статистичну обробку результатів дослідження проводили шляхом обчислення середніх арифметичних досліджуваних показників (ОД і їх стандартних помилок Суттєвість відмінностей середніх величин оцінювали за критеріями Стьюдента і Вілкоксона-Манна-Уїтні [10].

    Результати дослідження та їх обговорення.

    Встановлено, що введення ртуті дихлорида спільно з мікробним агентом викликало розвиток необструктивного гематогенного пієлонефриту, подтверждающееся клінічними показниками: гіпертермія, зниження ваги на 12-14%, порушення видільної функції нирок (табл. 1).

    Таблиця 1 - Зміна функціональних показників у тварин з необструктивним пієлонефритом

    показник Група

    Контроль (здорові щури) Введення ртуті дихлорида і стафілокока

    Температура тіла, ° С 41,5 ± 0,5 43,8 ± 0,4

    Маса тіла, г 153,4 ± 11,8 125,2 ± 10,3

    Сечовина, ммоль / л 132,4 ± 13,2 278 ± 27,1 *

    Креатинін, ммоль / л 11,8 ± 1,4 37,5 ± 3,6 *

    Примітка. * Вказує на достовірність відмінностей між групами (р<0,05).

    Аналіз видільної функції нирок показав різке підвищення рівня в крові сечовини в 1,75 -2,2 рази і креатиніну в 1,8-3,2 рази, поява лейкоцитів і білка в сечі (табл. 1).

    Встановлено зміни лейкоцитарної формули - збільшення кількості лейкоцитів на 30-35%, зменшення кількості лімфоцитів на 20-24% і підвищення кількості нейтрофілів крові на 21-23%. У нирках відзначено зниження активності СДГ, ГДГ, ЛФ в 1,9-2,3 рази, на тлі високої активності ЛДГ, виявлені морфологічні зміни (вогнищеві скупчення лейкоцитів у вигляді мікроабсцесів) (рис. 1). В ході приготування гістологічних препаратів використовувалася забарвлення гематоксиліном і еозином. При фарбуванні цитоплазма клітин забарвлюється в рожевий колір, ядра в фіолетовий.

    Аналіз патологічних змін в мозковій речовині нирок показав численні вогнищеві некрози, місцями зруйновані канальці і на їх місці вогнищеві скупчення лейкоцитів - мікроабсцеси.

    * 1

    Мал. 1 - Морфологічні зміни в препаратах нирок при пієлонефриті. Забарвлення гематоксиліном і еозином

    Примітка: збільшення * 400

    У тварин з пієлонефритом відзначено значне пригнічення активності НАДФН-оксидази нейтрофілів, М ^ -АТФази еритроцитів, зниження концентрації ФДФ в лімфоцитах і підвищення вмісту МДА в тромбоцитах.

    Системне введення цефтриаксону тваринам з пієлонефритом достовірно знижувало активності метаболічних маркерів нейтрофілів, лімфоцитів, еритроцитів і підвищувало рівень МДА в тромбоцитах. У зв'язку з отриманими даними цікаво було вивчити вплив еритроцитарної форми цефтриаксона на функціональну активність клітин при пієлонефриті. Встановлено, що введення ЕН з включеними антибактеріальним препаратом підвищувало активності НАДФ-оксидази нейтрофілів, М ^ -АТФази еритроцитів, концентрацію ФДФ в лімфоцитах і знижувало вміст МДА в тромбоцитах (табл. 2).

    Таблиця 2 - Вплив еритроцитарної форми цефтриаксона на показники функціональної активності клітин

    крові при пієлонефриті

    Умови досвіду НАДФН-оксидаза нейтрофілів ФДФ лімфоцитів Mg2 + АТФаза еритроцитів МДА тромбоцитів

    1.Здоровие тварини 1,34 ± 0,23 1,1 ± 0,21 0,76 ± 0,06 0,62 ± 0,05

    2. Тварини з 0,61 ± 0,07 * 1 0,71 ± 0,06 * 1 0,52 ± 0,04 * 1 0,82 ± 0,07 * 1

    пієлонефрит

    3. Тварини з

    пієлонефрит + ЕН з цефтріаксоном 0,82 ± 0,06 * 1,2 0,85 ± 0,07 * 1,2 0,64 ± 0,05 * 1,2 0,76 ± 0,06 * 1,2

    Примітка. * І цифра поруч в цій і наступних таблицях вказують на достовірність відмінностей між групами ф<0,05).

    Обмін макроергічних сполук в еритроцитах в значній мірі визначається активністю мембранних АТФаз, що здійснюють енергозалежний перенесення іонів через цитоплазматичну мембрану клітин. Особливий інтерес представляють М? +2 - АТФаза, «накачують» в еритроцити іони магнію, що активують більшість ферментів гліколізу [11] і в формі Mg-АТФаз, що підвищують активність №, К і Са 2+.

    У зв'язку з викладеним великий інтерес представляло з'ясування впливу ЕН з іммобілізованим в присутності або без АТФ цефтріаксоном на активність Mg + 2-АТФази мембрани еритроцитів. Виявилося, що активність Mg + 2-АТФази підвищувалася тільки в разі введення ЕН з включеним в присутності АТФ цефтріаксоном. Отримані результати підтверджують, що необхідною умовою активації Mg + 2-АТФаз мембраниеритроцитів служить збільшення біологічної доступності, внаслідок можливого утворення органічних комплексів з АТФ (табл. 3).

    Таблиця 3 - Активність Mg + 2-АТФази в стромі еритроцитів щурів, які отримували ін'єкції ЕН з _іммобілізованним в присутності АТФ цефтріаксоном_

    Умови досвіду Активність Mg + 2-АТФази (мкмоль фосфату на 1г білка в годину)

    1. Контроль (строма еритроцитів інтактних щурів) 0,67 ± 0,08

    2. Строма еритроцитів щурів з пієлонефритом, які отримували ЕН з фізіологічним розчином 0,39 ± 0,04 * 1

    3. Строма еритроцитів щурів з пієлонефритом, які отримували ЕН з цефтріаксоном 0,51 ± 0,05 * 1

    4. Строма еритроцитів щурів з пієлонефритом, які отримували ЕН з цефтріаксоном в присутності АТФ 0,73 ± 0,06 * 2

    висновок.

    Таким чином, встановлено, що введення клітинної форми (еритроцитарної) цефтриаксона нормалізовало порушену при пієлонефриті активність метаболічних маркерів: підвищувало активності Mg ^ -АТФази еритроцитів, НАДФН-оксидази лейкоцитів, ФДФ в лімфоцитах і знижувало рівень МДА в тромбоцитах.

    Встановлені зміни можуть бути рекомендовані в якості додаткових критеріїв для прогнозування иммунометаболическая активності клітинних форм хіміопрепаратів в умовах необструктивного пієлонефриту.

    Список літератури / References

    1. Єсілевський Ю.М. Патогенез пієлонефриту / Ю.М. Єсілевський. -М .: МЕДпресс-інформ, 2007. - 368 с.

    2. Меньшиков В.В. Лабораторні методи дослідження в клініці: довідник / ред. В.В. Меньшиков. - М .: Медицина, 1987. - 365 с.

    3. Генинг Т.П. Фармакокінетика антибіотика, введеного в організм в клітинних носіях / Т.П. Генинг, К.К. Мануйлов // Антибіотики і хіміотерапія. - 1991. - № 9. - С. 19-20.

    4. Жумаділов Ж.Ш. Особливості включення деяких антибіотиків в еритроцитарні тіні - систему цілеспрямованої доставки хіміотерапевтичних препаратів / Ж.Ш. Жумаділов, Р.В. Макаренкова // Антибіотики і хіміотерапія. - 1990. - Т. 35, № 11, - С. 54-56.

    5. Рибников В.Н. Імуномодулююча дія еритроцитів і їх строми інкубованих з менадионом і

    гетерополісахарид Poligonaceae при гострій крововтраті / В.Н. Рибников, І.Л. Бровкіна, М.Г. Газазян // Антибіотики і хіміотерапія. - 2003. - Т.48, №4. - С. 14-18.

    6. Єрмолаєва Т.А. Методи виділення з крові інтактних тромбоцитів / Т.А. Єрмолаєва, О.Г. Головіна, В.М. Пономаренко // Лабораторна справа. -1991. - № 10. - С. 33-38.

    7. Негреску Є.В. Антиоксиданти, перекисне окислення ліпідів і рецепторзавісімое збільшення концентрації Са2 + в тромбоцитах людини / Є.В. Негреску, А.В. Лебедєв, Г.Н. Балденков і ін. // Питання медичної хімії. -1992. - Т. 38, вип. 1.- С. 36-39.

    8. Коровкін Б.Ф. Зміна змісту фруктозо-2,6-біфосфату в лімфоцитах периферичної крові хворих на цукровий діабет // Б.Ф. Коровкін, Н.Ф. Бєляєва, С.А. Крайовий і ін. // Питання медичної хімії. -1999.- Т. 45, вип. 3. - С. 232-237.

    9. Рижкова Г.Ф. Методичний посібник по виділенню, очищення та визначенню активності транспортних АТФаз у органах і тканинах тварин / Г.Ф. Рижкова, С.І. Вишняков. - Воронеж, 2005. - 31 с.

    10. Гублер Б.В. Обчислювальні методи аналізу та розпізнавання патологічних процесів / О.В. Гублер. - Л .: Медицина, 1978. - 294 с.

    11. Ленинджер А. Основи біохімії / А. Ленинджер // М .: Мир. - 1985, Т.1. - 365 с.

    Список літератури англійською мовою / References in English

    1. Esilevskij Ju.M. Patogenez pielonefrita [The pathogenesis of pyelonephritis] / Ju.M. Esilevskij. -M .: MEDpress-inform, 2007. - 368 p. [In Russian]

    2. Men'shikov V.V. Laboratornye metody issledovanija v klinike: spravochnik [Laboratory Methods in the clinic: a guide] / edited by V.V. Men'shikov. - M .: Medicina, 1987. - 365 p. [In Russian]

    3. Gening T.P. Farmakokinetika antibiotika, vvodimogo v organizm v kletochnyh nositeljah [Pharmacokinetics of antibiotic administered to an organism in cell media] / T.P. Gening, K.K. Manujlov // Antibiotiki i himioterapija [Antibiotics and Chemotherapy]. - 1991. - № 9. - P. 19-20. [In Russian]

    4. Zhumadilov Zh.Sh. Osobennosti vkljuchenija nekotoryh antibiotikov v jeritrocitarnye teni - sistemu celenapravlennoj dostavki himioterapevticheskih preparatov [Features include some antibiotics in erythrocyte shadows - a system of targeted delivery of chemotherapy drugs] / Zh.Sh. Zhumadilov, R.V. Makarenkova // Antibiotiki i himioterapija [Antibiotics and Chemotherapy]. - 1990. - V. 35, № 11, - P. 54-56. [In Russian]

    5. Rybnikov V.N. Immunomodulirujushhee dejstvie jeritrocitov i ih stromy inkubirovannyh s menadionom i geteropolisaharidami Poligonaceae pri ostroj krovopotere [Immunomodulatory effect of red blood cells and their stroma incubated with menadione and Poligonaceae heteropolysaccharide in acute blood loss] / V.N. Rybnikov, I.L. Brovkina, M.G. Gazazjan // Antibiotiki i himioterapija [Antibiotics and Chemotherapy]. - 2003. - V.48, №4. - P. 14-18. [In Russian]

    6. Ermolaeva T.A. Metody vydelenija iz krovi intaktnyh trombocitov [Methods of isolation of intact blood platelets] / T.A. Ermolaeva, O.G. Golovina, V.M. Ponomarenko // Laboratornoe delo [Laboratory case]. -1991. - № 10. - P. 33-38. [In Russian]

    7. Negresku E.V. Antioksidanty, perekisnoe okislenie lipidov i receptorzavisimoe uvelichenie koncentracii Ca2 + v trombocitah cheloveka [Antioxidants, lipid peroxidation and retseptorzavisimoe increase in Ca2 + concentration in human platelets] / E.V. Negresku, A.V. Lebedev, G.N. Baldenkov and others // Voprosy medicinskoj himii [Problems of Medical Chemistry]. - 1992. - V. 38, Issue 1.- P. 36-39. [In Russian]

    8. Korovkin B.F. Izmenenie soderzhanija fruktozo-2,6-bifosfata v limfocitah perifericheskoj krovi bol'nyh saharnym diabetom [Changing the content of fructose-2,6-biphosphate in peripheral blood lymphocytes of patients with diabetes mellitus] // B.F. Korovkin, N.F. Beljaeva, S.A. Kraevoj and others // Voprosy medicinskoj himii [Problems of Medical Chemistry]. -1999.- V. 45, Issue 3. - P. 232-237. [In Russian]

    9. Ryzhkova G.F. Metodicheskoe posobie po vydeleniju, ochistke i opredeleniju aktivnosti transportnyh ATFaz v organah i tkanjah zhivotnyh [Tool for isolation, purification and identification of transport ATPase activity in the organs and tissues of animals] / G.F. Ryzhkova, S.I. Vishnjakov. - Voronezh, 2005. - 31 p. [In Russian]

    10. Gubler B.V. Vychislitel'nye metody analiza i raspoznavanija patologicheskih processov [Computational methods of analysis and detection of pathological processes] / E.V. Gubler. - L .: Medicina, 1978. - 294 p. [In Russian]

    11. Lenindzher A. Osnovy biohimii [Fundamentals of Biochemistry] / A. Lenindzher // M .: Mir. - 1985, V.1. - 365 p. [In Russian]


    Ключові слова: МАРКЕРИ КЛІТИН / MARKERS OF CELLS / ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИЙ ПИЕЛОНЕФРИТ / EXPERIMENTAL PYELONEPHRITIS / Еритроцитарної ФОРМА ЦЕФТРІАКСОНУ / ERYTHROCYTE FORM OF CEFTRIAXONE

    Завантажити оригінал статті:

    Завантажити